转mam79基因玉米的获得及草甘膦抗性分析

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院学位论文转MM79基因玉米的获得及草甘膦抗性分析ObtainmentandGlyphosateToleranceAnalysisofmAM79TransgenicMaize硕士研究生：任珍静指导教师：刘允军副研究员申请学位类别：农学硕士专业：作物遗传育种研究方向：分子育种培养单位：作物科学研究所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

2、与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，g卩：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目转基因玉米的获得及草甘膦抗性分析论文作者任珍静专业作物遗传育研宄方向分子育种指导教师刘允军副研宄员培养单位（研宄所）作物科学研究所姓名职称硕（博）单位专业签名评硕导口中

3、国农业科学院作物作物遗传侯文胜研宄员博导V科学研宄所育种阅硕导口中国农业大学生物学生物化学与人于静娟教授博导V院分子生物学答辩主席硕导口生物化学与任东涛教授中国农业大学博导G分子生物学硕导口生物化学与任东涛教授中国农业大学博导分子生物学4硕导口中国农业科学院生物生物化学与赵军研宄员博导W技术研宄所分子生物学答硕导口中国农业科学院生物生物化学与郎志宏研宄员博导EI技术研宄所分子生物学辩硕导口孔照胜研宄员中国科学院微生物所植物病理学博导辽委硕导口中国农业科学院作物生物化学与王国英研宂员博导0科学研宄所分子生物学员会议记录（秘书）论文答辩时间地点2015年5月29日上午8:30;作物科学研宄

4、所重大楼220会议室密级:论文编号:中国农业科学院学位论文转mAM79基因玉米的获得及草甘膦抗性分析ObtainmentandGlyphosateToleranceAnalysisofmAM79TransgenicMaize硕士研究生：任珍静指导教师：刘允军副研究员申请学位类别：农学硕士专业：作物遗传育种研究方向：分子育种培养单位：作物科学研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationObtainmentandGlyphosateToleranceAnalysisofmAM79Trans

5、genicMaizeM.S.Candidate：RenZhenjingSupervisor：AssociateProf.LiuYunjunMajor：CropGeneticsandBreedingSpecialty:MolecularBreedingMay2015摘要来源于细菌的EPSPS编码基因AM79aroA可用于培育抗草甘膦转基因作物。实验室前期工作对AM79aroA基因进行了人工改造合成，合成的基因命名为mAM79。本研究对实验室前期获得的转mAM79基因玉米材料进行了分子鉴定及草甘膦抗性分析。同时为了获得更多的具有不同插入位点的转基因事件，本研究将mAM79基因表达框插入到玉

6、米Ds转座子元件中，构建了植物表达载体p3301-ZmDs-UbiSpAM79，将此载体转化玉米，获得了转基因玉米植株，并对转基因植株的草甘膦抗性进行了初步分析。主要研究结果包括：1、对实验室前期获得的转基因玉米株系进行PCR分析，结果表明mAM79基因已经整合到了这些转基因玉米株系的基因组中。RT-PCR分析结果表明，mAM79基因在7个独立的转基因玉米株系中都有较高的转录水平。但是，Westernblot分析结果表明，7个独立的转基因玉米株系中AM79EPSPS蛋白水平有很大的差异，其中AM85和AM72这两个株系的AM79EPSPS蛋白表达量显著高于其它株系。田间喷施4倍浓度的草

7、甘膦时，这两个转基因株系能够正常生长，其它转基因玉米植株的生长均受到影响，而非转基因玉米均死亡。研究结果表明mAM79基因可以用于培育抗草甘膦转基因玉米，并且获得的转基因玉米株系可以作为培育抗草甘膦转基因玉米的重要材料。2、将mAM79基因表达框插入到玉米Ds转座子元件中，构建了植物表达载体p3301-ZmDs-UbiSpAM79，并将此植物表达载体通过农杆菌转化法转化玉米，获得5个转基因玉米株系。对T1代转基因植株的PCR分析结果表明，mAM