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《不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
分类号：Ｓ８５２巧予学位单位代码；１０４３４学号：２０１別２０１７２．．：ｃＬ束义ｆ乂ｆ全日制硕±专业学位论文－、＇、片打．不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉峭福利和相关免疫指标的影响ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＤｉｆｆｅｒｅｎｔＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｔｒｅｓｓＦａｃｔｏｒｓｉｎＤｕｃｋＨｏｕｓｅａｎｄ－－／—ＶＩｍｐａｃｔｓｏｎＷｅｌｆａｒｅａｎｄＲｅｌａｔｅｄＩｍｍｕｎｅＩｎｄｉｃａｔｏｒｓ－；．．．．．―、巧名：王叶专业类别：菩度巧去皆ｊ专化：善匯ｙ研究方向：环境微生物与免疲巧畔蟲学院：动奶科技学院满。策女，＇：指导教师：柴同杰教授争Ｖ；＞＾＇一＊＇４—一、ｔ嶺含次於＇、．‘－－、、一３ｒ又＇―－乂‘一Ｖ．公．尸．皆，＇２０１５年６月７日．一，中八－ｒ：Ｊ＇．占．古巧一 关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体。。，均在文中明确说明本声明的法律责任由本人承担本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部口或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并向社会公众提供信息服务。保密论文在解密后应迸守此规定。论文作者签名：叶重导师签名３〇吃、－？日期：（ 论文提交日期：2015.04.28论文答辩日期：2015.06.07学位授予日期：2015.06学位类别：兽医硕士答辩委员会主席：张秀美 课题资助国家自然科学基金项目：“动物舍微生物气溶胶传播模式研究”[30571381]。 符号说明S（s）:secondday,秒Min(min):minute,分钟H(h):hour,小时D（d）：day，天L（l）：liter，升ML(ml)：milliliter，毫升µl：microliter，微升µg：microgram，微克g：gram，克kg：kilogram，千克CFU：colonyformingunit，菌落形成单位EU：EndotoxinUnits，内毒素标准单位m3：cubicmeter，立方米AGI-30：Allglassimpinger，全玻璃冲撞式采样器LSZ：Lysozyme，溶菌酶LAL：Limulusamebocytelysate，美洲鲎试剂LALT：LimulusAmebocyteLysateTest，鲎变形细胞溶解试验WBC：WhiteBloodCell，白细胞 目录中文摘要.................................................................................................................................IAbstract...................................................................................................................................III1前言.......................................................................................................................................11.1国内外肉鸭养殖现状...........................................................................................................11.2动物福利...............................................................................................................................21.2.1动物福利的概念................................................................................................................21.2.2动物福利发展现状............................................................................................................21.2.2.1国内动物福利发展现状.................................................................................................21.2.2.2国外动物福利发展现状.................................................................................................31.3养殖环境对畜禽健康的影响...............................................................................................31.3.1规模化养殖环境生物应激因素对畜禽健康的影响........................................................31.3.1.1气载细菌对畜禽健康的影响.........................................................................................31.3.1.2气载真菌对畜禽健康的影响.........................................................................................41.3.1.3气载内毒素对畜禽健康的影响.....................................................................................41.3.2不同养殖环境对肉鸭福利指标的影响............................................................................51.3.3不同养殖环境对肉鸭相关免疫指标的影响....................................................................51.4本研究目的及意义...............................................................................................................52材料与方法..............................................................................................................................72.1试验材料...............................................................................................................................72.1.1试验仪器............................................................................................................................72.1.2试验试剂............................................................................................................................72.1.3试验动物............................................................................................................................82.2试验设计...............................................................................................................................82.2.1试验日期与地点................................................................................................................82.2.2试验日粮与饲养管理........................................................................................................82.2.3肉鸭畜舍环境与构造........................................................................................................82.2.4不同试验组处理................................................................................................................82.3检测指标和方法...................................................................................................................92.3.1空气生物应激因素样品检测............................................................................................9 