哈茨木霉菌多菌灵抗性选育与β-微管蛋白突变位点研究

《哈茨木霉菌多菌灵抗性选育与β-微管蛋白突变位点研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、Universitycode：10223Classifiedcode：Q93Graduatenumber：XS1291001Confidentialdegree：PublicHeilongjiangBayiAgriculturalUniversityMasterDissertationBreedingofTrichodermaharzianumcarbendazimresistanceandthestudyofβ-tubulinmutantsitePostgraduate：YuChunshengSuper

2、visor：ProfesserSunDongmeiMajor：MicrobiologyMicrobialResourcesandResearchdirection：UtilizationCollegeofLifeScienceandCollege：TechnologyDaqingChinaJune,2015摘要当今农业生产中，化学杀菌剂仍然作为主要的植物真菌病害防治手段。植物生防菌具有化学杀菌剂所不具备的多种优点，但对化学杀菌剂敏感，二者在植物病害防治上具有一定的互补作用。所以，选育可耐受化学农药的生防菌

3、菌株对农业生产有着重要意义。本研究利用紫外线-氯化锂复合诱变法对哈茨木霉出发菌株hc进行多菌灵抗药性诱变，获得抗性突变株315株，利用PCR方法分析其β-微管蛋白基因序列，筛选到3株在β-1微管蛋白基因编码区上引起单个氨基酸水平突变的碱基突变菌株，并对其中抗多菌灵能力最强的突变菌株hc-9进行进一步研究。利用含药平板检测多菌灵对突变菌株的抑菌有效中浓度变化。结果证实，多菌灵对突变株hc-9的抑菌有效中浓度较出发菌株hc提升285%，且经转接12代后，该突变菌株对多菌灵的耐药能力相对稳定；利用对峙培养及载玻

4、片法研究突变株对不同病原真菌的抑菌效果，发现该菌株的抑菌效果与出发菌株hc相比无明显差异，且对病原菌仍具有重寄生能力；以察氏培养基为基本培养基，改变其中的碳、氮源，培养温度及pH，并利用不同盐浓度与PEG模拟盐胁迫与干旱胁迫，研究突变株hc-9的生理特性变化。发现在上述条件下，突变株hc-9的菌丝生长速率皆小于出发菌株hc，但不同条件下变化趋势一致。以大豆为研究对象，利用盆栽实验，测定不同土壤处理样品中大豆苗期地上与地下部分几种生理指标(三种抗氧化酶活性以及丙二醛(MDA)、可溶性蛋白含量)，研究哈茨木霉

5、hc菌株及其突变株hc-9的应用前景。结果表明：与病原菌处理组相比，添加哈茨木霉出发菌株hc与其突变株hc-9及多菌灵的处理均有提高根系与叶片中的各种抗逆酶活性，降低丙二醛含量的能力。其中病原菌+哈茨木霉突变菌株的叶片及根系的SOD酶(超氧化物歧化酶)、CAT酶(过氧化氢酶)活性提高幅度均较大；而病原菌+多菌灵的处理MDA含量降低最多，该处理叶片中MDA含量为0.022μmol/g，降低43.59%；但同时添加多菌灵与突变株hc-9的处理变化表现与单独添加哈茨木霉菌与多菌灵表现不一致，例如无论是叶片和根系

6、中的SOD酶活性均低于其它各处理。叶片接种大豆菌核病核盘菌后，测定接菌后不同处理抗氧化酶活性变化，其中SOD，POD酶活提高速度均大于CK对照组，MDA含量各处理均小于CK对照组。本实验结果为今后对哈茨木霉菌的研究与综合应用提供了科学依据。关键词：哈茨木霉，多菌灵，抗药性诱变，生理指标，应用IAbstractInthecurrentagricultueproduction,chemicalfungicidestillplaysanimportantroleincontrollingofplantfunga

7、ldiseases.Plantbiocontrolmicroorganismshavevariousadvantagesthatchemicalfungicidesdonothave,buttheyarealsosensitivetochemicalfungicide.Thesetwomethodshavecertaincomplementaryfunctioninplantdiseasecontrol.Soitisimportanttobreedbiologicalmicroorganismthatha

8、vethetoleranceabilitytochemicalfungicideintheagriculture.TrichodermaharzianumstartingstrainhcwasmutatedbyUVandLiClcomplexmutationmethodintheresistanceabilityonCarbendazim，315strainsofresistantmutantswasobtained.Usin