心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备及应用

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1、？－－．？？，．‘．．＾＾广．Ｊ？广东工业大学硕士学位论文．．．＂．厂－（工程硕士〉二：心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备及应用龚成‘．；．■－，，’？”‘．．＾．’．‘‘：．－：－．，．．．．：，？？‘－．＇＇？？／－、？．Ｖ．／？，？－？．？＾？．？－．Ｖ、■■■广．■■■．．：．－？．？’．．．＇“？？．．．

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3、６广东工业大学学位论文（工程硕士）心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备及应用龚成指导教师姓名、职称：赵肃清教授企业导师姓名、职称：无专业或领域名称：化学工程学生所属学院：轻工化工学院论文答辩日期：２０１５年６月ＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｅｄｔｏＧｕａｎｇｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｆｏｒｙｇｙｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＭａｓｔｅｒｏｆＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｈｅＰｒｅａｒａｔｉｏｎａｎｄＡｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆ

4、ｐｐｐＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄＡａｉｎｓｔＨｅａｒｔＦａｔｔｙｇｙＡｃ－ｉｄｂｉｎｄｉｎｇＰｒｏｔｅｉｎＭａｓｔｅｒＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＧｏｎｇＣｈｅｎｇＳｕｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＺｈａｏＳｕｉｎｐｑｇＪｕｎｅ２０１５ＦａｃｕｌｔｙｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇａｎｄＬｉｇｈｔＩｎｄｕｓｔｒｙＧｕａｎｄｏｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｇｙｇｙＧｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，ＲＲ．Ｃｈｉｎａ，５１０００６＾

5、摘要一ｔ－心型脂肪酸结合蛋白（ＨｅａｒｔＦａｔｙＡｃｉｄ－ｂｉｎｄｉｎｒｏｔｅｉｎＨＦＡＢＰ是种在心肌细胞ｇＰ，）？中含量丰富的小分子量心肌可溶性蛋白，由于其分子量小的特点２３，在心肌受损后，小时血清浓度即开始上升－。。检测病人血清中的ＨＦＡＢＰ含量从而能确定心梗的发生３每年全球因心血管疾病死亡的人数占全球死亡人数的１／。而在心梗发生６小时内实施Ｉ。再灌注治疗，则死亡率降低到１％之内，为此早期诊断ＡＭ有着十分重要的意义而一Ｈ－ＦＡＢＰ作为种早期的ＡＭＩ心肌标志物就同样具有着重要的研究意义。－ＦＡＢ

6、Ｐ蛋白免疫ＢＡＬＢ本文通过重组Ｈ／Ｃ小鼠，取其脾脏的Ｂ细胞与骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合。经过亚克隆蹄选出３株Ｃ０、８、６高效价的细胞株，分别命名为２６２Ｆ０Ｇ０３。将三株杂交瘤细胞接种于ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠内大规模制备单克隆抗体。采用ＰｒｏｔｅｉｎＧ亲和６柱纯化抗体后：，经鉴定３株单克隆抗体均为ＩｇＧ类，效价均达到１１０以上，亲和力达８到１０以上。同时特异性检测和Ｗｅｓｔｅｒｎｌｏｔ均表明３。采用双ｂ株抗体有较好的特异性抗体夹心ＥＬＩＳＡ配对抗体，蹄选出以６Ｇ０３为包被抗体与２Ｆ０８为标记抗体配对能检测－ＦＡＢＰ

7、抗原这对抗体建立了酵联免疫分析方法和胶体金免疫层析法出Ｈ，用。－＂＇＇？通过优化条件ｍＬ￣－ｍＬ，建立的酶联免疫分析方法的检测范围为０ｎ２００ｎ，ｇｇ２标准曲线的Ｒ为０．９９３５，有较好的线性相关性。通过检测临床样本测定出正常人群血－－１ｍＬ人ＡＭ－清中的ＨＦＡＢＰ平均含量为２．６６２１±０．１３２ｎＩ患者ＨＦＡＢＰ平均含量为ｇ＂＇－２２＋ｍＬ＜－．４８９７１．８２１ｎ０５７ｇ，Ｐ．０，表明正常人血清中ＨＦＡＢＰ含量与ＡＭＩ患者血清中．ｉＨ－ＦＡＢＰ含量有着显著性差异．。建立的胶体金免疫层析法的

8、ｌＯｎｍＬ最低检出浓度为ｇ，通过检测１３１例临床样本，．，与临床结果对照，敏感度为８６．９６％特异度为９７６５％，Ｋａ０一ｐｐａ值为．８６３３，致性检测表明胶体金试纸条检测结果与临床确诊结果无显著性差异－－。