2.3.1.1鸭舍气载需氧菌的收集与测定.....................................................................................92.3.1.2鸭舍气载真菌的收集与测定.........................................................................................92.3.1.3鸭舍气载内毒素的收集与测定.....................................................................................92.3.2肉鸭福利指标检测..........................................................................................................112.3.2.1肉鸭盲肠微生物菌群...................................................................................................112.3.2.2肉鸭外观和步态评分...................................................................................................122.3.2.3肉鸭肢体不对称性.......................................................................................................122.3.3肉鸭相关免疫指标检测..................................................................................................122.3.3.1肉鸭免疫器官指数.......................................................................................................122.3.3.2肉鸭静脉血溶菌酶含量...............................................................................................132.3.3.3肉鸭静脉血白细胞总数...............................................................................................132.4数据分析.............................................................................................................................143结果与分析............................................................................................................................153.1不同养殖环境试验处理组空气样品浓度.........................................................................153.1.1不同养殖环境试验处理组气载需氧菌浓度比较..........................................................153.1.2不同养殖环境试验处理组气载真菌浓度比较..............................................................163.1.3不同养殖环境试验处理组气载内毒素浓度比较..........................................................163.2不同养殖环境生物应激因素对肉鸭福利指标的影响.....................................................173.2.1不同养殖环境生物应激因素对肉鸭盲肠微生物的影响..............................................173.2.2不同养殖环境生物应激因素对肉鸭步态评分的影响..................................................193.2.3不同养殖环境生物应激因素对肉鸭肢体不对称性的影响..........................................193.3不同养殖环境生物应激因素对肉鸭相关免疫指标的影响.............................................203.3.1不同养殖环境生物应激因素对肉鸭免疫器官指数的影响..........................................203.3.2不同养殖环境生物应激因素对肉鸭血清溶菌酶的影响..............................................213.3.3不同养殖环境生物应激因素对肉鸭静脉血白细胞细胞数量的影响..........................224讨论........................................................................................................................................234.1不同养殖环境中生物应激因素浓度的比较分析.............................................................234.1.1不同养殖环境中气载需氧菌浓度的比较分析..............................................................234.1.2不同养殖环境中气载真菌浓度的比较分析..................................................................244.1.3不同养殖环境中气载内毒素浓度的比较分析..............................................................24 4.2不同养殖环境对肉鸭福利状况的影响.............................................................................254.2.1不同养殖环境对肉鸭盲肠微生物菌群的影响..............................................................254.2.2不同养殖环境对肉鸭肢体不对称性的影响..................................................................254.2.3不同养殖环境对肉鸭外观步态评分的影响..................................................................254.3不同养殖环境对肉鸭相关免疫指标的影响.....................................................................264.3.1五种不同养殖环境生物应激因素对肉鸭免疫器官指数的影响..................................274.3.2不同养殖环境生物应激因素对肉鸭血清溶菌酶的影响..............................................284.3.3不同养殖环境生物应激因素对肉鸭静脉血白细胞总数的影响..................................285结论........................................................................................................................................30参考文献.............................................................................................................................31附录.........................................................................................................................................37致谢..........................................................................................................................................42攻读学位期间发表论文情况...................................................................................................43 山东农业大学全日制硕士专业学位论文中文摘要本研究对不同鸭舍环境生物应激因素进行检测并探讨其对肉鸭福利指标和相关免疫功能的影响。试验选择280羽1日龄健康樱桃谷肉鸭进行3周育雏。选取体重相近的21日龄肉鸭250羽随机分为对照组A、试验组B、试验组C、试验组D、试验组E五个处理组，每组50羽。对五个组进行不同处理，使对照组A、试验组B、试验组C、试验组D、试验组E五个处理组环境清洁程度呈梯度依次为优、良、中、差、极差。分别于28、35、42、49、56日龄上午8时对气载需氧菌、气载真菌、气载内毒素浓度进行检测。同日对静脉血白细胞总数、血清溶菌酶含量进行测量。于28、42、56日龄每组随机取3羽肉鸭对盲肠微生物菌群、免疫器官指数进行测量。于54日龄每组取6只肉鸭进行FA活体测量并进行步态评分。试验结果表明：（1）环境卫生条件差，导致气载微生物含量升高。环境的优与差在很大程度上取决于卫生管理方式。对照组A、试验组B-E舍内气载需氧菌浓度依次在0.46-1.81×104CFU(ColonyFormingUnit)/m3（空气）、0.69-5.07×104CFU/m3、0.68-5.76×104CFU/m3、0.59-5.96×104CFU/m3、0.71-8.93×104CFU/m3之间；舍内气载真菌浓度依次在0.11-2.54×104CFU(ColonyFormingUnit)/m3（空气）、0.21-3.54×104CFU/m3、0.19-3.95×104CFU/m3、0.77-5.73×104CFU/m3、0.78-8.05×104CFU/m3之间；舍内气载内毒素浓度分别在0.02-2.56×104EU(EndotoxinUnit)/m3（空气）、0.04-7.24×104EU/m3、0.003-1.024×104EU/m3、0.011-1.448×104EU/m3、0.006-1.024×104EU/m3之间。畜禽舍微生物气溶胶来源于动物体及其排泄物、垫料、饲料等。畜舍进行计划地通风、清洁，可以降低环境中颗粒悬浮物和微生物气溶胶的量，达到改进空气质量目标。随着时间的推移，肉鸭一天天长大，排泄物的增多，鸭舍内气载需氧菌、真菌、内毒素浓度的变化显著受到不同通风、清洁条件的影响。（2）随着饲养环境质量变差，空气中生物应激因素浓度显著增大。免疫器官的发育受到不良影响，对机体的免疫抵抗了会产生不利的危害。降低了肉鸭血清溶菌酶的含量，第六至八周，试验组B、C、D、E分别比对照组A下降6.7%、12.9%、17.4%、19.1%。肉鸭机体细胞免疫力减弱，抑制了机体免疫组织的功能。不同的养殖环境对肉鸭的静脉血白细胞总数没有显著影响。I 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响（3）养殖环境差的鸭舍中生物应激因素浓度显著高，显著影响肉鸭福利。气载微生物浓度高的环境下，肉鸭机体盲肠内容物中大肠杆菌浓度高，有益菌乳酸杆菌浓度低。外观步态评分试验组B、C、D、E分别比对照组A分别下降151%、303%、506%、557%。FA值试验组B、C、D、E分别比对照组A分别下降24%、75%、113%、139%。肉鸭的全身状况不佳，运动量减少，阻遏了肉鸭福利和健康的良性发展。随着养殖环境清洁程度的提高，肉鸭福利水平也整体提高。