基因突变对特发性扩张型心肌病患者临床发病及预后的影响

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硕ｄｔ论文Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ基因突变对特发性扩张型也肌病患者略床发病及预后的影响ＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＧｅｎｅｔｉｃＭｕｔａｔｉｏｎｓｏｎＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｓｅｔａｎｄＰｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎＰａ杜ｅｎｔｓｗｉｔｈＤｉｌａｔ：ｅｄＣａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ硕±生：时亲琴导师：徐掠教授Ｃａｎｄｉｄａｔｅ：ＳｕｑｉｎＳｈｉＭｅｎｔｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＸｕＢｉａｏ南京大学医学晓ＮａｎｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔ，ＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌｊｇｙ 郑重声明该论文是我本人在导师徐标教授的指导下进巧的巧究工作和取得的研宛成果。论文中所有实验方法、数据及相关材料均属实。除了文中持别加Ｗ掠注的内容外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果。其他同志对该研巧所做的贡献均己在论文中说明。，瓶Ｗ谢意作者签名：日期：年月曰 目录中就要１英就要３前言５了综装１１ｎ论１４结论１８＃＃文巧１９英汉缩咯词对照表２２致巧２３财研巧錦间发表的文章２４ 南京大学研《生毕业论文中文搞要首巧用纸毕业论文巧目：基因突变对特发性护张巧肌病患者化床发病及预后的影响内科专业２０１２级硕去生姓；＆；时素琴指导教师（姓名、巧眷）；徐掀教授摘要一、ｏａｔＩＤ目的：特发性扩张型屯肌病（ｉｄｉｐｔｈｉｃｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｈｙ，ＣＭ）是种、、常见病，该病主要特征是屯腔扩大、屯肌收缩功能下降，该病发病率高，是导致、、（ＩＤＣＭ也力衰竭和年轻人也脏移植的最常见原因。特发性扩张型屯肌病）的发病机制目前尚不十分清楚，，但近十余年来随着分子遗传学技术的不断发展和进步ＩＤＣＭ的发病原因、发病机制等方面进行了深入研究和探讨，发现了与，对ＩＤＣＭ有关的基因突变。这些基因包括编码调节必脏功能的神经体液因子基因－血管紧张素－屯、、肌收缩（如肾素酸固爾系统基因等）Ｗ及编码肌纤维基因（如屯－ＩＤ蛋白及调节蛋白基因）。基因型表型的相关性分析可能为ＣＭ患者提供新的危险分层方法，，然而目前国人瓜ＣＭ患者突变携带者和未携带者临床资料和ＩＤ，预后的差异性尚无报道。