茶树倍性鉴定体系的建立

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1、：Ｓ５７．１单位代码；０３６４分类号１１１密级：学号：２７２０２７９签後雇茲丈ｆ硕±学位论文茶树倍性鉴定体系的建立ＰｌｏｉｄＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＳｙｓ化ｍｏｆＣ口ｗｅ／／／０沉ｎｅ巧別Ｓｙ研究生；李瑞琳指导教师：宛晓春教授合作指导教少巧：孙俊教按申请学位口类级别：农学硕ｄｒ专业名称；茶学研究方向：茶叶生物化学与天然产物开发所在学院：茶与食品科技学院答辩委员会主席；二〇—五年六月独创性声明本人

2、卢明所Ｍ义的论义是巧个人甘师巧计Ｋ进枉的硏究Ｋ作及取得的側？｜｜究化火，特别加Ｗ标注和致谢的地为，。Ｍ我所知餘了文｜外论义中不包含化他＇人。经发巧或撰弓过的研究成巧，也不包含为获得安徽化化大学或教巧机构一的学位或证书而化Ｗ过的材料。４我Ｎ工作的巧志钟本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研巧化签名：ｙｆ荷辦时间：公中月／关于论文使用授权的说明本人充全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校巧权，保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅可Ｗ

3、采用影印、缩印或、汇编学位论文＾１扫描巧复制手段保存。同意安微农业火学可｜＾用不同义式在不同媒体上发巧、传播学位论文的全部或遵部分内容。（保密的研学位论文在解密后应守此愤议）究生签名：时间：／Ｔ年＾口／Ｊ？曰？？第导师签名时间：年ｔＴ月／ＪＴ摘要本文初步研究了茶树花药培养的方法，建立了基于FISH技术的茶树倍性检测体系及流式细胞技术的基因组DNA含量测定方法，具体研究成果如下：茶树花药培养在本实验室前期花药培养工作基础上，进一步优化培养基，以“舒茶早”、“福云6号”为试材，研究了不同浓度

4、肌醇对花药培养的影响。结果表明，过量肌醇促进愈伤组织大量形成，不利于茶树花药培养。本研究得到了花药粒膨大，无愈伤形成的花药离体培养试材，为进一步诱导其内花粉再生成器官或组织提供了试材。茶树染色体制片以“舒茶早”为试材，建立了一套基于茶树无性系根尖的简单、高效的染色体制片技术：上午10点左右取茶树根尖，通过8-羟基喹啉4℃冰箱下预处理4小时，用卡诺氏溶液4℃冰箱中固定4小时，然后放在1mol/L的盐酸解离5min，苯酚品红染色10min后敲片、压片，显微镜观察。原位杂交以荧光标记的小麦45SrDNA为探针，获得了“舒茶早

5、”根尖原位杂交图上的6个（3对）信号点，由此推断“舒茶早”是二倍体品种。DNA含量的测定从DNA含量已知的鸡血红细胞、玉米、大豆中筛选出适合茶树DNA含量测定的内参—大豆，以大豆（品种Polanka2C=2.5pg）为内参，测得包括“舒茶早”、“白毫早”、“龙井43”、“特香早”、“福鼎大白茶”、“谷雨香”等十几种茶树品种的DNA含量。以“龙井43”为参照，对“舒茶早”、“白毫早”、“福云6号”，“政和大白茶”、“杭州大叶”以及“上浮洲”愈伤组织的倍性进行了鉴定。结果表明，“舒茶早”、“白毫早”、“福云6号”为二倍体，

6、“政和大白茶”、“杭州大叶”为三倍体，“上浮洲”愈伤组织为四倍体。茶树不同组织DNA含量的测定以“舒茶早”为试材，流式细胞检测结果表明其花瓣、嫩叶以及花丝的DNA相对含量略有不同，但都可以作为倍性鉴定的试材，相对于幼叶，花瓣、花丝因次生代谢产物干扰较少，更适于流式细胞检测。低温胁迫对流式细胞测定结果的影响以“舒茶早”为试材，将叶片置于4℃冰箱中分别处理2h、4h、8h、12h、24h，结果表明随着低温处理时间延长，各处理DNA含量不断降低，说明低温胁迫处理影响流式细胞DNA含量测定结果。III将低温处理12h的“舒茶早

7、”叶片置入25℃恒温箱内分别放置2h、4h、8h、12h和24h后，测定各样品DNA含量，结果表明25℃恒温处理12h后，“舒茶早”叶片的相对DNA含量基本恢复正常。关键词：花药培养，舒茶早，倍性鉴定，DNA含量测定IVAbstractInthisarticle，weexploredanthercultureofCamelliaSinensis，establishedthewayofploidyidentificationbasingonFISHandestimatedDNAvariationamongTeaspeci

8、es.Mainconclusionswereasfollows:1.AnthercultureofCamelliaSinensis.Inthisstudy,‘shuchazao’and‘longjing-43’wereusedtoinvestigateinfluenceofdifferentfactorswithN6basalme