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时间:2019-03-19
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1、显微镜油浸镜的使用实验目的熟练掌握显微镜油浸镜的使用和保护方法。一、油浸镜的原理油浸镜使用的镜油折光率与玻片相近似,能抵消空气引起的散光现象。自标本玻片透过的光线,因介质密度(从载玻片至空气,再进入油镜)不同,有些光线因折射或全反射,不能全部进入透镜,致使物象显现不清。若在油镜与载物玻片中间加入和玻璃折光率(n=1.52)相仿的香柏油(n=1.5l5),则使通过的光线无有损失,进入透镜的光通量增多,视野的亮度也就增强了,因此便获得清晰的物像。二、油浸镜的使用方法1.双手托持显微镜,轻放于自己面前的实验台上,镜座距实验
2、台边缘约5厘米。2.上升集光器与载物台相平,将反光镜对准光源(自然光线用平面镜、人工光源用凹面镜),光圈完全打开以增大射入光线强度。3.用低倍接物镜调整光线,看染色标本时要求视野达到最亮的程度。4.在标本上滴一滴香柏油,再将标本置于载物台上,用弹簧夹固定。5.转动旋转盘,调换油浸镜头,眼睛从镜筒侧面注视油镜头,再小心转动粗调节器,使镜头缓慢下降,或缓慢上升载物台,使镜头浸入油中至几乎与玻片接触为止,切勿相撞。这样做的目的是防止镜头压碎玻片而损坏镜头。 6.在完成上述操作之后,再一面从接目镜观察,一面慢慢转动粗调节器,
3、使油镜头远离玻片。当见到视野出现模糊物像时,立即停止,再用细调节器调到物像清晰为止。 7.镜检完毕,转动粗调节器使油浸镜头远离载物台,用拭镜纸轻轻顺一个方向擦去油渍,必要时用擦镜纸蘸少许二甲苯再拭,但应立即用拭镜纸擦干。8.取下标本片、下降集光器、竖起反光镜、转动旋转盘,将接物镜摆成低倍镜向前,高倍镜与油浸镜头各向两侧的位置。擦掉载物台上的油渍,下降镜筒,双手托持显微镜,放入显微镜箱中。三、显微镜的保护1.显微镜是贵重精密仪器,使用时要精心爱护,不得随意拆御和碰撞。2.取送显微镜时应轻拿轻放,双手托持,一手握镜臂,一
4、手托镜座,防止因震动使镜头受损。3.显微镜的调节器是精密的机件,只能做有限的旋转,当旋转感到有阻力则表明已达极限,绝不能再继续向此方向旋转,必须立即向反方向旋转退回。 4.显微镜放置于干燥、无尘地方。(马佳毓)思考题1.使用油浸镜时,怎样调节光线和调节器才能使视野清晰、物像清楚?2.如何保护显微镜?细菌的药物敏感性试验实验目的熟悉并掌握细菌药敏测定的基本方法。药敏试验的方法主要有扩散法和稀释法两种。目前临床常用纸片琼脂扩散法,其原理是将含有一定量的抗菌药物纸片,平贴在已经接种被测细菌的琼脂平板表面,纸片中的抗菌药物
5、溶解于培养基内,并向四周呈球面扩散,药物在琼脂中的浓度随离开纸片的距离增大而降低。同时,经过培养,琼脂上的细菌开始生长,当琼脂内的药物浓度高于该药对被检细菌的最低抑菌浓度(MIC)时,该菌的生长就受到抑制,在含药纸片的周围形成抑菌环。抑菌环越大,说明待检菌对被检抗菌药物越敏感。[材料]金黄色萄萄球菌临床分离株 多种抗菌药物干燥纸片 MH琼脂平板[方法]1.以无菌棉拭蘸取己制好的标准浓度(1.5亿/ml)的菌液,均匀地涂布于MH平板表面,在室温中干燥数分钟。或用接种环取少许供试菌纯培养物,在MH琼脂平板上反复划线,使
6、细菌均匀地涂布于整个平板表面。2.用无菌镊子将含药纸片平贴于平板的表面,轻轻压实。每个平板均匀地贴4种含药纸片,纸片间距离不小于24mm。3.纸片贴后15min,将平板倒置于培养箱中,37℃培养16~18h。[结果]观察纸片周围有无抑菌环,并测量抑菌环的直径(以mm为单位)。临床常用抗菌药物的抑菌环直径表示该药的抑菌效果。抑菌环的解释标准参见表8-1。抑菌环的大小以敏感、中度敏感、中介度和耐药的形式报告结果,其意义如下:1.敏感:表示被测菌株引起的感染可用常用剂量的该抗菌药物治疗,禁忌症除外。2.中度敏感:表示被测菌
7、株可以通过提高剂量或在药物生理性浓集的部位被抑制,如β-内酰胺类药物。3.中介度:这一范围作为“缓冲域”,以防止由于微小的技术因素失控而导致结果的解释错误。抑菌环处于中介度范围,认为意义不明确,如果没有其它可以替代药物则须做稀释试验。4.耐药:被测菌不能被达到组织内或血液中的该抗生素常用剂量所抑制。[附录]MH(Mueller-Hinton)琼脂培养基制备成分:牛肉300.0g酪蛋白水解物17.5g可溶性淀粉11.5g琼脂17.0g蒸馏水1000.0ml制备方法:将牛肉去脂肪、肌腱后绞碎,加蒸馏水1000ml,先制成
8、牛肉浸汤。1000ml肉汤中,加入其它成分,调整pH为7.4,加热使琼脂熔化后分装于试管或三角瓶中,于12℃高压灭菌15min备用。表8-1抑菌环直径及其解释标准抗菌药物纸片含药量抑菌环直径耐药中介度中度敏感敏感丁胺卡那霉素30μg≤1415~16-≥17氨苄青霉素(肠杆菌)10μg≤1112~13-≥140(葡萄球菌)10μg≤28--≥29
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