禽网状内皮组织增生症病毒与a亚群白血病病毒共感染的致病性分析

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1、分类号：单位代码：密级号：博士学位论文禽网状内皮组织增生症病毒与亚群白血病病毒共感染的致病性分析研究生：李俊平士匕已十日寸教师：于康震研究员合作指导教师：杨汉春教授申请学位门类级别：农学博士专业名称：预防兽医学研究方向：动物分子病毒学与免疫学所在学院：动物医学院Ph.D.DissertationAnalysisonPathogenicityofCoinfectionofAvianReticuloendotheliosisViruswithLeukosisVirusSubgroupAPh.DCandidate:LiJunpingSupervisor:Professor

2、YuKangzhenProfessorYangHanchunMajor:PreventiveVeterinaryMedicineResearchField:MolecularVirology&ImmunologyChinaAgriculturalUniversityMay,2015本研究受科技部科技基础性工作专项（资助独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工

3、作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）摘要近年来，我国鸡群中禽网状内皮组织增生症病毒（和亚群禽白血病病毒（的感染比较普遍，且存在共感染现象。禽源活疫苗中污染被认为是禽网状内皮组织增生症的主要传染源。本论文从鸡马立克氏病（火鸡疱疹病毒活

4、疫苗中分离到株完成了其全基因组序列测定与分析；建立了与共感染试验模型，分析了共感染对鸡的致病性；成功构建了的感染性克隆，初步分析了碱基突变对病毒拯救的影响；建立了检测鸡活疫苗中污染的间接免疫荧光方法，完善了禽源活疫苗中外源病毒检验的国家标准。从鸡火鸡疱疹病毒冻干活疫苗中分离到株，命名为。对分离毒株的全基闪组序列测定与分析表明，与美国野鸡源毐株、中国台湾鹅源毒株和中国东北鸡源分离毒株的亲缘关系最近，同源性高达以上，而与我国南方分离毐株同源性为与美国鸭源毒株同源性相对最低，为。用、进行了日龄鸡的单感染和共感染试验，分析了和共感染的致病性。结果表明，和共感染对鸡呈现出明显

5、的协同致病作用，表现为共感染组鸡的病死率较高，体重下降，淋巴细胞比值、法氏囊比重和胸腺比重显著降低。在常规免疫、活疫苗或灭活疫苗免疫状态下，低日龄（日龄）和高日龄（日龄）感染均会引起免疫鸡的体重下降和一定的死淘率，其中共感染造成的影响更加严重。常规免疫下，共感染组会引起低日龄感染鸡胸腺比重和法氏囊比重显著下降，各种感染组对外周血和淋巴细胞比例影响均不显著，但共感染组比值一直低于其他各组，具有一定的规律性，表现出抑制体液免疫的趋势。灭活疫苗免疫下，共感染和单感染引起新城疫（血凝抑制抗体效价、亚型禽流感抗体效价和亚型禽流感抗体效价显著下降，其中共感染组下降幅度更大，此外

6、，共感染和单感染还均引起传染性法氏囊病（抗体阳性率降低。活疫苗免疫下，首免后共感染和单感染组的抗体效价均显著高于单感染组和对照组，加强免疫后又低于后两组。总体而言，感染对灭活疫苗免疫造成的免疫抑制作用强于对活疫苗免疫造成的抑制，单感染引起的免疫抑制作用较弱。此外，试验还表明，感染未发生垂直传播，而能够引起严重的乖直传播。单感染与共感染组到达产蛋日龄时（日龄），抗体阳性率分别为和子代日龄鸡胚分离阳性率分别为和，日龄雏鸡分离性率分别为和。随着日龄的增大，鸡对耐受感染迅速卜降，日龄鸡单感染或共感染后，抗体阳性率达以上。各感染组对血清中种细胞因子浓度和外周血淋巴细胞中种样受

7、体转录水平总体影响不明显，无明显规律性。构建了的感染性克隆，拯救病毒的生长特性与亲本毒一致，且遗传标记能够稳定遗传。并通过定点突变技术对基因中个碱基进行了分别突变，发现第位碱基由突变为，导致前蛋白第位氨基酸由异亮氨酸突变为精氨酸，为致死性突变。建立了鸡活疫苗中污染的检测方法。该方法对型活疫苗、火鸡疱疹病毒活疫苗和二价活疫苗的最低检山量分别为每羽份疫苗中污染、和的。综上结果，本研究揭示了和共感染对鸡的协同致病作用，为养禽生产中重视其共感染的控制提供了科学依据。关键词：禽网状内皮组织增生症病毒；禽白血病病毒亚群；共感染；致病性；感染性克隆；间接免疫荧光试验Abstr