关键词：肉鸭；环境质量；气载微生物；生物应激因子；福利指标；免疫指标；II2 山东农业大学全日制硕士专业学位论文DetectionofDifferentBiologicalStressFactorsinDuckHouseandImpactsonWelfareandRelatedImmuneIndicatorsAbstractInthisstudy,differentbiologicalstressfactorsinduckenvironmenttodetectandinvestigatetheireffectontheduckwelfareindicatorsandrelatedimmunefunction.ThetestSelect280birdsaday-oldcherryvalleyduckbroodconductedthreeweeks.Selecttwohundredandfifty21-day-oldduckssimilarweightwererandomlydividedintocontrolgroupA,B,C,D,Efivetreatmentgroups.Fiftyfeathersineachgroup，andthecontrolgroupA,groupB、C、D、Eofdifferentprocessing,environmentcleandegreeisgradientisexcellent,good,medium,poor,verypoor.In28,35,42,49,56daysofage,when8amtotestairborneendotoxin，airborneaerobicbacteria,airbornefungusconcentration.Andthemiddleofthebloodleukocytes,granulocyte,cellnumberandthecontentofserumlysozymetomeasure.In28,42and56daysofageforeachgroupofrandomthreefeathereveryincaecummicroorganismflora,tomeasuretheimmuneorganindex.Ineachgrouptake6everydayage54FAlivingmeasurementandgaitscore.Theexperimentaldatashow:(1)Poorsanitationcondition,whichleadstotheriseinairbornemicroorganisms.Excellentandbadenvironmentdependslargelyonhealthmanagementstyle.ControlgroupAandgroupB-Einnerairborneconcentrationsofaerobeinturninthe0.46-1.81×104CFU(ColonyFormingUnit)/m3(air)、0.69-5.07×104CFU/m3、0.68-5.76×104CFU/m3、0.59-5.96×104CFU/m3、0.71-8.93×104CFU/m3,between0.71-8.93x104cfu/m3;Innerconcentrationofairbornefungiinturninthe0.11-2.54×104CFU(ColonyFormingUnit)/m3(air)、0.21-3.54×104CFU/m3、0.19-3.95×104CFU/m3、0.77-5.73×104CFU/m3、0.78-8.05×104CFU/m3;Innerairborneendotoxinconcentrationin0.02-2.56×104EU(EndotoxinUnit)/m3(air)、0.04-7.24×104EU/m3、0.003-1.024×104EU/m3、0.011-1.448×104EU/m3、0.006-1.024×104EU/m3.Corralmicrobialaerosolandwastefromanimals,bedding,feed,etc.Barnsplannedtoventilation,clean,canlowertheamountofparticlessuspendedintheenvironmentandmicrobialaerosol,improveairqualitygoalsaremet.Astimegoeson,everydaybydaygrowup,feces,duckinairborneaerobicbacteria,fungi,thechangesofendotoxinconcentrationsignificantlyaffectedbydifferentventilation,cleancondition.III 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响(2)Withraisingtheenvironmentalqualityvariation,thesignificantincreaseinbiologicalfactorsofstressconcentrationintheair.Thedevelopmentoftheimmuneorgansaffectedbybad,tothebody'simmunetoresisttheriskswilladversely.Reducesthefleshduckthecontentofserumlysozyme,sixtoeightweeks,groupB,C,D,E,respectively,comparedwiththecontrolgroupby6.7%,12.9%,17.4%,12.9%.Everybody'scells,theimmunesystemweakensinhibitsthebody'simmunefunctionoftheorganization.Differentbreedingenvironmentoneveryvenousbloodwerenotsignificantlyaffecttotalnumberofwhitebloodcells.(3)Breedingduckwithpoorenvironmentinthebiologicalstressconcentrationfactorssignificantlyhigh,significantimpactoneverywelfare.Undertheenvironmentofhighconcentrationsofairbornemicrobes,everybodyinthececumcontentsofe.coliconcentrationishigh,thebeneficialbacterialactobacillusconcentrationislow,AppearancegaitscoregroupB,C,D,E,respectively,comparedwiththecontrolgroupby151%,303%,506%,151%respectively.FAvalueofgroupB,C,D,E,respectively,comparedwiththecontrolgroupAfellby24%,75%,113%and24%respectively.Everybodycondition,exerciseless,inhibitthebenigndevelopmentofeverywelfareandhealth.Withtheimprovementofaquacultureenvironmentcleandegree,everywelfarelevelalsorisesasawhole.Keywords:Ducks;Environmentalquality;Airbornemicrobes;Biologicalstressfactor;Welfareindicators;Immuneindex;IV2 山东农业大学全日制硕士专业学位论文1前言1.1国内外肉鸭养殖现状目前，我国的国民经济整体运行进入新常态，对畜牧业的发展也提出了更高的要求。如对畜产品需求的多样化，高档次，提倡生态化、标准化的农业标准，加快提高第二产业、第三产业和畜牧业的一体化程度等。现阶段，畜禽生产模式、畜牧业出现基本稳定态势，比较经济效益不断缩小。生产率进一步下降，越来越多的外部制约因素出现。继续加强和完善科技推广体系建设，努力控制育种、疾病、饲料营养组成的技术支持平台。在畜牧工程这一领域，农场的规划和建设、通风、环境空气质量的控制、自动控制环境、粪便及污水的处理形成的成熟和复制技术。通过技术和项目的支持，助推生态畜牧业的发展。只有不断的探索和创新，才能促进我国畜牧业的健康持续发展，构筑出一条生态畜牧业强旗富民之路。在全世界范围内，我国在生产水禽方面名列前茅。具有优越的地理位置，得天独厚的环境资源，广阔的水域。最早在中国，肉鸭利用江、河、湖、塘水放养和后院的形式，形成了我国肉鸭产业发展的重要手段。随着国民消费水平的提高，对鸭产品需求量的增高以及国际市场对鸭产品需求量的增加。20世纪80年代初,我国现代养鸭产业开始出现巨大变化。在第二十一世纪初，国内鸭产业得到了迅速发展，显示出在高、强新阶段持续发展的一个趋势，逐渐增加的市场容量。家养的鸭总量的不断增长保持在百分之十到百分之十五之间的年增长率。各鸭加工企业（包括个体作坊，小加工厂）应运而生，该行业迅速进入了快速成长期。肉鸭产业的发展势头十分迅速，短时间内已成为中原农村经济增长收入，提高生活水平的支柱产业之一。中国是全世界最大的生产家禽产品的国家，而且鸭养殖业紧随肉鸡养殖业之后。根据联合国粮食和农业组织（FAO）统计，在2003年世界上鸭的存栏数量达到10.86亿只。此中中国的鸭数量有6.61亿只，占世界的总存栏量60.9%。在二零零五年世界上的鸭宰杀总量约是22.8亿只上下,占世界上总屠宰量的71.7%的我国鸭屠宰量是16.34亿只。在2009年，经过短短的六年时间，我国肉鸭的存栏量比2003年鸭存栏量多1千万只。出栏量达到35.2亿只,肉鸭的年存栏量占总数的67.3%。屠宰量占世界总数的74.7%。跟随着人民消费观念和畜肉品质追求变化，高量蛋白，低量脂肪，成本低和鸭产品渐渐的更加受到欢迎，是以平均每年0.4%的增长率增长。1 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响在许多西方国家，英国的鸭产业的发展最优秀。农业和农业的总体水平相对其他国家更高，养殖模式和技术水平在世界上是先进的。但在我国肉鸭生产水平低于世界水平，甚至远低于发达国家水平。主要表现在：（1）我国肉鸭屠宰率低于世界平均水平；（2）产蛋鸭产蛋量低；(3)单位屠宰鸭所提供的胴体重低。中国鸭的疾病预防控制体系不完善，我国家禽业病危害十分严重。一方面家禽健康的健康时时刻刻受到疾病的折磨。家禽生产性能良好的发展与养殖业的经济效益受到严重打击；另一方面给食品安全性带来巨大隐患，危害人类生命安全健康。我国家禽养殖业能否健康发展，家禽产品能否进入国际市场的关键是能否严格控制疾病。这就要求家禽疾病科学的预防体系建设，坚决贯彻“预防为主，预防比治疗更重要”的原则。为了制止病原微生物(细菌、病毒、真菌、寄生虫等)入侵，应在科学免疫的基础上,升高鸭的生活环境质量、规范饮水安全。加强卫生管理水平和提高饲料品质。加强基础设施建设，工具的清洁和消毒；粪便及时进行无害化处理；塾料和废弃物的处理等（陆桂荣，2010）。养殖环境对于肉鸭的生长繁殖是首要影响因素。制定标准的环境预警指标配合科学的词养管理、合理的免疫程序和疾病防治方法不仅可以改善肉鸭福利状况，提高肉鸭养殖水平。从长远看，有利于打破严重制约我国养鸭行业发展的壁垒，从而改善我国肉鸭养殖现状。因此，肉鸭养殖环境系统指标的建立已势在必行。1.2动物福利1.2.1动物福利的概念动物福利实际上指的是为了能够让动物健康快乐从而进行的一系列措施和供给动物相应的外部条件。“畜禽福利”是畜禽生活质量状况的好坏，与畜禽康乐相对应。康为健康的身体情况，包括畜禽生长发育正常、没有疾病、没有损伤等；乐是心理感受，涵盖没有紧张、没有枯燥感，没有压抑等。畜禽的集体及心理，与环境保持和谐的状态，可以通过动物的健康、生理状况、行为、生产性能表现出来（顾宪红，2005；柴同杰，2008）。1.2.2动物福利发展现状1.2.2.1国内动物福利发展现状进入第二十一的新年代，畜禽养殖规模迅速蔓延。畜牧业的可持续发展和相关产业的增长将是健康养殖和动物福利的发展长期依赖。中国加入WTO，动物福利逐渐成为一种新的贸易壁垒，已严重影响和制约了中国畜牧业的发展和贸易开放。动物福利2 山东农业大学全日制硕士专业学位论文立法和制度化工作落后。对动物福利观念缺乏广泛的了解和认同等问题制约着我国动物福利的长足发展，阻滞着我国畜产品走向国际市场前进的步伐（刘纪成，2006）。1.2.2.2国外动物福利发展现状从动物福利运动兴起至今，与动物福利方面相适应的法律、法规、制度、标准等在美国、英国、澳大利亚、德国等众多国家已经相继制定出来。国际组织方面也已相应出台，立法水平上在他们之间还不能表现的完全一致。