本文系统性分析了我院收治的ＣＭ患者的临床资料、（ＩＤ）并对这些患者进行基因测序，探讨基因突变与特发性扩张型屯肌病ＣＭ患者的临床发病及预后的相关性。２０Ｈ年０、１月至２０１４年０９月收治的特发性扩张型屯方法；搜集我院自肌病患者一１１５例、胸片等般检查及基因，这些患者均进行血清生化、屯电图、屯脏彩超、、。测序，并接受传统的抗屯力衰竭、抗屯律失常治疗基因测序后将其分为基因突变组（２９例）和未突变組（％例）。将两组患，出院后对两组患者进行定期随访者的临床资料和随访结果进行统计学分析。（，此外，结果：两组患者的随访资料再入院和生存分析）无统计学差异两组患者的性别比例、首发症状年龄、血压、糖尿病比例等无显著差异，辅助检查特征如左室射血分数ＲＳ－Ｔ夹角和血肌巧水平等无、左室舒张末内径、室壁厚度、Ｑ１ 显著差异，治疗情况（药物和器械治疗）无差异。结论：携带基因突变的瓜ＣＭ患者临床发病及巧后较未携带突变者无显著差异。词：特发性扩张型也肌病、基因突变、临床特征、预后、相关性２ 南京大学研究生毕业论文英文摘要首页用纸ＴＨＥＳＩＳｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＧｅｎｅｔｉｃＭｕｔａｔｉｏｎｓｏｎＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｓｅｔａｎｄＰｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＤｉｌａｔｅｄＣａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙＳＰＥＣＩＡＬＩＺＡＴＩＯＮ：ＣａｒｄｉｏｌｏｇｙＰＯＳＴＧＲＡＤＵＡＴＥｃＳｕｑｉｎＳｈｉＭＥＮＴＯＲ：Ｐｒｏｆ．ＸｕＢｉａｏＡｂｓ化ａｃｔＯｂｊｅｃｔｉｖｅｒｌｄｉｏｐａｔｈｉｃｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ（ＩＤＣＭ）ｉｓａｃｏｍｍｏ打ｄｉｓｅａｓｅａ打ｄｃｈａｒａｃ１ｔｒｔｅ；ｅｒｉｚｅｄｂｖｅｎｔｒｉｃ山ａｒｅｘａｎｓｉｏｎｄｅｃｒｅａｓｅｄｍｏｃａｒｄｉａｌｃｏｎａｃｉｌｙｐ，ｙｆｕｎｃｔｉｏ打ＪＤＣＭｉｓｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏ打ｃａｕｓｅｏｆｈｅａｒｔｆｋｉｌｕｒｅａｎｄｈｅａｒｔｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｏｕｎ．ＴｈｅａｔｈｏｅｎｅｓｉｓｏｆｔｔｔｔｃＦｏｒｉｄｉｏａｈｉｃｄｉｌａｅｄｃａｒｄｉｏｍｏａｈｉｓｎｏｔｅｌｅａｒ．