二斑叶螨对阿维菌素、螺螨酯及甲氰菊酯的多重抗性研究

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1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文二斑叶螨对阿维菌素、螺螨酯及甲氰菊酯的多重抗性研究StudyontheMultipleResistanceofAbamectin,SpirodiclofenandFenpropathrintoTetranychusurticae周兴隆指导教师姓名张新虎教授（甘肃农业大学兰州730070）学科专业名称农药学研究方向害虫抗药性论文答辩日期2015年5月16日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席沈慧敏教授评阅人刘长仲教授贺春贵研究员2015年6月甘肃农业大学2015届硕士学位论文

2、摘要二斑叶螨（Tetranychusurticae）是世界性农业害螨，长期以来主要以化学农药为防治手段，但由于化学农药长期不合理的使用导致二斑叶螨对很多化学药剂产生了严重的抗药性。近年来，随着药剂结构、活性和抗性机制研究，人们提出化学农药的混用方案，但盲目、大量、交替和混用农药，带来了叶螨对各种农药多重抗药性，导致田间年防治次数逐年增多，严重影响到害螨的防治及无公害农业生产。本研究选用了抑制螨的脂肪合成，阻断能量代谢的新型季酮酸类杀螨剂螺螨酯、作用于叶螨神经元突触的γ-氨基丁酸（GABA）受体的阿维菌素及作用于钠离子通道的甲氰菊酯，旨

3、在研究二斑叶螨对混用杀螨剂产生多重抗性的机理及抗性检测。通过选育二斑叶螨混合抗性品系，比较分析抗、感品系主要解毒酶GSTs、MFOs、CarEs解毒能力及基因表达量的变化，弄清多重抗性的分子机理，初步建立快速抗性分子监测技术，为田间多重抗性治理提供理论依据。结果如下：1.在室内条件下，通过螺螨酯、阿维菌素和甲氰菊酯混合连续处理二斑叶螨59代，对混剂的抗性倍数达到110.584倍，对阿维菌素抗性倍数达到658.44倍；对甲氰菊酯的LC50抗性倍数达到170.88倍；对螺螨酯的抗性倍数达到61.93倍，成为二斑叶螨对三种农药的多重抗性种群

4、（Mix-R）。2.利用生命表技术，研究了二斑叶螨抗甲氰菊酯、阿维菌素、螺螨酯混合品系（Mix-R）和敏感品系（SS）生物适合度。结果表明：与敏感品系（SS）相比，抗性品系的发育历期和产卵量均存在不同程度的下降，抗性品系的净生殖率（R0=12.7659）远低于敏感品系（R0=42.4203），相对适合度为敏感品系的0.3009倍，存在适合度缺陷；其他生命表参数无种群差异。3.采用生化分析法，分析了二斑叶螨混抗及敏感品系体内羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶、和多功能氧化酶的活性差异。表明混合抗性品系GSTs、MFOs和CarEs总活力与比活

5、力较敏感品系显著上升，相对比值均大于1，阿维菌素、螺螨酯与甲氰菊酯混剂对解毒酶有诱导效应。GSTs在成螨期的活力显著高于其他发育阶段，MFOs和CarEs的比活力在卵期显著高于其他发育阶段。二斑叶螨混合抗性品系GSTs、MFOs及CarEs米氏常数Km低于敏感品系，最大反应速度Vmax高于敏感品系，表明混抗品系的解毒酶与底物的亲和力大于敏感品系。4.采用RT-qPCR技术，以ELFn为内参基因分析了二斑叶螨GSTs的TuGSTd01、TuGSTd05、TuGSTd06与TuGSTd09基因、P450酶系CYP392D8、CYP392E

6、10、CYP392A6、CYP392A16及CarEs酶系的TuCCE35与TuCCE3610个基因的表达量。表明二斑叶螨Mix-R品系中上述基因相对表达量高于Fe-R、I甘肃农业大学2015届硕士学位论文Av-R、Sp-R品系和敏感品系，表明上述基因在二斑叶螨对阿维菌素、甲氰菊酯及螺螨酯混剂多抗性形成中发挥着重要作用。5通过设计特异引物，利用等位基因分型技术、多重PCR与半定量RT-PCR结合的方法，得到二斑叶螨混抗品系抗甲氰菊酯的F1538I突变位点和抗阿维菌素的G326E突变型个体，通过基因表达量分析，F1538I突变位点突变型

7、条带表达量为SS的1.02倍，野生纯合子是SS的2.33倍；G326E突变位点突变型条带表达量为SS的1.48倍，野生纯合子是SS的1.09倍，混抗品系基因频率和表达量高于敏感品系。该法可快速、准确地检测钠离子通道、谷氨酸门控氯离子通道与抗性相关基因的突变，可用于田间二斑叶螨多重抗性的监测。关键词：二斑叶螨；阿维菌素；螺螨酯；甲氰菊酯；多重抗性；靶标突变；基因表达；抗性分子监测II甘肃农业大学2015届硕士学位论文SummaryTwo-spottedspidemiteTetranychusurticae,whichisaworldwi

8、deagriculturalpestmites,wascontrolledbychemicalpesticidesasthemainmeasurementsinfield,butthemitehasseriousresi