青海省主要蜱种形态学及蜱传疫病分子流行病学研究

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1、分类号：S855.3学校代码：10712UDC：636.09研究生学号：B08202密级：公开2015届攻读博士学位研究生学位（毕业）论文青海省主要蜱种形态学及蜱传疫病分子流行病学研究学科专业：预防兽医学研究方向：分子病原学与免疫学研究生李英指导教师：张彦明教授完成时间：2014年12月中国陕西杨凌Classificationcode:S854;Q812Universitycode:10712UDC:591.3Postgraduatenumber:B08202Confidentialitylevel:OpenDissertationforDoctorDegreeNorthwe

2、stA＆FUniversityin2015RESEARCHONMAINTICKSMORPHOLOGYANDTICKSBORNEDISEASEINQINGHAIPROVINCE,CHINAMajor:PreventiveveterinaryResearchfield:MolecularetiologyandimmunologyNameofPostgraduate:LiYingAdviser:Prof.ZhangYanmingDateofsubmitted:December,2014YanglingShaanxiChina青海省主要蜱种形态学及蜱传疫病分子流行病学研究摘要蜱是一类

3、通过吸食脊椎动物血液的寄生类节肢昆虫，可作为传播媒介向人类和动物传播多种致病性病原体，引起各种重要的自然疫源性疾病及人兽共患病。目前，全球经报道的蜱类（硬蜱科和软蜱科）超过900余种，其中在我国经报道的蜱类有11属120余种，其中包括软蜱10种和硬蜱100余种，蜱在地区分布上具有差异性。在我国经蜱传播疫病主要有10余种，包括蜱传森林脑炎（Tick-borneencephalitis，TBE），Q热（Q-fever），东方斑点热（Orientalspottedfever），北亚蜱传斑点热（North-Asiatickbornespottedfever），克里米亚-刚果出血热（C

4、rimean-Congohemorrhagicfever）（新疆出血热，Xinjianghemorrhagicfever），科罗拉多热（Coloradofever），蜱传回归热（Tick-bornerelapsingfever），莱姆病（Lymeborreliosis），兔热病（Tularemia）和梨形虫病（Piroplasmosis）。上述蜱传疫病主要报道于我国的北部和东北部的新疆，内蒙古，黑龙江，吉林，辽宁与西南地区的云南，而青海鲜有报道。因此，阐明青海省主要媒介蜱类分布和蜱传主要疫病流行病学具有重要公共卫生意义。⑴采用形态学方法对青海省主要蜱类进行了种类鉴定，并观察部

5、分部位的显微结构，结果表明青海省主要蜱种为青海血蜱（Haemaphysalisqinghaiensis），草原革蜱（Dermacentornuttalli），森林革蜱（Dermacentorsilvarum）和残缘璃眼蜱（Hyalommadetritum）。应用扫描电镜观察了四种蜱的假头基、齿式、肛沟、生殖孔、爪垫、哈氏器和孔区等超微结构，表明各蜱在形态学上具体有明显差异，以上结构特征可作为蜱种属鉴定的依据。⑵根据已发表斑点热群立克次体外膜蛋白OmpA基因序列设计特异性引物，以青海省采集的蜱标本为模板，进行PCR检测，并对阳性样本的基因序列进行测序和序列分析，建立分子系统进化

6、树。结果显示在454个蜱样本池中共检测到14个SFGR阳性样本，其中9个为西伯利亚立克次体阳性样本和5个为黑龙江立克次体阳性样本，总感染率为3.08%。序列分析结果显示西伯利亚立克次体青海株HUN与黑龙江立克次体虎林株HL-93（AF179364）、绥芬株HLJ-054（AF179362）共处一个分支，一致性分别为99.18%和99.51%；黑龙江立克次体青海株GL-1与西伯利亚立克次体前苏联株246（U43807）和北京株BJ-90（AF179365）同处一个分支，序列一致性分别为99.49%和99.67%。⑶根据人粒细胞无形体病预防控制技术指南合成无形体16SrRNA特异

7、性引物，对青海省媒介蜱种带菌率进行了巢式PCR检测，并对阳性样本的基因序列进行了测序和序列分析，建立了分子系统进化树。结果显示在454个蜱样本池中共检测到67个无形体阳性样本，病原携带率为14.8%，不同地区及不同蜱种间无形体病原携带率无统计学差异，且首次检测在青海血蜱检测到有无形体携带。序列分析结果显示青海无形体分离株HUN与日本无形体分离株（A.phagocytophilum，AY969010）和中国吉林无形体分离株（A.phagocytophilum，GQ412339）共处一个分支，一致性分别为9