ｙｇｐｇｐｙｐｙｙ打ｅａｒｌｙ１０ｙｅａｒｓ，ｗｉ化ｔｈｅｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｄｅｖｄｏｐｍｅ打ｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｓ１ｅｓｅａｃｏｖｅｒｅｄｔａｔｅｎｅｍｕｔａｔｏ打ｓａｓｓｏｃａｔｅｄ；ｅｃｈｎｏｌｏｒｒｃｈｅｒｓｈａｖｅｄｉｓｈｉｉｉｗｉ化ｇｙ，ｇＩＤＣＭｉｎｉｔｓｅｔｉｏｌｏｇｙａｎｄａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｔｈｅｓｅｇｅｎｅｓｃｏｄｅ打ｅｕｒｏｈｕｍｏｒａｌｆａｃｔｏｒｓｗｈｉｃｈｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｃａｒｄｉａｃｆＵｎｃｔｉｏ打ａｎｄｍｏｃａｒｄｉａｌｆｉｂｅｒｓ．Ｔｈｅｅｎｏｔｅｈｅｎｏｔｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｙｇｙｐｐｙｐ－ａｎａｌｙｓｉｓｍａｙｐｒｏｖｉｄｅａｎｅｗｒｉｓｋｓｔｒａｔｉ打ｃａｔｉｏｎｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＩＤＣＭｈｏｗｅｖｅｒｔｈｅｒｅｉｓｎｏｒｅｏｒｔａｂｏｕｔｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｃｌｉ打ｉｃａｌｄａｔａａｎｄｒｏｎｏｓｉｓ，，ｐｐｇｔ－Ｍｔｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｍｕｔａｉｏ打ｃａｒｒｉｅｒｓａｎｄｎｏｎｃａｒｒｉｅｒｓｉ打也ｅＩＤＣａｉｅｎｔｓｉ打Ｃｈｉｎａ．ＴｈｉｓｐａｒｔｉｃｌｅｄｅｌｅｔｅｄｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎｄａｎａｌｙｚｅｄｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｏｆｔｈｅＩＤＣＭｐａｔｉｅｎｔｓｔｔｔｔｔｔｔｉｎｏｕｒｈｏｓＵａｌ１；ｏｉｎｖｅｓｉａｅｈｅｃｏｒｒｅｌａｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｅ打ｅｉｃｍｕａｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｐｇｇｏ打ｓｅｔ过打ｄｒｏｇｎｏｓｉｓ．ｐＭｅｔｈｏｄ：Ａｔｏｔａｌｏｆ１１５ＩＤＣＭｐａｔｉｅｎｔｓｗｈｏｗｅｒｅａｄｍｉｔｔｅｄｔｏｏｕｒｈｏｓｐｉｔａｌｆｒｏｍＪａｎｕａｒｙ２０１１ｔｏＳｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１４ｗｅｒｅｅｎｒｏｌｌｅｄａｎｄｒｅｃｅｉｖｅｄｓｅｒｕｍｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ１；ｅｓｔ、－ｗｈｏｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｒａｉｃＸｒａ、ｅｃｈｏｃａｒｒａｈｉｃａｎｄｅｎｅｓｅｕｅｎｃｉｎ．Ｔｈｅｌｅｇｐｈ、ｙｄｉｏｇｐｇｑｇｙａｃｃｅｐｔｈｅａｒｔｆａｉｌｕｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄａｎｔｉａｒｒｈｙｔｈｍｉｃｔｈｅｒａｐｙ．