枯草芽孢杆菌bsd-2诱导黄瓜抗灰霉病作用机理研究

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1、中图分类号：Q93密级：公开UDC：579学校代码：10094硕士学位论文（学历硕士）枯草芽孢杆菌BSD-2诱导黄瓜抗灰霉病作用机理研究MechanismsofInducedsystemicresistance(ISR)inCucumberAgainstBotrytiscinereabyBacillussubtilisBSD-2研究生姓名：陈艳光指导教师：张丽萍研究员赵宝华教授学科专业：微生物学研究方向：应用微生物论文开题日期：2013年3月4日二〇一五年三月二十五日中图分类号：Q93密级：公开UDC：579学校代码：10094硕士学位论文（学历硕士）枯草芽孢

2、杆菌BSD-2诱导黄瓜抗灰霉病作用机理研究MechanismsofInducedsystemicresistance(ISR)inCucumberAgainstBotrytiscinereabyBacillussubtilisBSD-2研究生姓名：陈艳光指导教师：张丽萍研究员赵宝华教授学科专业：微生物学研究方向：应用微生物论文开题日期：2013年3月4日I学位论文原创性声明本人所提交的学位论文《枯草芽孢杆菌BSD-2诱导黄瓜抗灰霉病作用机理研究》，是在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的原创性成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己

3、经发表或撰写过的研宂成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中标明。本声明的法律后果由本人承担。论文作者（签名）：指导教师确认（签名）yor年r月狗yoiy4月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在年解密后适用本授权书）论文作者（签名指导教师（签名）：乂11年（月芨曰>6年孓月6曰摘要枯草芽孢杆菌(Baci

4、llussubtilis)能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和有机溶剂的内生孢子，对多种病害病原菌产生抑制作用，是一种理想的生防菌。前期分离筛选到的植物内生枯草芽孢杆菌BSD-2，对蔬菜灰霉病、叶霉病、枯萎病等多种植物病原菌有较强的抑制作用。本文主要从BSD-2抗菌物质的分离、防病效果、诱导黄瓜抗灰霉病机理等方面进行研究。对枯草芽孢杆菌BSD-2代谢所产抑菌物质进行初步分离，得到最佳条件为盐酸调pH至2.5，60%浓度的乙醇对沉淀进行抽提，抽提所得物质采用葡聚糖凝胶G-50进一步分离收集到两个峰的物质，其中第二个峰收集的物质对黄瓜灰霉病菌具有良好抑制作用。风干后沉淀

5、溶于磷酸缓冲液中冷冻干燥得到枯草芽孢杆菌BSD-2代谢产物中的抗菌物质粗提物抗菌素。枯草芽孢杆菌BSD-2及其抗菌物质对黄瓜灰霉病的防病效果测定结果表明，发酵液处理的防病效果最佳，其次为抗菌素和芽孢稀释溶液处理，且两者效果差8异不显著。稀释50倍的发酵液、稀释10倍的抗菌素、10cfu/mL芽孢稀释溶液的效果最好，防病效果分别达到了62.3%、52.9%、56.1%。枯草芽孢杆菌BSD-2及其抗菌物质处理后抗病相关防御酶和几丁质酶的测定结果显示，发酵液、抗菌素和芽孢稀释溶液处理能够提高POD、PPO、PAL、SOD的酶活性，且均在5天时达到酶活高峰，其中POD

6、酶活性分别是对照处理的1.23、1.06、1.51倍；PPO酶活性在发酵液与抗菌素处理初期变化趋势明显，峰值为190U/g·min和170U/g·min，均达到对照处理的数值的3倍以上；PAL酶活性分别是对照组处理的1.68、1.67、1.68倍；SOD酶活性分别为对照处理的1.31、1.28、1.23倍。CAT酶活在发酵液和抗菌素处理后第3天时便达到峰值，活性分别达到103.5U/g·min和107.5U/g·min。发酵液、抗菌素、芽孢稀释溶液处理后几丁质酶活在11天时达到峰值，分别是对照的1.99、1.49、1.95倍。可见枯草芽孢杆菌BSD-2及其抗菌

7、物质可以提高相关防御酶（POD、PPO、PAL、SOD、CAT）以及病程相关蛋白（几丁质酶），加快抗病相关物质的合成，进而诱导黄瓜植株产生抗病作用。发酵液、抗菌素、芽孢稀释溶液处理后叶片中的POD同工酶以及胞间隙蛋III白测定结果显示，叶片中的POD同工酶表达发生变化，不仅表现在同种同工酶表达量的改变，同工酶种类也相应地增加。处理后胞间隙液中的几丁质酶酶活上升，在9天时分别达到为对照的1.32、1.39、1.46倍，且叶片胞间隙蛋白电泳中出现大小约为27kD的新增蛋白条带。可见BSD-2及其抗菌物质能够诱导植物自身防御基因与相关蛋白的表达，从而诱导黄瓜产生对灰

8、霉病的抗病作用。初步建立了黄瓜叶片蛋白