人工催产花鳗鲡（anguilla marmorata）卵巢发育过程中性类固醇激素含量影响

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1、学校代码：10264研究生学号：M120101049上海海洋大学硕士学位论文题目：人工催产花鳗鲡(Anguillamarmorata)卵巢发育过程中性类固醇激素含量影响Contentandchangesofsexhormonesinthegonadandserumoftheartificially英文题目：inducedmaturingAnguillamarmorataandA.japonica专业：水产养殖研究方向：水产动物繁殖生物学姓名：林静指导教师：刘利平副教授蔡生力教授二O一五年五月日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严

2、谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制

3、手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日-1-上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注王武上海海洋大学教授主席施永海上海市水产研究所研究员委员王成辉上海海洋大学教授委员陈再忠上海海洋大学副教授委员马旭洲上海海洋大学副教授委员陈桃英上海海洋大学讲师秘书答辩地点生命学院D101答辩日期2015.06.03-2-上海海洋大学硕士学位论文人工催产对花鳗鲡(Anguillamarmorata)卵巢发育过程中性类固醇激素的含量影响摘要鳗鲡作为广泛分布的降

4、海洄游类鱼类，其肉质鲜美，营养价值丰富，因而被大多数国家所喜爱，像日本就以喜食河鳗而闻名；但在目前关于鳗鲡的繁殖育种仍有很多未解之谜，本研究主要集中在鳗鲡（花鳗鲡和日本鳗鲡）人工繁殖过程中血液和性腺内类固醇激素的含量以及其变化。性类固醇激素是动物体内性腺生长发育的必要激素，尤其对于硬骨鱼类人工繁殖过程中，睾酮(T)、孕酮(P)、雌酮(E1)、雌二醇(E2)、雌三醇(E3)、17α,20β-二羟基-4-孕烯-3-酮(DHP)、17α-羟基孕酮(17α-OHP)在性腺的发育前期、发育中期以及发育末期对卵细胞的卵黄形成以及胚泡破裂有重要作用。对池塘养殖的花鳗鲡多次

5、注射鲤鱼脑垂体（carppituitaryextract，20mg/kg·周）和人绒毛膜促性腺激素（hCG，300IU/kg·周）诱导花鳗鲡性腺发育以及成熟，采用贝克曼库尔特免疫分析仪通过化学发光免疫分析法（CLIA）研究此过程中，血清中游离类固醇类激素和糖蛋白类激素的变化，分析比较了不同成熟时期花鳗鲡血清中三种类固醇激素，即睾酮、孕酮、17β-雌二醇和三种糖蛋白类激素，卵泡刺激素（FSH）、黄体生成激素（LH）、人绒毛膜促性腺激素（hCG），在发育前期（注射激素第2针后，即第二周）；发育中期（注射激素第9针后，即第九周）；发育中后期（注射激素第13针后，即

6、第十三周）；发育后期（注射激素第16针后即，第十六周）；发育末期（注射激素第20针后，即第二十周）激素的含量和变化。结果表明，激素注射组的性腺逐渐成熟，GSI显著升高；而对照组GSI未见增长，平均为(0.94±0.08)%；经过16-19次注射，卵细胞到达核偏移阶段，对此阶段的花鳗鲡注射17α-羟基孕酮（17α-Hydroxyprogesterone），可成功诱导花鳗鲡性腺成熟与排卵。与对照组相比，实验组中鳗鱼血清中的17β-雌二醇（E2）不断升高，尤其在性腺发育的中后期到后期阶段，显著升高；而孕酮（P）在发育后期升至最高，在发育后期至末期时显著降低；睾酮（

7、T）在发育后期出现最高值。与对照组相比，实验组糖蛋白类激素--hCG在不同时期变化显著，尤I上海海洋大学硕士学位论文其在发育末期到达最高值,分析其原因可能与催产针的注射有关；FSH与LH含量变化与孕酮相似。此外，研究发现激素注射12h、24h、72h小周期内，发育前期血清中孕酮的变化显著，12h时最高而后降低；发育中期血清中E2变化显著，注射激素24h时达到最高值。性腺内的类固醇激素则采用采用超高效液相色谱—串联质谱（UPLC/MS/MS）方法。结果发现，睾酮、孕酮、雌二醇、雌三醇、17α，20β-二羟基-4-孕烯-3-酮、17α-羟基孕酮在xBridgeC

8、18色谱柱上得到良好分离，在0～200ng/ml的范