β- 人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒的开发

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1、学校代码10459学号或申请号Y20101610密级公开专业硕士学位论文β-人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒的开发作者姓名：罗艳容导师姓名：张守涛教授专业学位名称：生物工程培养院系：生命科学学院完成时间：2015年5月Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterβ-humanChorionicGonadotropinQuantitativeDetectionKitByYanrongLuoSupervisor:Prof.Shou

2、taoZhangBioengineeringSchoolofLifeSciencesMay2015学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：丄0。年《月）日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论

3、文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：3/1年6月2•曰摘要摘要人绒毛膜促性腺激素（hCG）由α和β两个亚基通过离子键和疏水键结合在一起，分子量大约为39KD，由合体滋养层细胞分泌，为人体胎盘和黄体

4、细[1-4]胞中产生的一种糖蛋白激素，对着床和胚胎营养有很大作用。同时对于妇科[5,6]炎症、绒毛膜疾病有一定的辅助诊断价值。本论文主要进行β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）免疫检测系统（化学发光法）的研发过程探讨及性能评估。研究方法：将郑州伊美诺公司制备的62株β位点抗体进行配对筛选,根据抗原抗体的最优化反应原则，确定包被、样品稀释液、酶结合物和反应模式。并建立校准品系统，试剂盒的线性范围、重复性、准确性、最低检测限、特异性及稳定性指标。检测1302例健康人血清，以测定值的99%为界限，通过SPSS软件计算参考区间。与

5、两家医疗机构合作，进行不同病理人群考核，验证试剂盒的临床准确性。结果：筛选出最优的1对抗体作为试剂盒开发的原材料，并确定了原材料的质量标准及工艺及反应体系。包被：PH6.5,0.2MPB,0.5μg/mL；酶结合物：PH7.5,0.01MTris-HCl,50%小牛血清；样品稀释液：PH7.5,0.01MTAPS,3%牛血清白蛋白；校准品：PH7.5,0.01MPBS,3%牛血清白蛋白，校准品溯源到国际参考品77364。反应体系：两步法，37℃温育60+30分钟，洗涤5次；底物A、B分别加入50μL，5分钟内测定。试剂盒可

6、以使用的样本为血清。校准曲线的建立为发光值取对数后，采用四参数拟合方式建立校准曲线。试剂盒的线性范围为1.0～1000mIU/mL；分析内变异、分析间变异和批间变异均不超过10%；测定500mIU/mL的LH、500mIU/mL的FSH、500μIU/mL的TSH，检测结果均不超过1.0mIU/mL；样本中添加50mg/dL的胆红素、150mg/dL的血红蛋白和6000mg/dL的甘油三酯对测定结果的影响小于10%；最低检测限测定值不超过1.0mIU/mL,回收率在0.85-1.15之间。考查了整套试剂盒的加速稳定性、拆封

7、稳定性和实时稳定性，结果均符合要求。参考值设定为5.0mIU/mL。临床研究：在两家医疗机构（河南省人民医院和河南省中医学院第三附属医院）分别测定I摘要110例和236例临床样本，结果显示河南省人民医院结果：考核试剂盒与对比试剂盒的阳性符合率为100%，阴性符合率为100%，总符合率为100%。河南省中医学院第三附属医院结果：考核试剂盒与对比试剂盒的阳性符合率为99.01%，阴性符合率为100%，总符合率为99.03%，两者无明显区别，两者检测数值呈高度相关。结论：本论文评估了β-人绒毛膜促性腺激素定量检测试剂盒（化学发光

8、法）的最低检测限、重复性、特异性、准确性、稳定性、建立了试剂盒的参考值、开展了临床应用研究，与已上市的国际同类权威试剂盒平行比对，结果表明本试剂盒临床符合率高、检测准确性好、性能指标达到国际同类厂家水平。关键词:制备工艺研究性能评价临床研究稳定性研究IIAbstractAbstractHumanchor