右归丸对肾阳虚证干预效应的血清差异蛋白质组研究

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1、学院代号10716学号012020512107专业代码100505密级陕西中医药大学ShaanxiUniversityofChineseMedicine硕士学位论文右归丸对肾阳虚证干预效应的血清差异蛋白质组研究学位与N•请人黄祥云专业名称中医诊断学串请学位类型医学硕士学位指导教师姓名郭小青论文提父曰期2015年5月陕西中医药大学学位论文原创性声明及使用授权声明学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中己经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的

2、个人和集体，均己在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名（需亲笔）‘妙）丨曰期：年如7关于学位论文使用授权的声明陕西中医药大学有权保留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。保密口，在_年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密‘(请在以上方框内打“V”)论文作者签名（需亲笔）论文导师签名（需亲笔）卡广」、、曰

3、期：J:月》摘要目的：采用蛋白质组学技术中的相对和绝对定量同位素标记（isobaricTagsforRelativeandAbsoluteQuantitation,iTRAQ）技术研究分析典型肾阳虚证患者接受右归丸治疗一月前后比较的血清差异表达蛋白,并对筛选到的差异表达蛋白进行生物信息学分析，阐释右归丸治疗肾阳虚证的疗效机制。方法：根据中医内科学权威诊疗专家诊断及肾阳虚证评定量表判定，选取典型肾阳虚证患者4名给予右归丸常规剂量口服治疗一个月，并于治疗前后分别采集患者外周血，样品处理后取血清进行高丰度蛋白去除并提取蛋白，然后进行蛋白质的变性还原，并于蛋白质彻底裂解成肽段后进行iTRAQ标记和Q-

4、Exactive质谱仪鉴定，质谱分析原始数据用软件Mascot2.2和ProteomeDiscoverer1.4(thermo)进行查库鉴定及定量分析，筛选并鉴定出差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果：此次试验最终共鉴定出血清蛋白数236种，其中达到定量信息的为171种。4例患者治疗后与治疗前相比较均有差异表达蛋白，4例患者中均表达差异且表达方向一致的蛋白有6种，上调者占4种，下调者2种。经查库鉴定发现这6种差异表达蛋白共参与22种生物学过程和1条KEGG通路（KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes,京都基因与基因组百科全书），对这些差异表达蛋白

5、进行GO及KEGG通路注释分析。根据实验结果推测：补体C3(ComplementC3,C3)、载脂蛋白C-Ⅲ(apolipoproteinC-Ⅲ,APOC3)、Cystatin-C（半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，为一种非糖基化蛋白,Cys-C）、载脂蛋白E(apolipoproteinE,APOE),可能与右归丸治疗肾阳虚证所发挥的疗效密切相关。关键词：肾阳虚证；右归丸；iTRAQ；差异表达蛋白；蛋白质组学ScreeningfordifferentlyexpressedserumproteinsofKidney-yangdeficiencyafterRegulatedbyYouguiPillsAbs

6、tractObjective:ToscreendifferentlyexpressedserumproteinsoftheKidney-yangdeficiencyassociatedwithYouguiPillswhotakesthemforonemonthbyiTRAQtechnicalandanalyzethedifferentlyexpressedserumproteinstorevealthemolecularbasisofdeficiencysyndrome.Method:Fourpatientswithkidney-yangdeficiencywereselectedfor1mo

7、nthofYouguiPillstaken-treatment.AccumulatedclinicalscoresofKidney-yangdeficiencywereassessedusinga40-factorquestionnaireofKidney-yangdeficiency.5mlBloodwascollectedbeforeandafterYouguiPills’treatmenta