赤拟谷盗rnai及dsrna脱靶效应的研究

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1、分类号邸５：Ｑ９６５学号２０１０２０２０２８费音泉違义每博±学位论文赤拟谷盗民ＮＡｉ及ｄｓＲＮＡ脱鞭效应的研究王锦达－—Ｔ指导教师韩召军教授专业名称农业度虫与害虫防治研巧方向昆虫生理生化与分子生物学答辩日期二〇—五年五月ＲＮＡＩＩＮＴＲＩＢＯＬＩＵＭＣＡＳＴＡＮＥＵＭＴＨＥＯＦＦＴＡＲＧＥＴＥＦＦＥＣＴＯＦＤＳＲＮＡＢｙＷａｎｇＪｉｎｄａＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉ行ｅｄｔｏＮａｎｎ＊ｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｉａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

2、ｊｇＩｎＰａｒｔｉａｌＦｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔｏｆ化ｅＲｅｕｉｒｅｍｅｎｔｓｑＦｏｒｔｈｅＤｏｃｔｏｒａｌＤｅｇｒｅｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌＵｉｒｅＳｃｉｅｎｃｅＳｕｅｒｖｉｓｅｄｂｐｙＰｒｏｆｅｓｓｏｒＨａｎＺｈａｏｕｎｊＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＥｎｔｏｍｏｌｏｇｙＣｏｌｌｅｅｏｆＰｌａｎｔＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎｇＮａｎｉｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｊｇｇｙＮａｎｉｎ２１００９５ＲＲ．Ｃｈｉｎａｊｇ，Ｍａ２０１５ｙ原创性声明，独立进行

3、研究工作本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中Ｗ明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。■学位论文作者（需亲笔）签名；至户年月／日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可Ｗ将本学位论文的全部

4、或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印。、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书本学位论文属于不保密口。＿＿＂＂（请在Ｗ上方框内打Ｖ）如＾学位论文作者（需亲笔）签名；之於年月夕日＾导师（需亲笔）签名：心沁年＾月３日目录目录摘要ＩＡＢＳＴＲＡＣＴＶ第一章文献综述１１．１ＲＮＡｉ的概述１１．１．１ＲＮＡｉ的历史１１丄２ＲＮＡｉ的机审ｉｊ２１Ａｉ．１．３ＲＮ的效应４１．２ＲＮＡｉ在昆虫学中的研巧进展７．２

5、１ＲＮＡｉ机制１．昆虫细胞中的７１Ａｉ在．２．２ＲＮ活体昆虫中的应用８１Ａｉ在农业害虫防治中的应１１．２．３ＲＮ用１．２．４ＲＮＡｉ在昆虫疾病控制中的作用１３１５．２．问题和展望１４１ＲＮＡ．３干扰脱靴效应的研究１４１１５．３．１脱祀效应的类型１．３．２降低脱飽效应的方法１６１．１７．３３脱郎效应的预测１．３．４脱靴效应在动物学中的研究进展１８１．３．５脱靴效应研究的发展和展望２０１．４赤拟谷盗的ＲＮＡ干扰研究进展２１一１．４．１赤拟谷盗是种模式昆虫２１

6、１１．４．２赤拟谷盗功能基因组学研究进展２１．ＲＮＡｉ．４３赤拟谷盗中系统性的２４１５．本研究的目的和意义２７第二章赤拟谷盗中ｓｉＲＮＡ与ｄｓＲＮＡ引发的ＲＮＡｉ效率比较２９２．１材料与方法３０２丄１供试昆虫３０２丄２Ｋ嬰试剂和仪器设备３０２丄３办拟巧盗基因片段的克隆３１Ｉ赤拟谷盗民ＮＡｉ及ｄｓＡ脱粗效应的研究ｌＷ２丄４ｄｓＲＮＡ的制备％２丄５ｓｉＲＮＡ的设计与合成３８２丄６ｓｉＲＮＡ的与ｄｓＲＮＡ的注射巧２丄７赤拟谷盗ＲＮＡｉ沉默效应观察和数据统计方

7、法３９２４２．２结果与分析２．２．１ｓＲＮＡ与ｄｓＲＮＡ的干扰效果表型观察４２ｉ２．２．２注射ｓｉＲＮＡ或ｄｓＲＮＡ对目标基因动态表达情况４４２．２ＳｉＲＮＡ．３不同和ｄｓＲＮＡ沉默目标基因的干扰效率４５２．３讨４６第兰章赤拟谷盗中ｄｓＲＮＡ引起的脱祀效应４９３．５１１材料与方法３１．１１．供试昆虫５３丄２主要试剂５１５３丄３主要仪器设备１３．１．４ｄｓＲＮＡ的合成与制备５２３１．ＲＮＡ５３．５ｄｓ的注射３丄６用于微阵列芯片杂交所用ＲＮＡ的制备５３

8、３丄７微阵列芯片杂交及其数据分析５３３丄８生物信息学预测来自ｄｓＲＮＡ的ｓｉＲＮＡＷ及脱範基因的捜寻５４－３．１．９实时定量ＰＣ民（ｑＲＴＰＣ民）分析５４３．２结果与分析５５１