草甘膦与杀虫单对不同倍性泥鳅鳍细胞系的毒性效应

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文草甘膦与杀虫单对不同倍性泥鳅鳍细胞系的毒性效应向阳(1214029)指导教师姓名李霞教授专业名称水产养殖论文答辩日期2015年6月2日学位授予日期2015年7月MasteralDissertationInvitrocytotoxicitytestingofglyphosateandmonosultapusingdifferentploidyloachfincelllinesSupervisor:Prof.LiXiaMasterCandidate:XiangYangCollegeofFisheriesandLifeScience

2、,DalianOceanUniversityDalian,Liaoning,P.R.ChinaJune,2015摘要摘要本文研究了不同浓度草甘膦与杀虫单对60-70代泥鳅鳍二倍体细胞系（DIMF）和泥鳅鳍三倍体细胞系（TRMF）的毒性作用。采用噻唑蓝（MTT）法测得草甘膦对DIMF与TRMF24h半致死浓度分别为333.79mg/L，384.91mg/L，杀虫单对DIMF与TRMF24h半致死浓度分别为119.73mg/L，146.26mg/L。DIMF对草甘膦和杀虫单的敏感性明显高于TRMF。经草甘膦与杀虫单处理的活体细胞均表现为细胞拉长，空泡化和脱落并游

3、离于培养基表面的现象。酶活力测定两种细胞系的结果显示：草甘膦浓度为0～300mg/L时，超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽S转移酶（GST）活力随着浓度的增加而增加，随后逐渐降低；乙酰胆碱酯酶（AChE）活力与草甘膦浓度呈负相关。杀虫单浓度为0～100mg/L时，SOD和GST活力随着浓度的增加而增加，100～200mg/L浓度组酶活力逐渐降低；AChE活力与杀虫单浓度呈负相关。并且三种酶活力三倍体均高于二倍体。微核试验结果显示：100mg/L草甘膦与50mg/L杀虫单即能使细胞核产生损伤而形成微核，微核率随着草甘膦与杀虫单浓度增加而增加，草甘膦浓度为500

4、mg/L和杀虫单浓度为200mg/L时微核率最大，草甘膦处理组DIMF与TRMF微核率均为4.3‰，杀虫单处理组DIMF与TRMF微核率分别为3.3‰和3.7‰。电镜观察结果是对照组DIMF和TRMF超微结构无明显差异。经草甘膦与杀虫单处理后，DIMF和TRMF病理变化情况相似：染色质凝集趋边，细胞核分解成多个；线粒体、核糖体与内质网等细胞器数量减少，细胞内出现空泡，出现凋亡小体，表现出凋亡的特征。本文不仅研究了草甘膦与杀虫单毒性的作用机制和不同倍性细胞系之间的差异，而且为建立草甘膦与杀虫单农药体外监控体系打下基础。关键词：草甘膦；泥鳅鳍细胞系；杀虫单；凋亡

5、IAbstractAbstract60-70generationofdiploidloachfincellline(DIMF)andtriploidloachfincellline(TRMF)wereusedtostudydifferentconcentrationsofglyphosateandmonosultaptoxicityinvitro.The24h-IC50ofDIMFandTRMFwere333.79mg/Land384.91mg/Lbyglyphosateand119.73mg/Land146.26mg/Lbymonosultaprespec

6、tively,whichweremeasuredwithMTT.TheglyphosateandmonosultapsensitivityofDIMFwashigherthanTRMFobviously.Afterexposureofglyphosateandmonosultap,thecellularmorphologyshowedthephenomenonwithelongation,vacuolizationandexfoliation.Theresultsoftwokindsofcelllinesenzymeactivitydetermination

7、showedwhiletheglyphosateconcentrationwas0～300mg/L,theactivityofSODandGSTwereincreasedwiththeincreasingconcentrationthengraduallydecreased.TheactivityofAChEwasnegativelycorrelatedwiththeconcentrationofglyphosate.monosultapconcentrationwas0～100mg/L,theactivityofSODandGSTwereincreased

8、withtheincreasingconcentra