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时间:2019-03-14
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1、婉‘考I聲硕±学位论文猪圆环病毒新型细胞穿透肋的发现及其作用机制的硏究??研究生姓名余婉婷指导教师邓治邦、杨毅、孙育杰学科专业预防兽医学动物疫病病理..研究方向??>、'''''--yC:;:V;:;:;.''I''..’..巧.‘中叫背姑掛;..击巧;武,立<古其\;二-0五年五月■HU':I—IIP分类号S85密级UDC单位代码10537觸斋祭典乂緣硕±学位论文猪
2、圆环病毒新型细胞穿透肪的发现及其作用机制的研究ofvelCe-TheStudyANollpenetratingPetidefromPorcineCircovirusp研究生姓名余婉婷指导教师邓治邦学科专业预防兽医学研究方向动物疫病病理论专答辩日期2015年5月31日答辩委员会主席余兴龙论专评阅人刘毅、黎滿呑、雷红宇二0—五年五月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导教师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,
3、除了文中特别加!^标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:时间:年月日关于论文使用授权的说明目本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定,P:学校有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可W采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可用不同
4、方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容,并同意将由此产生的收益指赠给学校教育基金会用于发展研究生教育。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名:时间:年月曰赛槪钱指导教师签名:^时间:年月日I摘要摘要cneCcovsPCV,,iiriru)属单链环猪圆环病毒巧or,于圆环病毒科圆环病毒属状DNA病毒,分为猪圆环病毒1型和猪圆环病毒2型两个亚型,其中1型不致病,2型能引起猪圆环病毒相关疾病(化1:(:1116(;柏0乂机5化63563,
5、?(1;\。5)。本文料cea猪圆环病毒为主要研究对象,重点对猪圆环病毒的核定位信号(Nulrlocalizationsignal,NLS)功能区域进行了全面的研究。圆环病毒的核定位信号功能区域,即N端的41个氨基酸,位于病毒颗粒的内部,与病毒遗传物质相连,除了有核定位的作用W外,暂无相关研究明确表明其具有其它作用。本文从病毒的氨基酸序列出发,通过序列比对分析,发现其具—有大量的带正电荷的氨基酸精氨酸,由此我们提出假设PCV2的核定位信号区域具有细胞穿透肤的作用,即具有细胞膜
6、透性。为了证明W上假设,首先我们将PCV2CapNLS区域与绿色炎光蛋白eGFPPCV2-NLS-eGFP融合后表达纯化得到蛋白,然后侵染细胞,发现该蛋白--e佛P能进入PK5PCV2NLS1细胞和SF9细胞,同时我们将核定位细胞的41个氮基酸按照精氨酸富集情况分成两部分,进行人工合成,前20个氨基酸组成的--N端用绿色多化命名为NLSA,后面21个氨基酸则命名为NLSB,并分别在其-炎光染料FITC修饰,发现多肤NLSA能有效的携带绿色萊光燃料FITC进入细胞-B则不能。
7、,NLS--在观察NLSA进入细胞的过程中,我们发现实验组NLSA侵染的细胞的一夾光强度要比阳性对照TAT侵染的细胞强,所接下来我们进步通过流式细LS-ATAT携带F胞分析技术对相同摩尔浓度的多狀N和经典的细胞穿透肤ITC-A携带F进入细胞的效率进行比较分析,发现NLSITC进入细胞的效率要高于-A进入细胞的TAT时我们也对NLS,在相对较低的;同机制进行了相关的研究-一oc浓度时(IOpMW下时),NLSA主要通过些传统的endytosis的途径进入NLS-)A除了细胞,而在相
8、对较高的浓度时(IOpMW上时,通过传统的内吞一途径进入细胞外,还存在种快速进入细胞的方式,目前还没有有利的证据证明TAT一该方式的详细机制。蛋白作为类经典的细胞穿透化,自从发现W来在药物-A将会在这传送W及疾病治疗中有许多重要的研究,由此可W推断NLS方面具有重大的应用潜能。一部分猪圆环病毒的核定位信号作为其衣壳蛋白的,参与病毒颗粒的组成,I湖南农业大学硕±学位论文一种穿透肤的证明
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