一般来说，欧盟（英国）是最早的。特别是在农场动物，内容是最详细的、具体的，广泛参与动物处理的全过程。在美国的动物福利制度的重点是主要的实验动物，伴侣动物和水生动物，在这一地区的农场动物的动物福利是相对较小的，也可以提高可操作性远比欧盟的发展。但近年来，随着促进国内动物保护组织的提高，国内消费者的意识和国际贸易需求，美国对畜牧业和动物福利问题越来越受到人们的重视。认识到动物福利与国际贸易、食品质量以及其他方面的关系。各组织开始做出一些推荐的原则来呼吁各国尤其是发展中国家积极推行动物福利措施。由于文化背景不同，伦理道德观念存在差异及宗教因素的影响。我国与国际还存在一定差距。但最近几年，我国在动物福利方面做出的努力不容小觑。维护生态环境，可持续发展的实现，其中重要的部分应该就是实现人和动物的和睦协调发展。当这种平衡达不到时，就可能给人类带来史无前例的灾难。人们应该自觉地调整人与自然的关系，充分认识人与自然和谐的自然规律，为人道对待动物就是善待人类自己。建立起人和动物和睦发展的关系，才能实现社会的可持续发展（李卫华，2004）。1.3养殖环境对畜禽健康的影响1.3.1规模化养殖环境生物应激因素对畜禽健康的影响1.3.1.1气载细菌对畜禽健康的影响畜禽养殖舍内气载微生物的含量随着圈舍内的卫生情况差异出现了上下浮动，鸡舍空气细菌含量最高。在畜禽中的分离的肠杆菌，细菌主要链球菌，需氧芽孢菌，葡萄球菌等。有的动物舍还分离到金色葡萄球菌、沙门氏菌、厌氧芽孢菌、产气荚膜杆菌和肠原性致病性大肠杆菌等致病菌也都已得到证实。大量的病原菌和条件致病菌充斥着整个畜舍环境，所以浓度和成分对动物保护环境质量的重要意义。许多站在科学研究一线人员研究动物细菌浓度和组织环境进行了深刻探索。柴同杰经过试验得到结论，距牲口舍5m处需氧菌浓度是畜舍内的23.6%，厌氧菌是53.1%。气体交换作为微生物在畜禽舍与周围环境互相传播散布的有效途3 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响径，使得畜禽舍内外和附近的环境空气形成了一个持续较高的微生物浓度环境，导致动物源性生物污染特别是病原体和病原体感染和选择性威胁人类和动物（特别是在同一动物）。此外，抗生素的耐药菌株从畜禽舍排出的废气中传播出去。气溶胶中的革兰氏阴性菌的含量占少量，大部分为肠杆菌科，其中大肠杆菌的含量占据最多。1.3.1.2气载真菌对畜禽健康的影响控制空气真菌和霉菌毒素的文化环境能够有效地减少对动物的危害。土壤中的真菌生长、秸秆或牧草作为这些材料的搅拌。真菌孢子释放到空气中，如果搅拌在不通风的环境下进行的。结果在有限空间的空气中得到高浓度的真菌孢子。在户外，土壤中的真菌孢子，活的或死的植物，发布和传播与风的速度和方向有着非常密切的关系。有许多气体禽舍环境载体的真菌可以导致动物在各种真菌病及其毒素中毒的发生，普遍存在很大的威胁。黑附球菌、芽枝霉、灰葡萄孢、链格孢等真菌气溶胶孢子被认为是真菌气溶胶的重要组成成分，占真菌气溶胶总量百分之九十，而青霉和曲霉的孢子分别占2-10%和1-3%。它们都是空气环境中的重要过敏原，特别是黄曲霉、链格孢、杂色曲霉、烟曲霉等均可以产生毒素（Guido，2003）。1.3.1.3气载内毒素对畜禽健康的影响由细菌产生的内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖和微量蛋白复杂。它不是细菌或细菌的代谢，但在细菌死亡解体，内毒素的生物活性物质的释放。普遍散布在如布氏杆菌、大肠杆菌等革兰氏阴性菌细胞壁层和其它微生物如立克次氏体、衣原体、螺旋体等细胞壁层。内毒素可引起家禽严重的呼吸道疾病，如恶性气道阻塞和呼吸系统疾病，肺炎，并提出气载内毒素可以作为测量空气中的有机粉尘的重要指标。经过了对肉鸡不同的饲养阶段收集空气中散布的尘埃。然后对灰尘中内毒素的浓度和细菌的成分进行统计分析，位于美国路易斯安那洲的某肉鸡厂。它的空气质量状况显示：平均具有1.2×109CFU葡萄球菌，链球菌平均为4.4×108CFU以及8.3×105CFU真菌类、2.8×105CFU肠杆菌存在于1g尘埃中，内毒素含量在4.9～160EU/g之间,平均为38.6EU/g,内毒素的浓度非常高（Duanetal，2005，Wiegand-B，1993，Zucker-BA，2000）。欧洲某实验研究表明：牛舍中内毒素的含量最低，平均是49ng/m3。含量最高的是在肉鸡舍中，平均是692mg/m3，并且内毒素含量白天比夜晚高(1EU＝0.1ng，美国FDA)（Seedorf，1998)。24 山东农业大学全日制硕士专业学位论文1.3.2不同养殖环境对肉鸭福利指标的影响动物福利水平的差异性，主要是通过骨骼的发育情况，表观性状，盲肠微生物区系的不同水平的定性和定量描述的福利。肢体的不对称性（波动性不对称，FA）反映了在一个给定的环境条件下生长的家禽状况。在家禽发生应激反应，如果个体抑制干扰因素的增长，将导致对家禽的不对称发展两侧肢体对称性。FA反映了家禽生长的状况是否优秀（MollerandSwaddle,1997），同时作为评价个体动物福利和舒适程度的一个有力指标（Jones,1987）。盲肠肠道的重要组成部分。良好的肠道微生物菌群平衡，应包括大量的乳酸菌，其作为鸭抵抗住细菌感染重要的防御机制（Tuyttensetal.,2008）。乳酸菌在盲肠的数量作为健康和福利指标，乳酸菌的数量差异显著，乳酸菌数可以在有机生产系统控制（张明亮，2012）。1.3.3不同养殖环境对肉鸭相关免疫指标的影响动物免疫系统的自我调节的一个独立的系统。在免疫系统中的复杂的免疫反应，扩散和损失。机体的免疫系统具备免疫防卫、免疫监视、稳定自身等的生理功能。机体生产能力和抗击疾病的能力直接受到机体免疫机能高低的制约。在长期进化过程中，禽的呼吸道形成非特异性防御机制。呼吸弯曲湿通道可以防止病原微生物粘膜突破。气管和支气管的清除异物及异物的吞噬和消化机械能力纤毛粘液结构和巨噬细胞，是正常呼吸道的第一道防线。污垢和尘埃颗粒可以是机械阻塞阻塞运动纤毛，空气中的灰尘可以深入到呼吸道深处，造成很大的风险。尘埃颗粒还能够进入到间质和肺泡壁，从而发生在血管，在其中被内皮细胞所吞噬。但在肺中的异物的处理能力是有限的，如粉尘浓度过大，感染作用时间太长，使肺过载，导致免疫反应降低，抵抗力下降。通风不良，鸭棚的管理不善，可能会出现高H2S，高氨氮和高粉尘的影响。不仅影响纤毛粘膜的功能，也会导致呼吸道感染和炎症，更严重的是降低呼吸道黏膜的相关淋巴组织对抗原的应答力。微生物应激因素抑制了机体免疫组织的功能，神经体液平衡和生理代谢受到不良影响。鸡只的全身状况不佳，运动量减少，限制了肉鸡的觅食和运动行为。1.4本研究目的及意义随着集约化养殖方式的发展，积累的畜牧生产规模和养殖经验，人们已越来越深刻地认识到微生物气溶胶在传染病扩散中的重要性。某实验探究显示，营养状况，遗传特性，环境质量在动物生产效率和各自的贡献率占30%，45%，25%。空气质量的优5 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响劣作为环境质量的重要标准。微生物气溶胶又是它的主要指征。在密集的、大规模的牲畜和家禽养殖产业中，家禽生活环境恶劣。很长一段时间内在一个应激状态下，家禽的健康和福利受到严重损害。传染病畜禽的主要因素常常通过空气进行传播，导致畜牧业的重大损失，严重阻遏了畜牧业生产效率的发展和提高。畜牧兽医专业在中国越来越多的领导和专家学者都意识到低生产率的畜禽养殖源于环境较差的问题，但是无法得到良好的解决措施。也认识到改善空气质量的重要性，畜牧业生产的现代化，并且必须从改善环境开始但到目前为止，本研究在国内尚未开展。普遍存在的普通的消毒和通风措施，考虑不到也无法考虑到空气微生物指标。集约化的畜禽养殖业，“环境性疫病”从高浓度病原微生物衍生出来作为畜禽福利条件恶化的直接表达。所以我们可以从福利指标和免疫水平方向开始，全面分析，总结前人、专家的经验，综合国内、国外两个大环境下的评价肉鸭福利水平的各项可靠指标，其目的在于肉鸭的福利水平和免疫功能的研究具有科学的依据。所以本试验主要探索讨论不同养殖环境中以气载真菌、需氧菌和气载内毒素作为环境空气质量检测目标，并且统计分析它对肉鸭福利和免疫情况的影响。26 山东农业大学全日制硕士专业学位论文2材料与方法2.1试验材料2.1.1试验仪器AGI-30喷冲式生物采样器（AllGlassImpingerAGI—30，辽阳医疗器械厂）电热恒温式培养箱（天津泰斯特有限公司）Andersen-6级撞击式微生物样品收集器（辽阳医疗器械厂）YQX型厌氧培养箱（上海跃进医疗器械厂）数显恒温水浴锅（HH-4，国华电器有限公司）超净工作台（苏净集团安泰公司）无菌超净工作台（苏净集团安泰公司）光学显微镜（OLYMPUS；CH-2，JAPAN）电子天平（上海天平仪器厂）游标卡尺（江苏协易机床城有限公司）全自动血细胞分析仪（PE-6800VET，深圳普康电子有限公司）紫外分光光度计（Tanon-2500,Shanghai,China）高压蒸汽式灭菌锅（MSL3780型，SANYO）中型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）微量移液器（GILSON，FRANCE）高速台式离心机（TGL-1，BIORAD）TDL-5000B水平冰冻离心机（上海安亭科学仪器厂）干湿温度计（宁波半浦机械塑料电器厂）2.1.2试验试剂SS琼脂培养基(SalmonellaShigellaagar)、MAC固体培养基、MRS琼脂培养基、普通营养琼脂（杭州天和微生物试剂有限公司）；无热源水、无热源的氢氧化钠和盐酸、鲎试剂（湛江安度斯生物有限责任公司）；沙堡弱培养基制备：蛋白胨1g，葡萄糖4g，琼脂粉1.2g，加入100ml蒸馏水，上述混合后高压蒸汽灭菌，冷却后加入200mg氯霉素，倒平板冷却后，4℃备用。溶菌酶测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)7 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响2.1.3试验动物试验选用1日龄樱桃谷肉鸭280只（山东省新泰市天宝种鸭厂）。2.2试验设计2.2.1试验日期与地点试验日期：2014年4月12日至2014年6月5日；试验地点：山东农业大学畜牧兽医试验站。2.2.2试验日粮与饲养管理所有的试验鸭均采用同一型号全价饲料（山东省泰安市六和乐林饲料有限公司）。每个处理组之间放置相同数量、相同位置的料槽、水槽，各处理温度和光照（非强光光照12小时）保持基本一致。饲养密度为10只/m2。采用地面平养方式，舍内地面垫料为锯末，所有肉鸭统一饲养管理，自由采食和饮水，饲养管理具体按照《商品肉鸭饲养管理手册》进行，实验持续56天。实验开始前一周对育雏舍、笼具、料槽、饮水器进行清洗和熏蒸。进鸭苗前两天育雏舍采用双烟道加热，将舍内温度保持在32-34℃，进鸭苗后，每两天舍内温度降低1℃，至6日龄时降为30℃，7日龄到12日龄每天降温1℃，为25摄氏度，以后逐渐降低至室温。育雏舍内空气湿度第一周为60%-70%以上，第二周为50%-60%，在14日龄时将实验鸭由育雏舍转至生长鸭舍，直至试验结束。鸭苗1日龄-3日龄采用葡萄糖加维生素C开嘴，3-14日龄饲喂育雏料，14日龄后逐渐更换为育成料（过渡期为3天）。2.2.3肉鸭畜舍环境与构造五个试验组鸭舍的建筑材料和结构相同，各安装一排气扇。2.2.4不同试验组处理在其他条件均一致的情况下，以下为对不同试验组的处理：对照组A：排气扇+自然通风24h，每隔1天更换垫料、消毒、清洗料槽水槽。试验组B：排气扇通风24h，每隔2天更换垫料、消毒、清洗料槽水槽。试验组C：排气扇通风18h，每隔3天更换垫料、消毒、清洗料槽水槽。设置关闭排气扇时间09:00-15:00。试验组D：排气扇通风14h，每隔4天更换垫料、消毒、清洗料槽水槽。设置关闭排气扇时间09:00-19:00。试验组E：排气扇通风10h，每隔5天更换垫料、消毒、清洗料槽水槽。设置关闭排气扇时间09:00-23:00。28 山东农业大学全日制硕士专业学位论文2.3检测指标和方法2.3.1空气生物应激因素样品检测2.3.1.1鸭舍气载需氧菌的收集与测定鸭舍气载需氧菌的收集：分别在28、35、42、49、56日龄早8时，在尽量保持鸭舍安静，不打扰鸭群的情况下，放置Andersen-6级撞击式空气微生物采样器收集空气样品。用75%酒精棉球对采样器进行擦拭消毒。每组随机选取三个设置点，高度约为60cm。以5%绵羊血营养琼脂平板为采样介质。