仙茅属植物种质资源遗传多样性分析

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1、：密级；分类号３８２００３５４学校代号：１０５学号：２２０１？劣弁《卡、《寺ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＦｏｒｅｓｔｒ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｙｙ硕±学术学位论文仙茅属植物种质资源遗传多样性分析作者姓若：朱丽芳导师姓名；何钢培养学院：生命科学与技术学院学科違称：生物化学与分子生物学研究方向：分子生物学与基因工程提交日期：２０１５年５月ＴｈｅｓｔｕｄｙｏｎＧｅｎｅｔｉｃＤｉｖｅｒｓｉｔｏｆＣｕｒｃｕｌｉｇｏＧａｅｒ

2、ｔｎｙＧｅｒｍｐｌａｓｍＲｅｓｏｕｒｃｅｓｂｙＺＨＵＬｉｆａｎｇＡｔｈｅｓｉｓｓｕｂｍｉｔｅｄｉｎａｒｔｉａｌｓａｔｉｓｆａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐＲｅｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒｔｈｅｄｅｒｅｅｏｆｑｇＳｕｅｒｖｉｓｏｒｐＰｒｏｆｅｓｓｏｒＨＥＧａｎｇＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ４％ＳｈａｏｓｈａｎＳｏｕｔｈＲｏａｄ，ＴｉａｎｘｉｎＤｉｓｔｒｉｃｔＣｈａｎｓｈａＨｕｎａｎ４１

3、０００４，Ｐ化ＣＨＩＮＡｇＭａ２０１５ｙ，中南妹Ａ种我夫緣学位论文原创性声明本人郑重声明；所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加Ｗ标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：Ｉ象巧＞ＩＪ？丰月日中斋＃Ａ种找夫緣学位论文版权

4、使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可Ｗ将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：。１、保密□，在年解密后适用本授权书２、不保密口。＂＂（请您在上相应方框打Ｖ）＾作者签名；朱而每导师签名乎如＾＾—年曰么ｔ月乂曰年月又＾％＾＾摘要仙茅属植物包括仙茅组和大叶仙

5、茅组植物，属多年生草本植物，具有较高的药用价值。目前，仙茅属植物尤其是仙茅天然种静数量急剧减少，有些种群仅剩几十株，面临着种群灭绝的危险。因此，开展仙茅属植物遗传多样性研究及保护性开发工作迫在眉睫。本文Ｗ仙茅属植物的１３个野生种群的１３４份样本为研究对象，进行遗传多样性分析，主要研究结果如下：（１）采用试剂盒法和改良ＣＴＡＢ法进行仙茅叶片基因组ＤＮＡ提取，均能获得髙质量的ＤＮＡ。冷冻保存叶片和桂胶保存叶片获得的ＤＮＡ相差不大，但珪胶保存法提取过程中容易褐化，提取的ＤＮＡ有部分降解，在野外采样条件不太具备

6、的情况下可Ｗ采一取珪胶保存。采用试剂盒法、冷冻保存的叶片进行ＤＮＡ的微量提取，是种比较有效的方法，获得的ＤＮＡ可Ｗ满足后续分子实验要求。仙茅根茎ＤＮＡ的大量提取，可ｔＵ采用２％的ＣＴＡＢ提取液，操作步骤中ＰＶＰ的加入量为０．２ｇ，抽提过程高盐ＮａＣｌ满足４ｍｏｌ／Ｌ时提取的仙茅根茎ＤＮＡ质量和纯度最好。（２Ｒ－ＰＣＲ扩、ｓ、）在仙茅属植物ＩＳＳ增体系的建立与优化中，进行了ＤＮＡ模板ｄＮＴＰ２＋Ｍｇ、引物和ＴａｑＤＮＡ聚合酶等五个主要影响因子的单因素试验与正交试验，建立了－ｘ适合仙茅属植物ＩＳＳＲＰＣ

7、Ｒ扩増的反应体系（２５）：ＩＰＣＲＢｕｆｆｅｒＤＮＡ５冲，模板０ｎｇ，２＋Ｍｇ２．５ｍｍｏｌ／Ｌ，ｄＮＴＰｓ０．２ｍｍｏｌ／Ｌ，弓Ｉ物０．４叫ｎｏｌ／Ｌ，ＴａｑＤＮＡ聚合酶１．５Ｕ。（３）运用已建立的最佳反应体系对仙茅属植物的１３个天然种群１３４份个体进行遗传多样性分析，筛选出１５条引物共扩增出２５６条清晰、重复性好的条带，多态性条带百分比达到９１．７９％；在种群水平上，各种群多态性位点百分率和Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数分别－＝－为４．６９％２９．３０％，０．０２８３０．１６０５。其中，四川宜宾种群遗传多样

8、性最高（Ｐ２９．３０％，＝＝＝１０．０２８３），云南９号种群遗传多样性最低（Ｐ４．６９％，１０．１６０５）。一（４）运用遗传致度与遗传距离数据对１３个种群进行ＵＰＧＭＡ聚类分析，１３个一、种群共聚为两大类，广西雅长云南大叶、四川盐边Ｈ个