亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文研究生姓指导教师姓名营养与食品卫生学专业名称营养与相关疾病研究方向2015年4月论文提交日期学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：114曰期:减；学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论

2、文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中酔术•(光麵）电子杂志社送錢報论効•卩件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在__年—月解密后适用本规定。非涉密论文《论文作者签名：盘嚟孤曰期：Uc.il导师签名：日期：亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病的机制研究中文摘要亮氨酸改善非酒精性脂肪性肝病

3、的机制研究中文摘要近年来，非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD）的发病率在全球范围内呈快速增长。NAFLD是代谢综合征的组成部分，其发病机制尚未完全明确，Day等提出了二次打击学说，胰岛素抵抗、瘦素抵抗以及氧化应激等在其中发挥重要作用。NAFLD目前尚无理想的防治药物。研究表明慢性肝病患者体内支链氨基酸（亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸）水平显著低于非肝病的对照组，提示支链氨基酸对于慢性肝病有一定的改善作用。因此，进一步研究支链氨基酸，尤其是亮氨酸对非酒精性脂肪性肝病的作用及机制是十分必要的。目的：研究不同剂量亮

4、氨酸对NAFLD的影响,并围绕二次打击学说相关的因素探讨其可能的作用机制。方法：1.NAFLD模型的建立及亮氨酸对肝脏脂肪变性的直接作用：5周龄雄性SD大鼠48只随机分为4组，高脂组饲料参照Harlan实验室开发的60%高脂饲料配方，干预组在高脂饲料基础上分别添加1.5%、3%、4.5%的亮氨酸，喂养16周。每周记录大鼠体重、摄食量。实验结束时，观察大鼠肝组织病理学改变，测定血清肝功能指标丙氨酸转移酶（ALT）和门冬氨酸转移酶（AST）水平。2.亮氨酸对NAFLD模型大鼠糖脂代谢、氧化应激以及炎症因子的影响：16周实验结束时，测定大鼠血清空腹血糖以及空腹胰岛

5、素（FINS），计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）。测定大鼠肝糖原，血清胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）等脂代谢指标水平，总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）等氧化指标以及大鼠血清中白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和C反应蛋白（CRP）的水平。Westernblot检测肝、脂肪代谢相关蛋白固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）以及肾周白色脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的表达水平。I中文摘要亮氨酸改善非酒精性脂肪

6、性肝病的机制研究3.亮氨酸对NAFLD模型大鼠瘦素通路的影响：16周实验结束时，测定大鼠血清瘦素水平。取下丘脑免疫组化法测定其瘦素受体表达。Westernblot法进一步检测白色脂肪组织中瘦素受体表达以及JAK2、STAT3和SOCS3等瘦素信号通路相关蛋白的表达。结果：1.NAFLD模型的建立及亮氨酸对肝脏脂肪变性的直接作用：（1）干预16周后，4组大鼠的体重、平均摄食量和主要脏器指数之间无显著性差异。（2）肝组织病理切片观察到高脂组大鼠肝脏呈现明显的脂肪变性，证实本研究中高脂喂养建立了NAFLD的大鼠模型。亮氨酸的干预则逆转了脂肪变性。同时，亮氨酸的干预

7、也显著降低了高脂组升高的大鼠血清ALT、AST水平。2.亮氨酸对NAFLD模型大鼠糖脂代谢、氧化应激以及炎症因子的影响：（1）亮氨酸组较高脂组FINS水平均显著降低，但3个亮氨酸组之间无显著性差异；亮氨酸的干预显著降低了高脂组HOMA-IR指数。（2）干预16周后，4组大鼠的肝糖原之间的差异无显著性，3个剂量的亮氨酸干预都显著降低了大鼠血清TC、TG和LDL-C水平，3.0%和4.5%亮氨酸显著升高肝脏T-SOD和GSH-Px水平，4.5%亮氨酸还显著降低了肝脏MDA水平。（3）高脂组大鼠肝组织中SREBP1蛋白表达量由于亮氨酸的干预显著降低，而肾周白色脂肪

8、组织中的PPARγ蛋白表达量则在亮氨酸的作用下显著上