Ｔｈｅｓｅａｔｉｅｎｔｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｐ＝＝Ｔｈｉｎｔｏｍｕｔａｎｔｇｒｏｕｐ（打２９）ａｎｄｎｏｔｍｕｔａｎｔｇｒｏｕ（打８６）ａｆｔｅｒｇｅｎｅｓｅｕｅ打ｃｉｎｇ．ｅｐｑｒｍａｒｅｎｄｏｎｔｔａｒｅａｓｅｍｏｔａｔｈｅｃｌｉｎｉｃａａｔａｐｉｙｉａｒｅｈｏｓｐｉｌｄｍｉｓｓｉｏｎａｎｄａｌｌｃａｕｌｉｙ．Ｔｌｄｐ３ 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前言一｜、］［屯是，各种不同原因均可导致该病肌病类异质性也肌疾病，通常伴有必、电活动障碍和（或）屯，常常表现为不恰当也室扩张或目Ｅ厚肌机械活动障碍，可、血管死亡导致也功能不全甚至屯，本病可局限于也脏本身，亦可是全身系统性疾２、［］、分为扩张型也肌病、病的部分体现。屯肌病、肥厚型屯肌病、限制型屯肌病及致、、肌病、屯律失常型右室屯，其中扩张型屯肌病最常见。扩张型必肌病（ＤＣＭ）的１［］、、特征，也室收缩功能下降为单侧或双侧屯腔扩大，逐步出现充血性屯力衰竭症、律失常多见状，室性或房性屯，病情进行性加重，死亡可发生在疾病的任何阶段。、肌病的病因及发病机制至今尚不十分明确扩张型屯，目前认为ＤＣＭ的病因可能是：家族性／遗传性、特发性、病毒性／免疫性、酒精性／中毒性。口］基于分子遗传学及循证医学的发展，研究者发现３０％＾上的ＩＤＣＭ具有遗传基础、，且大量研究证实基因突变与特发性扩张型也肌病相关，遗传因素在ＩＤＣＭ发病中占有重要的比例，遗传学上ＩＤＣＭ存在很强的异质性，目前己知有超过３０个基因被确定为ＤＣＭ的致病基因Ｗ，每个致病基因突变占整个ＤＣＭ突变的比例变异大，除ＴＴｉＶ基因占比较高比例外，其他基因所占比例从＜１％到６％５不等［气７［］基因检测技术可用来筛查突变的基因：Ｓａｎｅｒ测序、第二代测序、，包括ｇ单链构象多态性ＳＳＣ、变性高效液相色谱ＤＨＰＬＣ等多种方法。Ｓａｎｅｒ测序法（巧（）ｇ一个固定的点开始一是根据核昔酸在某，随机在某特定的碱基处终止，在每个碱基后面进行巧光标记一系列核巧，产生ＷＡ、Ｔ、Ｃ、Ｇ结束的四组不同长度的酸，最后在尿素变性的ＰＡＧＥ胶上电泳进行检测，从而获得可见的ＤＮＡ碱基序７列［］。Ｓａｎｇｅｒ巧ｄ序比较适合于检测已知的突变位点，因其涉及步骤多、每次反应的读长受限，故进行全基因测序成本较高。第二代测序技术（相对于经典的Ｓａｎｇｅｒ一８［］测序）是对传统测序的次变革，具各的原理是：（１）每个位点ＷＤＮＡ模板合成新ＤＮＡ同时测序，即边合成边测序，过程中添加不同种核昔酸会释放出不同的巧光；（２）巨大数量位点上各基因短片段Ｗ阵列方式同时平行进行测序。第二代测序具备高准确性、高通量、高灵敏度和低运行成本的特点，尤其在新发突变位点的检测方面具有不可比拟的优势。ＳＳＣＰ用于检测点突变，原理在于ＤＮＡ构象存在差别，，相同长度的单链ＤＮＡ碱基序列不同，形成的构象就不同，即５ ＳＳＣＰ只是一单链构象多态性，种突变检测方法，要最后确定突变的位置和类型，一一还需进步测序。