顺铂前药用于肝细胞癌靶向治疗的研究

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1、分类号：R94学校代码：10062密级：学号：2012602177硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：顺铂前药用于肝细胞癌靶向治疗的研究TITLEThestudyofaprodrugofcisplatinforthetargtedtherapyagainsthepatocellularcarcinoma一级学科：药学二级学科：药剂学论文作者：王妍指导教师：王银松副教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R94学校代码：10062密级：学号：2012602177学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTE

2、R’SDISSERTATION论文题目：顺铂前药用于肝细胞癌靶向治疗的研究TITLEThestudyofaprodrugofcisplatinforthetargtedtherapyagainsthepatocellularcarcinoma一级学科：药学二级学科：药剂学论文作者：王妍指导教师：王银松副教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对

3、本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的肝细胞癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，化学治

4、疗在肝细胞癌的治疗中发挥着重要的作用，尤其是中晚期患者的治疗。顺铂是临床上常用的广谱化疗药物，但由于其半衰期短、水溶性差、毒性大而限制了其在临床上的广泛应用。为了克服以上缺点，本研究设计了一种基于普鲁兰多糖的顺铂前药，以期用于对肝细胞癌的靶向治疗。内容本论文的研究内容分为三部分。第一部分为顺铂-琥珀酰基普鲁兰多糖高分子前药CDDP-SUPA的制备及表征。第二部分为CDDP-SUPA的体外研究，包括释药特性、细胞毒性、与DNA的相互作用、对细胞凋亡及细胞周期的影响。第三部分为CDDP-SUPA的体内研究，包括在正常小鼠体内的急性毒性、在肝细胞癌荷瘤小鼠体内的

5、组织分布情况及其抗肿瘤的活性。方法1.制备与表征：通过两步酯化反应合成高分子前药CDDP-SUPA。首先，将普鲁兰多糖与琥珀酸苷反应生成琥珀酰基普鲁兰多糖（SUPA），再将顺铂（CDDP）通过酯键偶联于SUPA，即得CDDP-SUPA；利用IR和1HNMR对CDDP-SUPA的化学结构进行确证；采用pH滴定法检测SUPA中琥珀酰基取代度；采用原子吸收分光光度法测定CDDP-SUPA分子中CDDP的含量。2.体外实验：采用动态透析法考察CDDP-SUPA的体外释药特性。利用CCK8试剂盒检测CDDP-SUPA对肝细胞癌HepG2的毒性；将CDDP-SUPA与

6、基因组DNA共孵育，采用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增报告基因，并通过琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，考察CDDP-SUPA对DNA复制的影响；通过流式细胞术分析CDDP-SUPA对HepG2细胞凋亡的诱导作用，并利用细胞周期试剂盒分析CDDP-SUPA对其细胞周期的影响。3.动物体内实验：考察CDDP-SUPA对正常小鼠的急性毒性，并通过HE染色法分析CDDP-SUPA对肝、肾组织病理学变化的影响。构建肝细胞癌MHCC-97H裸鼠移植瘤模型，通过小动物活体成像技术分析荧光标记的I天津医科大学硕士学位论文CDDP-SUPA-Cy5.5在荷瘤小鼠体内的组织分

7、布情况；采用尾静脉注射给药的方式，评价CDDP-SUPA在荷瘤小鼠体内的抗肿瘤作用，并通过HE染色法分析CDDP-SUPA对肿瘤组织病理学改变的影响。结果1.合成了顺铂高分子前药CDDP-SUPA，其分子中琥珀酰基的取代度为38.2%，CDDP的含量为18.7%。2.与游离CDDP相比，CDDP-SUPA在pH7.4的PBS缓冲液及含10%人血清pH7.4的PBS缓冲液（PBS/10%HS）中，均显著延缓了CDDP的释放。3.和对肺癌A549细胞的作用相比，CDDP-SUPA对肝细胞癌HepG2细胞的生长具有更强的抑制作用；CDDP-SUPA显著地抑制了基

8、因组DNA的复制，且抑制作用呈现明显的浓度依赖性；CDDP-SUP