标准流量设置为28.3L/min，根据每个平板上菌落数在30～300为标准，采样器驱动时间设置在1～8min之间。鸭舍气载需氧菌浓度的测定：样品收集完成后于实验室，置37℃培养24-48h后记录气载需氧菌总数。经Andersen校正表校正后，根据以下公式计算Andersen-6级采样器菌落数：QCFU/m3(空气)=×100028.3L/mintt=采样时间（min）；Q：6个平皿上菌落数量校正后的总菌落数；2.3.1.2鸭舍气载真菌的收集与测定鸭舍气载真菌的收集：分别在28、35、42、49、56日龄早8时，在尽量保持鸭舍安静，不打扰鸭群的情况下，放置Andersen-6级撞击式空气微生物采样器收集空气样品。用75%酒精棉球对采样器进行擦拭消毒。每组随机选取三个设置点，高度约为50cm。以沙堡弱琼脂平板为采样介质。标准流量设置为28.3L/min。保证6节平皿上都能采到菌，根据每个平板上菌落数在30～300为标准，采样器驱动时间设置在1～10min之间。鸭舍气载真菌浓度的测定：样品收集完成后于实验室，将采集的真菌样品沙堡弱培养基上。置在25℃恒温箱培养72-120h，72h时进行第一次菌落计数，120h时再校对一次。经Andersen校正表校正后，根据以下公式计算Andersen-6级采样器菌落数：QCFU/m3(空气)=×100028.3L/mintQ：6个平板上总真菌菌落数；t=采样时间（min）2.3.1.3鸭舍气载内毒素的收集与测定鸭舍气载内毒素的收集：分别在28、35、42、49、56日龄检测气载内毒素浓度，在鸭舍的中央采用AGI-30喷冲式生物空气采样器采样。采样介质：50ml的无热原质水。采样时气流速度：12.5L/min。驱动时间：20min。采样器放置高度：50～80cm。9 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响鸭舍气载内毒素浓度的测定：通过LAL内毒素检测实验测定气载内毒素的含量。具体步骤如下：（1）每个样品通过使用无热原水2倍稀释至2-10倍，重复至少两管。（2）与无热原鲎试剂0.1ml溶解。（3）在已经经过第（2）步复溶的鲎试剂中加入0.1ml各检测样品的稀释液，首先加入阴性对照，依次从低浓度内毒素到最后加最高内毒素浓度，然后用低速漩涡把检测试管内液体进行混合，以避免混合了人工制品。（4）用封口膜密封每一个管，然后放在37℃的恒温干浴中干浴60min，鲎试剂与内毒素的反应时间是非常关键的，在有很多需要检测的样品情况下，反应最好以2-4min的时间为间隔开始，以便在上述时间内读取每一个检测。同时，时刻注意监测恒温器。（5）标准内毒素稀释，确定鲎试剂的灵敏度。鲎试剂灵敏度的确定的几何平均的转换结束重复四管检测的常用对数，常用的数值平均，鲎试剂灵敏度是反对数值的平均数。见表1：表1内毒素稀释（EU/ml）Tab1Endotoxindilution(EU/ml)0.50.250.120.060.03重复管终点1++++-0.062+++--0.123+++--0.124++++-0.06（6）结果判断：采用凝胶法的时候，每支试管的检测结果分为阳性和阴性，将试管翻转180度凝胶仍保持完整的是阳性反应。大量的粘性物质或没有形成凝胶的形成，成交后不能维持阴性反应的完整性管。（7）计算方法：空气样品中气载内毒素的浓度确定：（LAL灵敏度=0.125EU/ml）102 山东农业大学全日制硕士专业学位论文表2终点检测样品稀释倍数方法Tab2Thefinishtestingthesampledilutionmultiplemethod样品稀释倍数重复试管1:21:41:81:161:321:641:1281:2561+++++++-2++++++--终点检测样品稀释倍数（见表2）Log10终点1：128（0.0078125）-2.1071：64（0.015625）-1.806均值=-1.9565均值的反对数=0.01105内毒素浓度=LAL灵敏度/终点均值的反对数=0.125EU/ml÷0.01105=11.3EU/ml3样本内毒素浓度介质的体积空气中内毒素的浓度(EU/m)AGI气流速度采样时间2.3.2肉鸭福利指标检测2.3.2.1肉鸭盲肠微生物菌群2.3.2.1.1盲肠微生物采样试验于28d,42d,56d每个处理组取5只鸭放血宰杀，在无菌条件取盲肠内容物至低温保存。并且立即送实验室检测每克内容物乳酸杆菌数和大肠杆菌数。2.3.2.1.2盲肠内容物的稀释在超净台上，取0.5g样品，加至4.5ml无菌生理盐水中（经过高压灭菌试管），在混匀器上混匀，此为10-1稀释液，用微量移液器吸取0.5ml该液至盛有4.5ml无菌稀释液试管中，进行10-2稀释并混匀，依次进行10-3~10-5倍稀释。2.3.2.1.3培养及其计数每个经过灭菌的培养皿以无菌操作法倒入到15ml左右的培养基中，待培养基凝固之后，分别吸取10-3－10-5稀释液0.1ml于无菌培养皿中；大肠杆菌在37℃有氧培养24小时，乳酸杆菌在37℃厌氧培养48小时。在细菌培养完成后，按照可数性标准进行计数，每克样品落数以㏒10菌数/g样品表示，计算公式：菌落数稀释倍数样品量（ml）盲肠内容物菌落数Lg接种用样品量(ml)样品量（g）11 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响2.3.2.2肉鸭外观和步态评分于54日龄时，随机取6羽肉鸭放到一个安静的房间里进行步态观察和评分（由同一个专门人员采用统一标准评分），步态评分标准参照Kestinetal（1992）和Dawkinsetal（2004）并略加改动，外观步态评分标准详见表2-3。表3步态评分标准Tab3Gaitscorestandard分定义ScoreDefinition0分正常：能够行走同时可以很好的保持平衡1分轻微的步态缺陷2分有明显跛行，不稳定等3分只能在外界强烈刺激下，才能行走4分不能行走*步态评分为4分的肉鸭不包括在评分范围内，在评分前淘汰。Gaitscoreof4pointsofeverytestisnotincludedinthescorerange,outinfrontofthescore.2.3.2.3肉鸭肢体不对称性于54日龄时，随机从每个试验处理组中取6只进行肉鸭肢体测量，用游标卡尺准确进行测量肉鸭左右两侧的腿宽（跗跖骨和胫骨连接关节）、腿长（跗跖骨），并计算FA值。计算公式如下：FA=(2｜R-L｜)/(R+L)×100R：肢体右侧；L：肢体左侧；2.3.3肉鸭相关免疫指标检测2.3.3.1肉鸭免疫器官指数在28，42，和56天的时候，随机抽取5只鸭子，空腹称重后，颈部宰杀，小心的将法氏囊、胸腺、脾脏准确取出，把在器官表面的脂肪组织和结缔组织去除，以免影响准确性，表面用滤纸把残血吸净，用电子秤称取脾，胸腺，法氏囊的重量，计算各指数。计算公式如下：脏器指数=脏器重量(g)/体重(kg)122 山东农业大学全日制硕士专业学位论文2.3.3.2肉鸭静脉血溶菌酶含量分别在28、35、42、49、56日龄早上，饲喂鸭子之前，随机抽取每组鸭5只，趾静脉采血，分离血清，使用溶菌酶检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)进行溶菌酶的含量测定。具体方法如下：（1）见表4：（在冰水浴中进行）表4各管操作步骤Tab4Eachtubeoperationsteps空白管标准管测定管双蒸水（ml）0.22.5ug/ml溶菌酶标准应用0.2液（ml）血清样本（ml）0.2应用菌液（ml）2.02.02.0混合并且混匀，在37℃的水浴环境中水浴15min，立即将其取出放置在0℃以下的冰水水浴中冰浴3min，按顺序依次取出每管，倒入1cm光径比色皿中，在530nm，双蒸馏水调透光率100%，进行比色，测定各管的T15透光率（37℃水浴15min后的透射率值：T15）。注：①比色时可能在比色皿表面有水雾形成，将比色皿擦干净后再比色。②测试过程中为消除每只测定管之间的干扰，必须在每只管测定前将比色皿用双蒸水冲洗干净。（2）计算公式：溶菌酶含量（U/ml）=测定透光度UT15-空白透光度OT15标准品浓度（2.5ug/ml即200U/ml）标准透光度ST15-空白透光度OT15样品测试前稀释倍数UT15：水浴15min后测定管的透光度；OT15：水浴15min的空白管透光度；ST15：水浴15min后标准管的透光度；2.3.3.3肉鸭静脉血白细胞总数分别于28、35、42、49、56日龄早晨饲喂前，每组随机抽取鸭6只，趾静脉采血，加入5%的柠檬酸钠抗凝，全自动血细胞分析仪分析检测白细胞总数量。13 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响2.4数据分析对试验数据采用SPSS19.0和Excel统计软件进行统计分析，对各试验数据进行方差分析（ANOVA）和多重比较(Duncan’s)，以确定多组之间的显著差异。统计结果的数据用平均数±标准差（X±S）表示。142 山东农业大学全日制硕士专业学位论文3结果与分析3.1不同养殖环境试验处理组空气样品浓度3.1.1不同养殖环境试验处理组气载需氧菌浓度比较由表5可见，在试验过程中，对照组A、试验组B-E鸭舍内气载需氧菌浓度分别在0.46-1.81×104CFU/m3、0.69-5.07×104CFU/m3、0.68-5.76×104CFU/m3、0.59-5.96×104CFU/m3、0.71-8.93×104CFU/m3之间，每个处理组随着时间的增长，鸭舍内气载需氧菌浓度呈上升趋势，且第七、八周上升趋势趋于平缓。第四周各个处理组之间不具有显著差异（P＞0.05）。第五、六、七、八周，气载需氧菌浓度在对照组A与试验组E之间差异显著（P＜0.05）。实验结果表明：第四周各处理组不同的通风、清洁条件对鸭舍内气载需氧菌浓度没有显著影响，随着时间的推移，肉鸭一天天长大，以及排泄物的增多，第五周至第八周鸭舍内气载需氧菌浓度的变化显著受到不同通风、清洁条件的影响。表5不同养殖环境试验组气载需氧菌浓度比较（×104CFU/m3air）(n=9)Tab5Differentcultureenvironmenttestgroupofairborneaerobicbacteriaconcentration（×104CFU/m3air）(n=9)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEa1.34±0.78a1.37±0.71a1.32±0.69a1.70±1.44a第四周0.67±0.22a1.93±0.61ab1.37±0.41ab1.72±1.08ab2.83±1.09b第五周0.69±0.27a1.99±0.75ab3.04±1.73ab2.45±1.37ab3.68±0.89b第六周0.99±0.38a2.01±0.36ab3.80±1.35bc2.45±0.38ab5.33±1.74c第七周1.27±0.46a4.13±1.32ab4.77±1.51ab4.05±1.79ab4.98±3.41b第八周1.05±0.20*每列中字母相同者表示差异未达显著水平(P0.05)，字母不同者表示差异达显著水平(P0.05)。Thesamealphabetsinrightsideofthesamelistshownosignificance(P0.05),onthecontrary,havingsignificance(P0.05).*表中数据以平均值±标准差表示，下同。Datatomean±standarddeviationintable,thesamebelow.15 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响3.1.2不同养殖环境试验处理组气载真菌浓度比较由表6可见，在试验过程中，对照组A、试验组B-E鸭舍内气载真菌浓度分别在0.10-2.54×104CFU/m3、0.21-3.54×104CFU/m3、0.19-3.94×104CFU/m3、0.76-5.73×104CFU/m3、0.78-8.05×104CFU/m3之间，每个处理组随着时间的增长，鸭舍内气载需氧菌浓度呈上升趋势。第四周显示气载真菌浓度在对照组A和实验组D之间差异显著（P＜0.05），组A、组B、C、E之间差异不显著（P＞0.05），第五周、第六周、第七周、第八周，各周呈现相同的差异显著性：气载真菌浓度、试验组D，对照组A、试验组E之间差异明显（P＜0.05），对照组A和试验组B，试验组D和试验组E之间差别不显著（P＞0.05）。