ＤＨＰＬＣ进行基因突变检测是基于异源双链的形成，是种高通量筛选ＤＮＡ序列变异的技术，其原理是在部分变性条件下，杂合与纯合二倍体在色谱中保留的时间存在差异，通过这个差异发现ＤＮＡ突变，目前也广泛用于基因序列的比较、人类基因突变及疾病相关性的研究。－基因型表型的相关性分析可能为ＤＣＭ患者提供新的危险分层方法，基于目前国人ＩＤＣＭ患者突变携带者和未携带者临床资料巧预后的差异性尚无报道，本研究采用二代测序技术，对１１５例阻ＣＭ患者的基因序列进行突变筛查，将发生基因突变和未发生突变的患者的临床资料及出院后随访结果进行统计学分析，旨在探讨基因突变对阻ＣＭ患者临床发病及临床预后的影响。６ 材料和方法１、对象和分组选取２０１一１１５例。阻ＣＭ的诊断１年０１月２０１４年０９月我院收治的瓜ＣＭ患者＂＂屯、参照２００７年中华医学会也血管病学分会提出的肌病诊断与治疗建议中的＞＞．０ｃｍ和５．５ｃｍＩ：（也室舒张末期内径（ＬＶＥＤｄ）５（女性）临床诊断标准，即１）左（ＬＶＥＦ）＜４５％、室缩短速率巧Ｓ）＜２５％。（男性）。（２）左室射血分数和（或）左屯，，＞＝Ｘ＋０Ｘ（３ＬＶＥＤｄ２．７ｃｍ／ｍ表面积（ｍ）０．００６１（ｃｍ）．０１２８）更为科学的是，体身高－体重（Ｋ）０．１５２９，更为保守的评价ＬＶＥＤｄ大于年龄和体表面积预测值的ｇ、、１１７％２ＳＤ＋５％。，如通也病屯，即预测值的倍排除引起也肌损害的其他疾病’、、脏瓣膜病、先天性也脏病、高血压、酒精性也肌病、巳动过速性屯肌病、也包疾病、系统性疾病、肺屯、病和神经肌肉性疾病等。所有患者经報向二代测序检测基因突变），８６例（未突变，鉴定出２９例突变携带者（突变组未发生基因突变者姐）。ｉｄｉｔｈｉｃ，ｏａ注：本实验中扩张型也肌病患者均符合此条件均为持发性扩张型也肌病（ｐｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｏａｔｈＩＤＣＭｙｐｙ，）２、临床资料一收集患者般临床资料（性别、症状首发年龄、糖尿病、血压等），辅助检查资ＩＶＳＴＤ、Ｓ－Ｔ（左室射血分数［ＬＶＥＦ、左室舒张末内径［ＬＶＤＤ］、室间隔厚度］ＱＲ料］［夹角和血肌巧水平等）（也衰药物治疗和器械治疗如ＩＣＤ／ＣＲＴＤ等），治疗情况和临床随访资料（再次入院和生存情况）。３、主要实验试剂血液ＤＮＡ提取试剂盒巧ａｇｅｎ公司（ＤＮｅａｓｙｌｏｏｄ皮ＴｉｓｓｕｅＫｉｔ，ＣＡＴ．ＮＯ．６％０４）；ＢＰＣＲ引物上海赛百盛生物科技有限公司（ＰＡＧＥ纯化）；ＳＴＲ１０ＸｂｕｆｅｒＰｒｏｍｅｇａ公司；ＧｏＴａｑＤＮＡＰｏｌｍｅｒａｓｅＰｒｏｍｅｇａ公司（ＣＡＴ．ＮＯ．＃Ｍ３００１）；ｙ琼脂糖粉ＢＩＯＷＥＳＴ公司；ＤＬ２００ＤＮＡｌａｄｄｅｒ康为世纪生物科技有限公司；ｘｒｏｅａ公司ＬｏａｄｉｎＢｕｆｆｅｒ（６Ｐｍ；）ｇｇ７ 无水乙醇南京化学试剂有限公司；ＥＢ南京化学试剂有限公司；司－０３琼脂糖凝胶回收试剂盒天根生化科技有限公（ＤＰ２０９）；Ｈｉ－ＤｉＦｏｒｍａｍｉｄｅＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（ＣＡＴ．ＮＯ．４３１１３２０）；蛋白酶ＫＱｉａｇｎｅｎ公司；化ｇＤｙｅＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏ巧ｓｔｅｍｓ；ｘ－＋ＥＤＴＡ９＋ＩＱＴｒｉｓ棚酸电泳缓冲液（ＴＢＢ）配制：Ｔｒｉｓｌ０８ｇ．３测酸５５ｇ，混ｇｘ合后溶于去离子水，定容至化即成ｌＯＴＢＥ母液，室温保存；ＸＸ１ＴＢＥ电泳缓冲液配制：取１００ｍｌ１０ＴＢＥ母液，加９００ｍｌ去离子水混匀；４、主要实验仪器深低溫冰箱Ｔｈｅｒｍｏ公司；超纯水净化器Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司；－恒媪金属浴无锡沃信仪器有限公司（型号；ＶＳ１０Ａ）；屯、Ｔｈｅｒｍｏ公司（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＣＡＴ．ｎｏ．７５００４３８０）低速离也机离机；，－：ＷＨ３）祸旋仪上海妒西分析仪器厂（型号；－立式压力蒸汽灭菌器上海博讯实业有限公司医疗设备厂（型号：ＹＸＬＳ）Ｑ；移液器Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ；ｃｅｎｃ－ＮａｎｏＤｒｏＤＮＡ浓度定量仏ＴｈｅｒｍｏＳｉｔｉｆｉ（型号：ＮａｎｏＤｒｏ２０００）；ｐｐｅ－ＰＣＲ仪ＬａｂｎｔｍｕｔｉｇｅｎｅＧｒａｄｉｅｎｔ（Ｌａｂｎｅｔ，型号；ＴＧ９００Ｇ）；电泳仪Ｂ－Ｒａｄ公司ｉｏ；Ｂ－ｉｏＲａｄ公司凝胶成像仪；测序仪１ＡＢＩ公司（型号：ＡＢＩ３１３０ＧｅｎｅｔｉｃＡｎａｌｚｅｒ）；ｙｌｌｕｍｉｎｉｓｅ）测序仪２Ｉｌｌｕｍｉｎａ公司（型号：ＩａＨｑ２０００；超声仪Ｃｏｖａｒｉｓ公司（型号：ＣｏｖａｒｉｓＳ２）；电子天平梅特勒－托利多仪器上海有限公司；制冰机Ｓａｎｙｏ公司；微波炉美的公司；５、实验方法５．１基因组ＤＮＡ提恥获得患者知情同意后，采集外周静脉血５ｍｌ，ＥＤＴＡ８ 抗凝，按照ＤＮｅａｓｙｌｏｏｄ＆Ｔｉｓｓｕｅ拉ｔ（ｉａｅｎ公司）说明书操作提取基因组ＢＱｇＤＮＡ。具体步骤如下；５丄１吸入２０１１蛋白酶区至１．５１１１１寓也管，然后加入２００＾叫解冻并摇匀的血液标本；。５丄２口入２００ｘｌＡＬ１５６（：解育１〇１１１山适当离也＾力缓冲液，手动混匀巧，５＾免盖子上残留；５丄３加入２００ｉ１５，Ｓｉｎｐ无水乙醇，手动混匀秒缓慢加入至ＱＩＡａｍｐｐｍ一ｍＬＣｏｌｕｍｎ上，８０００ｒ离也１ｍｉｎ，蒋柱子放入离也管ｐ个干净的２；５丄４缓慢加入５００［ｉｌＡＷｌ缓冲液，８０００ｒｐｍ离也１ｍｉｎ，丢弃废液，将柱子一２放入个干净的ｍＬ离也管；５丄５缓慢加入５００ｉｌＡＷ２缓冲液，１４０００巧皿离屯３ｍｉｎ，丢弃废液，套上柱＾、３］１１１１１１１１１子，１４００〇１离也；］５丄６将柱子放入１．５ｍＬ新离也管，缓慢加入８０片１ＴＡＥ洗脱，室湿赌育５ｍｉｎ，８０００ｍ、ｒＩｍｉｎｐ离屯；５丄７Ｎａｎｏｄｒｏｐ测定ＤＮＡ浓度及纯度。５．２基因组ＤＮＡ质量鉴定；Ｗ去离子水清洗Ｎａｎｏｄｒｏｐ仪器石英探头，ＷＴＢＥ缓冲液作为空白对照（Ｂｌａｎｋ），取２叫ＤＮＡ样品置于检测仪的探头上测量目的样品的ＤＮＡ浓度和纯度，Ｗｎｇ仙表示浓度，ＷＯＤ２６０／ＯＤ２８０和ＯＤ２６０／ＯＤ２３０衡量纯度。５．３基因组ＤＮＡ测序：提取的ＤＮＡ经质量检测，送样至北京麦基诺科技公、括样本文库的制备司进行屯血管基因Ｐａｎｅｌ的範向二代测序，包、文库的质量检测、目标区域基因的捕获、捕获文库测序、样本数据的分析等过程。囊括的基因包括绝大部分也肌病致病基因。５．４Ｓａｎｇｅｒ测序验祗二代测序获得突变信息后，进行Ｓａｎｇｅｒ测序验证。具体步骤如下：５．４．１ＰＣＲ扩增：二代测序获得突变信息后，经Ｐｒｉｍｅｒ３设计引物进斤ＰＣＲ‘’’Ｃｍ虹、扩増。ＰＣＲ条件：（１）９６Ｃ预变性５ｍｉｎ；（２）９４Ｃ变性１ｍｉｎ、６０退火１°‘７２Ｃ１ｍｉｎ３５Ｃ１５ｍｉｎ。，共个循环３７２延伸；（）延伸Ｘ５］１琼脂．４．２ＰＣＲ产物检测ｔＢＥ，１．４；电泳缓冲液采用１缓冲液配胶［＾ｇ９ ＋７０Ｘ糖粉ｍＬ１ＴＢＥ缓冲液配置（质量体积比为２％），加入２ｆｉｌ邸后于微波炉内髙温煮沸，溶解琼脂糖粉，约３０分钟后胶体凝固。上样时取３１１？£民产物和＾０．６６ＸＬｏａｄｉｎｇｕｆｅｒ混匀后，于凝胶中电泳（恒压１００Ｖ，电泳３０ｍｉｎ）。条Ｂ带分开后，将凝胶移至凝胶成像系统中ＵＶ曝光进行检测，根据ＤＮＡｌａｄｄｅｒ的分子量确定ＰＣＲ产物的大小。５．４．３ＰＣＲ产物纯化：电泳之后，根据ＤＮＡｌａｄｄｅｒ大小确定目的片段的位置，在ＵＶ下切割目的条带（尽量切除多余部分），称重后，采用天根生物科技公司的凝胶回收试剂盒，纯化回收目的条带。５．４．４Ｓａｎｇｅｒ测序：割胶回收之后的ＤＮＡ，进巧ＢＩＧＤＹＥ反应，原料中含有巧光标记的双脱氧核昔酸，从而随机终止反应，形成相差１个核巧酸的不同条带，之后对反应产物进行纯化，纯化步骤如下：？加入５１１１２５康的６〇１＾和６０１无水乙醇，控轻摇匀，室温放置１５１１１１化？片’②１２０００ｒｍＣ、ｐ４离屯３０ｍｉｎ后，巧开管盖，置于％孔板，铺上吸水纸，将、至％ｍ即板倒置离屯００ｒｐ停止；°⑤加入６０叫７０％乙醇（现配现用），轻轻震荡，１２０００ｒｐｍ４Ｃ离也５ｍｉｎ；④重复步骤②和③；⑤巧开管盖，室温让酒精挥发干净。纯化之后进行变性，即加入１０叫‘’迅Ｄ－立即－Ｉ仿＾ｎａｍｉｄｅ溶解ＤＮＡ９５ＣｉｎＣ冷５ｍｉｎＡＢＩ３１３０，变性５ｍ，后２０冻，上测序检验。检测结果用Ｃ虹ｏｍａｓ软件进行分析。６、统计学分析；采用ＳＰＳＳ１７．０软件分析，计量资料Ｗ均数＋标准差Ｇ±ｓ）表示，汁量资料采用独立样本２ｔ检验，计数资料Ｗ百分比表示，计数资料采用Ｘ检验，＆３虹－的６缸法采用１描述病人的生存情况１＾）１３］皮９，组间生存比较采用£检验。尸＜０．０５为有统计学差异。１０ 结果１、临床终点比较：１．１、携带突变组中因也衰多次入院者１４例（４８．２８％），无突变组多次入院巧例＾＝（４５．３５％），两组比较无统计学差异（ｉ０．８３２检验）。，ｆ１．２、对全因死亡进行分析后发现，平均随访巧个月之后，突变组死亡５例，未突变组死亡９例，生存分析显示突变携带姐较未突变组有较差预后的造势，但无＝显著性差异（ＬｏｒａｎｋＰ０．１２６５，图１）ｇ。－－－—－－＿１ｍｕｔａｔｉｏｎ１Ｉ■—■－ｎｏｍｕｔａｔｉｏ口—８０；Ｉ—？＞Ｉ■＞６０－＝Ｉ＿＾４０－？Ｌｏ巧ｎｋ＝０１２６５ｇｐ．—＊Ｗ＾－２００１１１０２０４０６０ｍｏｎｔｈ图１．携带突变和未携带突变的阻ＣＭ患者生存曲线１．３、将所有收集的临床参数包括性别、是否吸烟、是否合并糖尿病、是否植入器械、是否发生突变进行多因素分析。Ｃｏｘ回归分析示，上述临床参数未影响患者的生存预后，详见表１。１１ 表１多因素Ｃｏｘ回归分析预后相关因素￣＂＂＂＂ＢＳＥＷＡＬＤ＾ＰＨＲ９５％ＣＩ￣－ＳＵ＾０８３５ＯＯＷｉ０．９５９０．９５８０．１８７４．９２４是否吸烟０－．１％０．５９７Ｏ．Ｍ３１０．８１７１．１４８０．３５６３．６９８－－是否合并糖尿病０．．．．４７９．０５６０．６６４０００７１０说３０９４６０２５７３？－０是否植入器械．１４１０．６４８０．０４７１０．８２８０．８６９０．２４４３．０９１￣７是否发生突变０．８７００．如３２．０８３１０．１４９２．３８７０．巧２．７８１２一、般临床特征比较：突变姐和未突变组在性别组成、吸烟、合并糖尿病、血一般临床资料之间无显著差异压、症状首发年龄等，谁见表２。表２—般临床特征比较一般临床特征突变组（巧例）未突变组（８６例）Ｐ值〇性别（男）２３（７９．３１／〇）６４（７４．４１％）０．８０３症状首发年龄（岁）５４．９３巧．１４５８．５化１．６８０．２９６〇吸烟８２７．５６％０８（．５９／〇）２８（３２）．１７合并糖尿病６（２０．６９％）１４（１６．２８％）０．５８０收缩皮（ｎｍｉＨｇ）１２４．７９±３．６４１２１．７８±２．２３０．４９８舒张压（ｍｍＨｇ）８１．２９±２．７８７６．５９±１．７３０．１７１３、辅助检査比较：两组患者均行也超、也电图及生化检查，包括射血分数（ＥＦ）、左室舒张末内径－（ＬＶＤＤ）、室间隔厚度ＯＶＳＴＤ）、左房内径（ＬＡＤ）、ＱＲＳＴ夹角、肌巧、钢浓度、氯浓度等参数。常见辅助检查结果在两組中亦无统计学差。异，详见表３ＤＣＭ患者平均ＬＶＥＦ为３０％，符合收缩性功能不全的诊断标准。ＬＶＤＤ明显増大７－、．１ｃｍ。平面ＳＴ也，平均值达ＱＲ夹角是预测全因死亡和血管性死亡的独立预测因子，夹角越大，预后越差。１２ 表３实验室检查比较辅助检查突变组（巧例）未突变组（８６例）Ｐ值ＬＶＥＦ（％）２９．２２±１．４６２９．６７±０．６６０．７５２ＬＶＤＤｃｍ７．１１功．１８７．１２±０．０９０．％５（）ＩＶＳＴＤｃｍ０．８７±０．０３０．９６±０．０８０．５１６（）ＬＡＤｃｍ５．２±０．１５５．１６±０．１１０．８５９（）。Ｓ－Ｔ夹８１．４化１２．７２９０．５化６９６０．５３７ＱＲ角（）．肌巧（ｕｍｏｌ／Ｌ）８７．６８±４．７７９８．６７±６．０７０．３１３钢（ｍｉｎｏｌ／Ｌ）１４０．１６±０．８３１４１．２９±０．３４０．１４０氯（ｍｍｏｌ／Ｌ）１０２．８９０．１８±０．６４１０２．１１±０．９１０４、治疗方式比较：两组患者均进行抗也力衰竭及抗也律失常常规药物及器械治、ＡＣＥＩ／ＡＲＢ、疗，包括使用Ｐ受体阻滞剂利尿剂、醒固丽受体措抗剂、地高辛／ＣＲＴ－Ｄ及植入ＩＣＤ。药物治疗和器械植入在两组间无显著性差异，详见表４。药物治疗中的Ｐ受体阻滞剂、ＡＣＥＩ／ＡＲＢ和酸固爾受体招抗剂的使用比例均达８０％Ｗ上，说明ＤＣＭ患者在我院治巧的规范性。器械植入包括ＩