猪圆环病毒新型细胞穿透肽的发现及其作用机制的研究

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1、婉‘考Ｉ聲硕±学位论文猪圆环病毒新型细胞穿透肋的发现及其作用机制的硏究？？研究生姓名余婉婷指导教师邓治邦、杨毅、孙育杰学科专业预防兽医学动物疫病病理．．研究方向？？＞、＇＇＇＇＇－－ｙＣ：；：Ｖ；：；：；．＇＇Ｉ＇＇．．’．．巧．‘中叫背姑掛；．．击巧；武，立＜古其＼；二－０五年五月■ＨＵ＇：Ｉ—ＩＩＰ分类号Ｓ８５密级ＵＤＣ单位代码１０５３７觸斋祭典乂緣硕±学位论文猪

2、圆环病毒新型细胞穿透肪的发现及其作用机制的研究ｏｆｖｅｌＣｅ－ＴｈｅＳｔｕｄｙＡＮｏｌｌｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇＰｅｔｉｄｅｆｒｏｍＰｏｒｃｉｎｅＣｉｒｃｏｖｉｒｕｓｐ研究生姓名余婉婷指导教师邓治邦学科专业预防兽医学研究方向动物疫病病理论专答辩日期２０１５年５月３１日答辩委员会主席余兴龙论专评阅人刘毅、黎滿呑、雷红宇二０—五年五月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导教师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，

3、除了文中特别加！＾标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明目本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定，Ｐ：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可用不同

4、方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并同意将由此产生的收益指赠给学校教育基金会用于发展研究生教育。（保密的学位论文在解密后应遵守此协议）研究生签名：时间：年月曰赛槪钱指导教师签名：＾时间：年月日Ｉ摘要摘要ｃｎｅＣｃｏｖｓＰＣＶ，，ｉｉｒｉｒｕ）属单链环猪圆环病毒巧ｏｒ，于圆环病毒科圆环病毒属状ＤＮＡ病毒，分为猪圆环病毒１型和猪圆环病毒２型两个亚型，其中１型不致病，２型能引起猪圆环病毒相关疾病（化１：（：１１１６（；柏０乂机５化６３５６３，

5、？（１；＼。５）。本文料ｃｅａ猪圆环病毒为主要研究对象，重点对猪圆环病毒的核定位信号（Ｎｕｌｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌ，ＮＬＳ）功能区域进行了全面的研究。圆环病毒的核定位信号功能区域，即Ｎ端的４１个氨基酸，位于病毒颗粒的内部，与病毒遗传物质相连，除了有核定位的作用Ｗ外，暂无相关研究明确表明其具有其它作用。本文从病毒的氨基酸序列出发，通过序列比对分析，发现其具—有大量的带正电荷的氨基酸精氨酸，由此我们提出假设ＰＣＶ２的核定位信号区域具有细胞穿透肤的作用，即具有细胞膜

6、透性。为了证明Ｗ上假设，首先我们将ＰＣＶ２ＣａｐＮＬＳ区域与绿色炎光蛋白ｅＧＦＰＰＣＶ２－ＮＬＳ－ｅＧＦＰ融合后表达纯化得到蛋白，然后侵染细胞，发现该蛋白－－ｅ佛Ｐ能进入ＰＫ５ＰＣＶ２ＮＬＳ１细胞和ＳＦ９细胞，同时我们将核定位细胞的４１个氮基酸按照精氨酸富集情况分成两部分，进行人工合成，前２０个氨基酸组成的－－Ｎ端用绿色多化命名为ＮＬＳＡ，后面２１个氨基酸则命名为ＮＬＳＢ，并分别在其－炎光染料ＦＩＴＣ修饰，发现多肤ＮＬＳＡ能有效的携带绿色萊光燃料ＦＩＴＣ进入细胞－Ｂ则不能。

7、，ＮＬＳ－－在观察ＮＬＳＡ进入细胞的过程中，我们发现实验组ＮＬＳＡ侵染的细胞的一夾光强度要比阳性对照ＴＡＴ侵染的细胞强，所接下来我们进步通过流式细ＬＳ－ＡＴＡＴ携带Ｆ胞分析技术对相同摩尔浓度的多狀Ｎ和经典的细胞穿透肤ＩＴＣ－Ａ携带Ｆ进入细胞的效率进行比较分析，发现ＮＬＳＩＴＣ进入细胞的效率要高于－Ａ进入细胞的ＴＡＴ时我们也对ＮＬＳ，在相对较低的；同机制进行了相关的研究－一ｏｃ浓度时（ＩＯｐＭＷ下时），ＮＬＳＡ主要通过些传统的ｅｎｄｙｔｏｓｉｓ的途径进入ＮＬＳ－）Ａ除了细胞，而在相

8、对较高的浓度时（ＩＯｐＭＷ上时，通过传统的内吞一途径进入细胞外，还存在种快速进入细胞的方式，目前还没有有利的证据证明ＴＡＴ一该方式的详细机制。蛋白作为类经典的细胞穿透化，自从发现Ｗ来在药物－Ａ将会在这传送Ｗ及疾病治疗中有许多重要的研究，由此可Ｗ推断ＮＬＳ方面具有重大的应用潜能。一部分猪圆环病毒的核定位信号作为其衣壳蛋白的，参与病毒颗粒的组成，Ｉ湖南农业大学硕±学位论文一种穿透肤的证明