试验结果表明：第四周各处理组不同的通风、清洁条件对鸭舍内气载真菌浓度没有显著影响，随着时间的推移，肉鸭一天天长大，以及排泄物的增多，第五周至第八周鸭舍内气载真菌浓度的变化显著受到通风、清洁条件不同的影响。表6不同养殖环境试验组气载真菌浓度比较（×104CFU/m3air）(n=9)Tab6Differentcultureenvironmentofairbornefungiconcentrationtestgroup（×104CFU/m3air）(n=9)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaababbab第四周0.28±0.150.48±0.340.44±0.372.15±1.501.68±1.14aaabcbc第五周0.75±0.180.94±0.111.45±0.272.36±0.732.24±0.65aababbb第六周0.73±0.141.43±0.611.61±0.612.41±0.242.26±0.89aababc第七周0.91±0.322.12±0.861.42±0.552.87±1.024.36±0.49aababbcc第八周2.05±0.522.58±0.862.86±0.954.67±1.076.18±1.913.1.3不同养殖环境试验处理组气载内毒素浓度比较由表7可见，在试验过程中，对照组A、试验组B-E鸭舍内气载内毒素浓度分别在0.02-2.56×104EU/m3、0.04-7.24×104EU/m3、0.03-10.24×104EU/m3、0.01-1.44×105EU/m3、0.005-1.02×105EU/m3之间，每个处理组随着时间的增长，第四周至第七周鸭舍内气载内毒素浓度呈上升趋势，第八周略下降。第四周，气载内毒素的浓度在对照组A、试验组B、C、E组之间差异不显著（P＞0.05）。五、七周各处理组之间差异不显著（P＞0.05）。六、八周，气载内毒素浓度分别在对照组A和试验组E、试验组162 山东农业大学全日制硕士专业学位论文B和试验组E间差异显著（P＜0.05）。实验结果表明：第四、五、七周，各处理组鸭舍气载内毒素浓度的变化并没有显著受不同通风和清洁条件的影响，第六、八周，不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组鸭舍中气载内毒素的变化。表7不同养殖环境试验组气载内毒素浓度比较（×104EU/m3air）(n=9)Tab7Differentcultureenvironmenttestgroupofairborneendotoxinconcentrationcomparison（×104EU/m3air）(n=9)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaababab第四周0.06±0.040.13±0.090.08±0.060.49±0.390.17±0.13aaaaa第五周0.30±0.130.34±0.260.87±0.411.84±1.561.56±1.14aaababb第六周0.96±0.731.10±0.802.15±2.172.27±1.517.66±6.61aaaaa第七周1.36±1.042.77±3.863.59±5.757.13±6.576.25±4.56abaababb第八周1.05±0.020.94±0.321.26±1.162.27±1.513.56±3.283.2不同养殖环境生物应激因素对肉鸭福利指标的影响3.2.1不同养殖环境生物应激因素对肉鸭盲肠微生物的影响由表8可见，不同时间段，对照组A、试验组B-E肉鸭盲肠内容物大肠杆菌浓度有增加趋势。第六周对照组A、试验组B-E肉鸭盲肠内容物大肠杆菌浓度是5.61㏒10CFU/g、6.37㏒10CFU/g、5.30㏒10CFU/g、6.72㏒10CFU/g、7.11㏒10CFU/g。不同处理组肉鸭盲肠内大肠杆菌的浓度随时间增长未见明显规律。第四周对照组A和试验组B、对照组A和试验组C、试验组D和试验组E间盲肠内大肠杆菌浓度差异不显著（P＞0.05）；第六周、第八周，对照组A与试验组D、试验组E盲肠内大肠杆菌浓度分别差异显著（P＜0.05）。试验结果表明：第四周各处理组间盲肠内大肠杆菌浓度的变化受环境变化影响不显著，第六周、第八周不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭盲肠内容物大肠杆菌浓度的变化，随着环境的恶劣，肉鸭盲肠内容物大肠杆菌浓度显著增加。17 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响表8不同养殖环境试验组盲肠内容物大肠杆菌浓度的比较(㏒10CFU/g)(n=5)Tab8ComparisonofdifferentcultureenvironmenttestgroupcecalcontentsofEscherichiacoliconcentration(㏒10CFU/g)(n=5)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEabbacc第四周5.84±0.025.94±0.035.54±0.026.41±0.436.47±0.16ababb第六周5.61±0.796.37±0.065.30±0.146.72±0.367.11±0.24caaab第八周5.44±0.155.95±0.186.31±0.056.72±0.386.72±0.10由表9可见，不同时间段，对照组A、试验组B-E肉鸭盲肠内容物乳酸杆菌浓度有降低趋势。不同组肉鸭盲肠内容物乳酸杆菌浓度随时间的增长有上升趋势。第六周对照组A、试验组B-E肉鸭盲肠内容物乳酸杆菌浓度分别为7.94㏒10CFU/g、7.14㏒10CFU/g、7.71㏒10CFU/g、7.05㏒10CFU/g、6.54㏒10CFU/g。第八周，各处理组之间肉鸭盲肠内乳酸杆菌的浓度差异不显著（P＞0.05）；第四周、第六周，对照组A与试验组D、试验组E盲肠内乳酸杆菌浓度分别差异显著（P＜0.05）。试验结果表明：第八周各处理组间盲肠内大肠杆菌浓度的变化受环境变化影响不显著，第四周、第六周不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭盲肠内容物乳酸杆菌浓度的变化，随着环境的恶劣，肉鸭盲肠内容物乳酸杆菌浓度显著降低。表9不同养殖环境试验组盲肠内容物乳酸杆菌浓度的比较(㏒10CFU/g)(n=5)Tab9ComparisonofdifferentcultureenvironmenttestgroupcecalcontentsofLactobacillusconcentration(㏒10CFU/g)(n=5)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaaabb第四周6.49±0.236.51±0.106.71±0.186.04±0.206.01±0.14cabcbcaba第六周7.94±0.277.14±0.237.71±0.857.05±0.106.54±0.18aaaaa第八周7.97±0.837.29±0.227.02±0.217.01±0.247.19±0.69182 山东农业大学全日制硕士专业学位论文3.2.2不同养殖环境生物应激因素对肉鸭步态评分的影响由表10可见，54日龄时，肉鸭步态评分方面，在对照组A与试验组C、D、E之间分别差异显著（P＜0.05）。对照组A（0.33）＜试验组B（0.83）＜试验组C（1.33）＜试验组D（2.00）＜试验组E（2.17）。对照A组与B组差异不显著（P＞0.05），C组、D组、E组之间差异不显著（P＞0.05）。试验结果表明：不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭外观步态评分变化。随着环境越恶劣，肉鸭的外观步态评分显著提高，福利状况显著下降。表10不同养殖环境试验组肉鸭外观步态评分的比较(n=6)Tab10Comparisonofscoresofdifferentcultureenvironmenttestwasconductedtotheappearanceofgait(n=6)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaabbccc54日龄GS0.33±0.520.83±0.751.33±0.522.00±0.892.17±0.753.2.3不同养殖环境生物应激因素对肉鸭肢体不对称性的影响由表11可见，54日龄时，肉鸭肢体不对称性方面，对照组A（3.87）＜试验组B（4.82）＜试验组C（6.79）＜试验组D（8.27）＜试验组E（9.27）在对照组A与试验组C、D、E之间分别差异显著（P＜0.05）。对照A组与B组差异不显著（P＞0.05）。C组、D组、E组之间差异不显著（P＞0.05）。试验结果表明：不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭肢体不对称性变化。随着环境越恶劣，肉鸭的综合FA显著提高，福利状况显著下降。表11不同养殖环境试验组肉鸭肢体不对称性(FA)的比较(n=6)Tab11Comparisonofscoresofdifferentcultureenvironmenttestwasconductedtotheappearanceofgait(n=6)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaabbccc54日龄FA3.87±0.874.82±1.156.79±2.128.27±0.799.27±1.3819 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响3.3不同养殖环境生物应激因素对肉鸭相关免疫指标的影响3.3.1不同养殖环境生物应激因素对肉鸭免疫器官指数的影响由表12可见，第四周、第六周、第八周肉鸭胸腺指数在对照组A、试验组B、C、D、E间依次减小趋势。对照组A与试验组C、D、E间分别差异显著（P＜0.05）。对照组A分别高于试验组C、D、E；试验结果表明：不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭胸腺指数的变化。表12不同养殖环境试验组肉鸭胸腺指数的比较(n=5)Tab12Comparisonofdifferentcultureenvironmenttestgroupduckthymusindex(n=5)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEdcdbcaba第四周4.04±0.403.37±0.572.92±0.021.94±0.381.87±0.91aabbccd第六周7.26±1.576.43±1.254.81±0.263.73±1.201.45±0.45aabbcc第八周7.91±1.217.49±1.695.72±1.142.80±0.781.38±0.45由表13可见，第四周、第六周、第八周肉鸭脾脏指数在对照组A、试验组B、C、D、E间依次减小趋势，对照组A与试验组C、D、E间分别差异显著（P＜0.05）。对照组A分别高于试验组C、D、E；试验结果表明：不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭脾脏指数的变化。表13不同养殖环境试验组肉鸭脾脏指数的比较(n=5)Tab13Comparisonofdifferentcultureenvironmenttestwasconductedtothespleenindex(n=5)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaabbcbcc第四周2.09±0.461.58±0.111.34±0.261.11±0.570.81±0.07aabbccdd第六周3.62±0.433.09±0.412.33±0.411.61±0.601.04±0.38aabbcc第八周3.96±0.123.32±0.552.71±0.611.98±0.291.20±0.23202 山东农业大学全日制硕士专业学位论文由表14可见，第四周、第六周、第八周肉鸭法氏囊指数在对照组A、试验组B、C、D、E间依次减小趋势，对照组A与试验组C、D、E间分别差异显著（P＜0.05）。对照组A分别高于试验组C、D、E；试验结果表明：不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭法氏囊指数的变化。