苯醚甲环唑免疫检测方法的研究

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1、天津科技大学研究生学位论文（申请工程硕±专业学位）苯稚甲环唯免疫检测方法的研巧ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＯＦＩＭＭＵＮＯＡＳＳＡＹＦＯＲＴＨＥＤＥＴＥＣＴＩＯＮＯＦＤＩＦＥＮＯＣＯＮＡＺＯＬＥ—、？‘节＾；工程领域名称：食品工程指导教师：刘冰副教授研巧生姓名：冯久慧申请学位类别；工程硕击（全日制）论文提交日期；２０化年０３月：ＴＳ２０．６分类号１学校代码：１００５７密级：研巧生学号：１３８０８９８３苯醋甲环座免疫检测方法的研究ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙｆｏｒｔｈｅＤｅｔｅ

2、ｃｔｉｏｎｏｆＤｉｆｅｎｏｃｏｎａｚｏｌｅ工程领域：食品工程校内指导教师：刘冰副教授企业指导教师：王艳高级工程师研究生姓名：冯久慧：工程硕±申请学位级别（全日制）论文提交日期：２０１６年０３月课题来源：国家自然科学基金项目学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加Ｗ标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料，。对本文研究

3、做出重要贡献的个人和集体均己在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：違＾日期：年３月化日知识产枚和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，属天津科技大学；其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，Ｗ本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。：作者签名巧女＾意＾—日期：年＾月Ａ日学位论文版权

4、使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内，允许论文被查阅和借阅容。本人授权天津科技大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分，可Ｗ采用影印内容编入有关数据库进行检索、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。＂＂保密□（请在方框内打Ｖ），在年解密后适用本授权书。本学位论文属于＂＂不保密□（请在方框内打Ｖ）。ｏ作者签名：；受心急：Ｊｆ《年３月Ｊ日＾日期导师签名：年月曰：二曰期３乂満巧针对目前由于Ｈ挫类杀菌剂苯離甲环哇的广泛应用所

5、带来的农药残留问题，本文，研究内容主要包括对苯醋甲环嗤的免疫检测方法进行了研究：苯醋甲环嗤半抗原的，设计及合成，完全抗原的制备，多克隆抗体的制备及纯化免疫检测方法的建立及其，Ｗ及高效液相色谱法的验证实验性能指标的评价。＇３－，４二氯二，本研巧１＾苯酸为原料在自制离子液体的催化作用下与漠代己醜氯－反应合成中间体，Ｉ４ｔｅｌＩ然后中间体与氨基了酸连接制备半抗原１（Ｈａｐｎ）。采用＝性钢在异了醇中间体Ｉ与中反应合成中间体ＩＩ，被测氨化钢还原后，在破化钟的催２（２化作用下与氯石酸乙醋反应，水解后得到半抗原Ｈａｐｔｅｎ）。将两种半抗原分别与ＢＳＡ、化

6、Ｈ偶联制得４种免疫原，与ＨＲＰ偶联制得２种酶标抗原，与ＯＶＡ偶联制得２种包被原。用４种免疫原共免疫８只雄性新西兰大耳白兔，Ｗ制备多克隆抗体，其－ＨａｔｅｎｌＫＬＨ免疫的Ｎ０．３，４０００中Ｗｐ兔子的抗血清效果最好其效价为１：６，对１０００帖／Ｌ苯離甲环哇标准品的抑制率高达８６％，该抗体经纯化后浓度为２．１２ｍｇ／ｍＬ。０－．５０／ｗｅｌ，ａｔｅｎｌＨＲＰ稀３０００，５％抗体Ｗ帖ｌ包板酶标抗原Ｈｐ释倍Ｗ０．脱脂乳－粉进行封闭，样品稀释液为ｐＨ７．４的化０１ＭＰＢＳ，建立了ｄｃＥＬＩＳＡ检测方法，其灵±６７±．／．８６／敏度眼〇为．９６２７３ｎｇＬ，检

7、测限１打５为８０．３４＾ｇＬ，与１１种兰嗤类杀茜剂的交叉反应率均小于０．０１％。选取１０种果蔬类样品，经正己烧提取，ＰＢＳ稀释后，进－％行加标回收实验，平均回收率为８９．０１％１０３．４３，变异系数均小于１４．３３％，检出限一３ｄｃ－ＥＬＩＳＡＨＰＬＣ为４４＾£化３。所建立的检测结果与检测结果致性良好，证明该方法准确度较高。－包被原ＨａｔｅｎｌＯＶＡＷ０．０５ｉ／ｗｅｌｌ包，２０００倍，Ｗ〇５％脱脂乳粉ｐ［ｇ板抗体稀释．－进行封闭，样品稀释液为ｐＨ７．４的