表14不同养殖环境试验组肉鸭法氏囊指数的比较(n=5)Tab14Comparisonofdifferentcultureenvironmenttestgroupduckbursaindex(n=5)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaababcbcc第四周2.64±0.602.13±0.421.93±0.231.38±0.581.18±0.41caabb第六周4.17±0.173.33±0.892.68±0.281.76±0.221.17±0.27aacbb第八周3.99±0.393.93±0.252.67±0.271.41±0.550.95±0.063.3.2不同养殖环境生物应激因素对肉鸭血清溶菌酶的影响由表15可见，对照组A、试验组B、C、D、E的肉鸭血清溶菌酶含量在第四周、第五周依次呈上升趋势。在第六周、第七周、第八周呈依次下降趋势。第四周时，各处理组间差异不显著（P＞0.05）。第五周、第六周对照组A与试验组C、D、E间分别差异显著（P＜0.05）。第五周，对照组A低于试验组C、D、E。第六周，对照组A高于试验组C、D、E。第七周、第八周肉鸭血清溶菌酶含量在各处理组间差异显著（P＜0.05）。对照组A＞试验组B＞试验组C＞试验组D＞试验组E。试验结果表明：第四周各处理组间肉鸭血清溶菌酶含量的变化受环境变化影响不显著，第五、六、七、八周，不同养殖环境对肉鸭血清溶菌酶含量具有显著影响。21 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响表15不同养殖环境试验组血清溶菌酶含量比较（U/ml）(n=5)Tab15Comparisonofdifferentcultureenvironmenttestgroupserumlysozymecontent（U/ml）(n=5)组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaaaaa第四周120.08±0.84126.42±0.37134.44±0.46136.86±0.63138.46±0.43ababcc第五周148.80±0.66150.42±0.43149.61±0.55152.88±0.64156.00±0.73aacbb第六周153.65±0.61152.00±2.10148.82±0.72145.62±0.36144.00±0.52abcde第七周176.06±0.66158.42±0.39152.00±0.64144.81±0.36141.69±0.80abcde第八周196.00±1.12180.08±1.30156.83±0.88144.00±1.12139.25±0.883.3.3不同养殖环境生物应激因素对肉鸭静脉血白细胞细胞数量的影响由表16可见,不同处理组间的肉鸭静脉血液中的白细胞总数差异不显著(P>0.05)。试验结果表明:不同的养殖环境对肉鸭的静脉血白细胞总数没有显著影响。表16不同养殖环境试验组静脉血白细胞数量比较（×109/L）（n=5）Tab16Quantitativecomparisonofdifferentcultureenvironmenttestgroupvenousbloodwhitecells（×109/L）（n=5）组别Group时间Time对照组A实验组B实验组C实验组D实验组EControlgroupAGroupBGroupCGroupDGroupEaaaaa第四周210.84±14.73198.41±9.64223.10±11.04213.83±22.06213.27±19.34aaaaa第五周203.85±16.08192.70±7.67204.03±22.30200.13±23.38219.80±20.79aaaaa第六周214.53±15.31204.23±9.28222.24±11.55211.26±10.98206.75±7.97aaaaa第七周205.77±19.62198.83±14.86211.80±43.55205.27±8.16206.27±8.92aababb第八周199.53±15.58198.78±5.44238.33±25.38220.04±16.35240.09±15.96222 山东农业大学全日制硕士专业学位论文4讨论现阶段，集约化养殖产业是我国畜禽养殖和发展的集中表现形式。和发达国家进行比较，在理解防治动物疾病中，环境卫生起到不可忽视甚至非常重要的作用这一点上尚且存有一定的差距。中国国内畜禽传染病的防制办法中，绝大部分都只是注意疫苗的免疫预防作用、药物的防治效果、益生菌的防治，但很少和环境卫生对畜禽和畜禽传染病关系的影响的探索。动物所处的环境中，有害应激因素的含量、暴露作用时间和物理、化学、生物性质决定了他们对动物身体的危害程度。在较小的有害应激因素含量和强度时，畜禽能够利用自身机体的调控作用，使身体处于代偿状态。这种情况下，畜禽并不会出现明显的临床症状。但是随着环境有害应激因素含量的提高，一旦超出畜禽机体所能承受的适应范围时，畜禽机体就会发生许多变化。比如：免疫抵抗力降低，采食量大大下降或者是禁食、嗜睡、乏力，导致人体的病理变化，温度高，甚至造成动物死亡。养殖环境污染影响范围大、作用时间长、治理难度大，无法做到污染后的有效治理。环境一旦恶化，对动物乃至人类都是不可磨灭的大灾难。因此从源头抓起，采取积极措施，将环境污染各指标控制在一定限值内。从根本上有效避免养殖环境的污染，为动物，为人类提供一个良好的生产生活空间。气载微生物含量是环境质量的指征。环境质量差，气载微生物含量高，通过呼吸、直接接触、消化道作用于动物机体，长期的或严重的应激导致免疫抑制，表现为生产性能下降，盲肠内容物菌群失调，免疫功能衰弱等。因此，在集约化规模化畜禽生产中重视饲养卫生、保健、生物安全、环境控制是最重要的。4.1不同养殖环境中生物应激因素浓度的比较分析4.1.1不同养殖环境中气载需氧菌浓度的比较分析细菌的细胞结构的完整性，是生物圈的重要成员，重要的是保持生态平衡的人类和动物的身体。总的来说，人类和动物并没有病，这是因为细菌的很大一部分是非致病或条件致病菌，与人体的呼吸道有一定的防御作用。但是，当致病菌被人体呼吸道吸入或者人体的防御能力减弱，此时就会引发各种疾病。例如废水沙门氏菌(Salmonellassp)浓度达到103-106时就有潜在威胁。猪舍中的总气载细菌浓度平均值为1.35×104CFU/m3。23 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响本实验结果发现，在试验过程中，对照组A、试验组B-E鸭舍内气载需氧菌浓度分别达到1.81×104CFU/m3、5.07×104CFU/m3、5.76×104CFU/m3、5.96×104CFU/m3、8.93×104CFU/m3。每个处理组随着时间的增长，鸭舍内气载需氧菌浓度呈上升趋势，且第七、八周上升趋势趋于平缓。畜禽舍微生物气溶胶来源于动物体及其排泄物、垫料、饲料等，动物舍有计划地通风、清洗和消毒，能够减少空气中悬浮物和微生物气溶胶的数量，净化空气，达到改善空气质量的目的。随着时间的推移，肉鸭一天天长大，以及排泄物的增多，第五周至第八周鸭舍内气载需氧菌浓度的变化显著受到不同通风、清洁条件的影响。4.1.2不同养殖环境中气载真菌浓度的比较分析丝状真菌(Filamentousfungi)在环境中无处不在，部分丝状真菌寄生于植物如腐生植物的表面，可以分解很多有机物和能够导致植物和动物发生疾病的病原微生物。大量真菌产生许多的容易在空气中传播的孢子，随着湿度的变化，它们也具有了施放孢子能力。室外空气存在大量真菌孢子，它的浓度通常是103-105/m3，收获的季节或者脱粒的时候孢子的浓度就会超过106/m3，甚至能够达109/m3或更高。本实验结果发现，在试验过程中，对照组A、试验组B-E鸭舍内气载真菌浓度分别达到2.54×104CFU/m3、3.54×104CFU/m3、3.94×104CFU/m3、5.73×104CFU/m3、8.05×104CFU/m3，每个处理组随着时间的增长，鸭舍内气载需氧菌浓度呈上升趋势。第四周各处理组不同的通风、清洁条件对鸭舍内气载真菌浓度没有显著影响，随着时间的推移，排泄物的增多，第五周至第八周鸭舍内气载真菌浓度的变化显著受到通风、清洁条件不同的影响。4.1.3不同养殖环境中气载内毒素浓度的比较分析内毒素(Endotoxins)是高分子、耐热脂多糖(LPS)，是脂类和杂多糖共价复合物构成，存在于革兰氏阴性菌细胞外膜层，由蛋白与卵磷脂形成杂聚物，三孔膜或直径形成一个盘状颗粒特性在大量的形式有机粉尘和气溶胶容易形成。一些报告表明，内毒素可引起呼吸道疾病，如恶性家禽：肺炎，呼吸道梗阻，指出气载内毒素是重要指示空气环境的有机粉尘测量。本实验结果发现，在试验过程中，对照组A、试验组B-E鸭舍内气载内毒素浓度分别达到0.02-2.56×104EU/m3、0.04-7.24×104EU/m3、0.03-10.24×104EU/m3、0.01-1.44×105EU/m3、0.005-1.02×105EU/m3。各试验组内毒素浓度都已大大超过了对人体无影响的推荐标准（2000EU/m3，LaceyandDutkiewicz，1994）每个处理组随着时间242 山东农业大学全日制硕士专业学位论文的增长，第四周至第七周鸭舍内气载内毒素浓度呈上升趋势，第八周略下降。第四、五、七周，各处理组鸭舍气载内毒素浓度的变化并没有显著受不同通风和清洁条件的影响，第六、八周，不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组鸭舍中气载内毒素的变化。4.2不同养殖环境对肉鸭福利状况的影响4.2.1不同养殖环境对肉鸭盲肠微生物菌群的影响盲肠肠道的重要组成部分，良好的肠道菌群平衡，应包括大量的乳酸菌在盲肠内容物中，这是鸡群抵御细菌感染的首要的防御机制（Tuyttensetal.,2008）。实验结果表明，不同时间段，对照组A、试验组B-E大肠杆菌的浓度呈现增加趋势，乳酸杆菌浓度呈现减少趋向，随着环境的恶劣，肉鸭大肠杆菌含量明显增加，乳酸杆菌含量明显减少，由于试验鸭只数量的限制，未检出沙门氏菌。较好环境肉鸭舍中的肉鸭盲肠内的乳酸杆菌数显著高，一定成程度上抑制了大肠杆菌的量，此说明环境良好的肉鸭舍可以改善畜禽的健康水平，提高盲肠内的乳酸杆菌数，增强肉鸭机体抵抗力，提高福利水平。4.2.2不同养殖环境对肉鸭肢体不对称性的影响FA值反映了动物福利和舒适程度,FA值和家禽生长周围环境相关。然而，FA值和部分家禽福利水平的报道是不一致的，更大的FA值，家禽肢体不对称的特点，证明家禽生长环境更恶化，福利水平越低（Moller，1995）；自然群体FA值越大说明家禽的个体品质越差(Manning,2003)，对于农场动物来说,FA值越大说明生产力越低下；相反的报道却出自（Clarke，1995,1998)的报道，造成报道结果不同的缘由可能是对FA的衡量和剖析缺乏标准化、统一化的设计(Lens,2002)，以及性状的选择缺乏针对性。本试验根据肉鸭骨骼发育的特点,选择了2个不同部位（腿、翅）的肢体性状进行测量，实验结果表明，肉鸭肢体不对称性在对照组A与试验组C、试验组D、试验组E间分别差异显著（P＜0.05），不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭肢体不对称性变化。此外，我们也应看到有关措施与FA的环境胁迫因子，对单个性状和平均值不太多的依赖，需要更多的联合分析指标性状是更有说服力的强度，结果才更加可靠(Leungetal.,2000)。4.2.3不同养殖环境对肉鸭外观步态评分的影响步态评分（Gatescoring,GS）：步态评分是一个被认可的评估肉鸡行走能力的方法（Kestinetal.,1992）。商用肉鸡的行走能力较差与育成鸡的迅速生长相关(Kestinetal.,25 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响1992)。这和腿部的健康情况、生长率非常大的关联性。尽管因为福利条件改善以及对跛腿情况的注重，此为相对滞后的指标，但是步态评分这种方法是评价腿部骨骼肌肉健康情况的很有效方法，同时，它也是反映家禽腿部健康状况的一个经典方法。实验结果表明，肉鸭肢体步态评分在对照组A与试验组C、试验组D、试验组E间分别差异显著（P＜0.05），不同通风和清洁条件的变化显著影响各处理组肉鸭步态评分的差异，良好的通风和环境，较小的气载微生物浓度有效减少步态缺陷肉鸭量,而较大浓度的气载微生物浓度使步态缺陷的肉鸭量显著提高，说明鸭舍气载微生物的含量与肉鸭的步态情况有一定相关性。因而，造成以上外观步态和肢体不对称性的结果可能是因为微生物应激因素抑制了机体免疫组织的功能，神经体液平衡和生理代谢受到不良影响，肉鸭的全身状况不佳，运动量减少，限制了肉鸭的活动和日常需求运动量。4.3不同养殖环境对肉鸭相关免疫指标的影响家禽免疫系统主要由免疫器官、细胞和因子构成。免疫器官主要包含中枢性免疫器官(法氏囊、骨髓和胸腺)和外周性免疫器官(淋巴结、脾脏、哈德氏腺体和粘膜相关淋巴组织)；家禽的免疫系统不同于哺乳动物囊是鸟类特有的免疫器官胸腺和家禽增长将萎缩，家禽免疫功能主要依赖于外周血、脾脏。家禽免疫系统十分错综复杂,其免疫应答过程也是繁杂的,囊括大量细胞反应和化学介质的作用,以平衡机体能够应对机体外的危险。免疫是家禽的特异性生理反应，可以识别和消除对维护机体内外环境平衡的抗原性。动物机体的免疫功能是组织器官中各种单核细胞、淋巴细胞、其他免疫细胞和他们产物互相作用完成。免疫系统能够识别的最佳信号的感染，使各种病原微生物进入人体体内，立即组织非特异性和特异性免疫防御，抗感染；同时清楚对体内新陈代谢过程产生的大量失去功能的细胞,保持机体自身稳定。当机体健康细胞在各种因素作用下诱变成不正常的肿瘤细胞时,免疫系统可以即刻识别并且清除,完成免疫监视过程(杨汉春，1996)。在其生长发育和生产过程中的家禽，内部环境和外部环境的进料平衡是一个不断变化的。不仅各种病原体,如内毒素、真菌、细菌、病毒等无休止的击破家禽的内环境,需要家禽适应变化形成新的动态平衡，而且环境因素诸如禽舍内的有害气体、气载微生物等也可以影响肉鸭机体内环境,使其处于失调状态。这种情况侵害了机体抵抗力,扰乱了免疫系统整体性和高效性,导致家禽处在免疫抑制的状态。免疫抑制是由于免疫系262 山东农业大学全日制硕士专业学位论文统的损害，导致持续性或临时性下降，免疫功能，增强人体的易感性疾病的异常免疫状态。动物受到病源菌或者外界恶劣生活环境的影响时，就容易处于免疫抑制这样一种健康与病态之间的亚健康的状态，这将导致动物生产性能的下降疾病弱化现象。家禽机体免疫系统作用的下降的影响因素有很多：噪音、光线改变、冷热应激、化学物质、营养水平和环境应激等因素；应激对家禽免疫最重要的表现就是抑制的作用,在幼禽阶段抑制的表现更加凸显,但在初期也具有加强作用(袁建敏等，2007)。家禽机体的免疫系统如果不能及时有效的对抗病原菌,各种病原菌就会导致疾病的大范围的爆发(贺喜，2007)。适度的应激激活状态能抵御外来的抗原对动物机体的损伤，但高度或长期的免疫激活就会改变畜禽的行为、神经内分泌以及代谢,最终抑止动物的生长，对畜牧生产带来损失(贺喜，2007)。4.3.1五种不同养殖环境生物应激因素对肉鸭免疫器官指数的影响法氏囊，脾，胸腺是主要的家禽免疫器官。在细胞免疫和体液免疫中起着非常重要的作用。胸腺和法氏囊是禽类的中枢免疫器官,胸腺主要与细胞介导免疫有关的淋巴细胞的成熟，是T细胞分化成熟的场所，法氏囊负责将要产生体液抗体的免疫活性细胞的发生,是B淋巴细胞分化和成熟的重要地方。胸腺随年龄的不同而大小出现差异，相对于它的体重来讲,在出生的时候最大。但是它的绝对大小是青春期的时候最大。青春期之后，胸腺又随着年龄的增长而逐渐的退化。动物受到应激，处在应激状态时，可加快胸腺的萎缩。脾脏作为禽类最大的外周免疫器官,包含大量的B细胞、T细胞等，是免疫应答的首要场所,脾脏中聚居着大量淋巴细胞和其余的免疫细胞。当抗原进入脾脏的时候，抗原就会立刻诱导T细胞和B细胞的活化与增殖，发生浆细胞与致敏T细胞。所以，脾脏作为体内产生抗体的主要器官，参与着全身的体液免疫和细胞免疫。胸腺、脾脏和法氏囊免疫器官指标能够在一定程度上反映机体免疫功能的强弱。一般认为免疫器官指数大说明免疫器官发育良好，机体免疫力高。免疫器官指数小说明免疫器官发育不好，机体免疫低。puvadolpirod等(2000)指出,应激对细胞介导免疫主要起抑制作用，应激时由于糖皮质激素(GC)水平升高。因此环境有害物质可以损伤免疫器官，损坏免疫机能,减少免疫蛋白的数量，引起机体免疫力的降低。本实验结果发现：脾脏、胸腺、法氏囊指数在不同时间段内（自28日龄起）均表现为对照组A＞试验组B＞试验组C＞试验组D＞试验组E，说明对照组A到试验组B-E免疫器官发育依次减弱，机体免疫力依次降低。脾脏、胸腺、法27 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响氏囊指数在组A与组C、D、E之间分别差异显著（P＜0.05），不同通风和清洁条件的变化造成的养殖环境中生物应激因素（气载需氧菌、气载真菌、气载内毒素）显著影响降低了肉鸭机体的免疫能力。4.3.2不同养殖环境生物应激因素对肉鸭血清溶菌酶的影响溶菌酶是巨噬细胞、中性粒细胞、单核细胞的产物,在动物正常的体液及组织中的非特异性免疫因素,它具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种药理作用。溶菌酶对革兰氏阳性菌十分敏感，其溶菌机理是催化水解细胞壁多糖成分中β-1,4-N-乙酞胺基葡萄糖苷键,细菌溶解是键裂开的间接指标。单核吞噬细胞血清溶菌酶浓度主要发布，可以被视为具有较高的活性和抗原呈递吞噬细胞吞噬系统功能描述，从而提高抗菌防御功能。血清中LSZ的主要来源于由巨噬细胞合成和释放而至,血清中溶菌酶活性能够在一定程度上反应细胞的免疫功能和机体的抗感染本领（张宜霞等，1984；王世若，1996）。其水平的提高又利于疾病的恢复,故检测血清中LSZ含量,能反应机体的免疫功能及抗感染能力。所以血清溶菌酶是抗细菌感染中一种非常特殊的非特异性免疫因子，其活力作为机体非特异性免疫好坏的有效指征（周平等，1996）。本试验结果发现，对照组A、试验组B、C、D、E的肉鸭血清溶菌酶含量在28日龄到35日龄依次呈上升趋势，在42日龄到56日龄呈依次下降趋势，这与张红双（2010）研究结果一致。第四周时，各处理组间差异不显著（P＞0.05），第五周、第六周对照组A与试验组C、D、E间分别差异显著（P＜0.05），第七周、第八周肉鸭血清溶菌酶含量在各处理组间差异显著（P＜0.05）。试验前期，随着气载微生物浓度的升高，溶菌酶含量依次上升，在通风和卫生条件恶劣的情况下，肉鸭舍内气载微生物浓度较高，由呼吸道进入肉鸭机体的气载微生物浓度较大，机体大部分巨噬细胞产生溶菌酶，以提高机体的抗感染能力。试验后期，对照组A、试验组B、C、D、E的肉鸭血清溶菌酶含量依次呈下降趋势，这可能是由于气载有害微生物浓度大的状况下，引起了肉鸭机体的免疫应答下降。也就是肉鸭长期处于气载微生物浓度较高的畜禽舍内活动，降低了机体非特异性抵抗力，使机体更易感染疾病。4.3.3不同养殖环境生物应激因素对肉鸭静脉血白细胞总数的影响白细胞是一类具有核的血细胞，按照它的形态、功能和来源，可以分成单核细胞、粒细胞、淋巴细胞。对嗜酸性粒细胞中性粒细胞胞浆颗粒颜色差异的基础上，可分为嗜酸性粒细胞，中性粒细胞，嗜碱性粒细胞（陈杰，2005)。白细胞执行着机体重要的免疫防卫功能。通过检测外周血白细胞的数量能够了解机体免疫功能。机体受到282 山东农业大学全日制硕士专业学位论文应激后，白细胞总数一般表现增加。白细胞总数的变化可以反映机体的防御功能的一般和特殊变化，因为白细胞对机体具有十分重要的防御和保护功能(傅伟龙，2001)。本试验研究结果表明，各处理组的白细胞总数在数值上有升高的趋势，但不显著(P>0.05)，说明养殖环境中的气载微生物在一定程度上引起了免疫应激反应，免疫应激是处于正常和病态两者间的一种中间过渡的状态，它是动态的过程,囊括免疫应激源、免疫应激中间反应、整个免疫应激体系的各个因素间的相互干扰和动态的过程当中的各阶段的反馈作用(贺喜，2007)。气载微生物对肉鸭静脉血白细胞总数影响不显著可能是因为肉鸭对其的耐受性和气载微生物浓度有关。29 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响5结论5.1通风条件差，卫生环境条件差，导致气载微生物含量升高。环境的优与差在很大程度上取决于卫生管理方式。对照组A、试验组B-E鸭舍内气载需氧菌浓度分别在0.46-1.81×104CFU(ColonyFormingUnit)/m3（空气）、0.69-5.07×104CFU/m3、0.68-5.76×104CFU/m3、0.59-5.96×104CFU/m3、0.71-8.93×104CFU/m3之间。鸭舍内气载真菌浓度分别在0.11-2.54×104CFU(ColonyFormingUnit)/m3（空气）、0.21-3.54×104CFU/m3、0.19-3.95×104CFU/m3、0.77-5.73×104CFU/m3、0.78-8.05×104CFU/m3之间。鸭舍内气载内毒素浓度分别在0.02-2.56×104EU(EndotoxinUnit)/m3（空气）、0.04-7.24×104EU/m3、0.003-1.024×104EU/m3、0.011-1.448×104EU/m3、0.006-1.024×104EU/m3之间。5.2肉鸭舍气体环境中生物应激因素浓度的升高，严重阻碍了肉鸭免疫器官的发育。降低了肉鸭血清溶菌酶的含量，肉鸭机体细胞免疫力减弱，抑制了机体免疫组织的功能。5.3肉鸭舍气体环境中生物应激因素浓度的升高，显著影响肉鸭福利水平。气载微生物浓度高的环境下，肉鸭机体盲肠内容物中大肠杆菌浓度高，有益菌乳酸杆菌浓度低。肉鸭的全身状况不佳，运动量减少，阻遏了肉鸭福利的良性发展。随着养殖环境清洁程度的提高，肉鸭福利水平也整体提高。302 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山东农业大学全日制硕士专业学位论文附录图1对照组AFig.1ThecontrolgroupA图2试验组BFig.2TestGroupB37 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响图3试验组CFig.3TestGroupC图4试验组DFig.4TestGroupD382 山东农业大学全日制硕士专业学位论文图5试验组EFig.5TestGroupE图6Andersn-6级撞击使采样器Fig.6Andersn-levelimpactthesampler39 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响图8盲肠内的乳酸杆菌Fig.8Lacticacidbacteriainthececum图7AGI-30收集器Fig.7AGI-30collector402 山东农业大学全日制硕士专业学位论文图9盲肠内的大肠杆菌Fig.9Appendixe.coli图10收集肉鸡舍的真菌样品Fig.10Fungalsamplesinduckhousing41 不同鸭舍生物应激因素的检测及其对肉鸭福利和相关免疫指标的影响致谢本研究是在导师柴同杰教授的悉心指导下完成的，导师严谨的科学态度、求真务实的做事风格，桃李芬芳的为师情怀，高尚的科学素养值得我一生不断学习和领悟。在课题设计、试验方案设计与实施、各指标测定和论文的撰写与修改过程都受到导师严格要求和无微不至的关心。两年的研究生生涯即将结束，在这过程中柴老师在我科研、学习和生活上指明了道路，并及时纠正道路中的错误，实事求是令我终生受益，在此，向柴教授致以我最崇高的敬意和感谢！本课题和论文的顺利完成，感谢王海荣、蔡玉梅老师的宝贵建议；同时还要感谢韦良孟老师、高丽丽师姐的指导和帮助，以及王方山、李超、李欣贤、王新桐、孙佳芝、刘雪惠、樊金、张晓丹、郝海玉、梁威等师兄师姐，同级的吴杰、秦桂平、艾文豪、刘纪元、郭梦娇，张金洲、杨文浩等师弟师妹给予的关心和帮助，祝你们工作顺利、事业有成。感谢陪伴我两年日日夜夜的316宿舍，舍友刘萌萌、李蓉、苏红芹、张慧蓉、李思菲给予我生活、学习上的帮助，感谢山东农业大学动物科技学院所有领导和老师们的关怀和支持！感谢父母两年来在物质上和精神上的支持，让我用更积极的生活态度和勇攀高峰的科研理念，不断挑战自我，超越自我。再多的感谢也道不尽我对学校、父母、老师、朋友的感激之情，真心祝福你们！我将以奋发向前的斗志，饱满的热情投身社会，去贡献自己的一份力量！王叶2015年6月422 山东农业大学全日制硕士专业学位论文攻读学位期间发表论文情况申请“一种产气荚膜梭菌α毒素基因工程疫苗及其应用”专利（审查中，申请号或专利号：201410117383.0）申请“一种产气荚膜梭菌ε毒素基因工程疫苗及其应用”专利（审查中，申请号或专利号：201410117381.1）43
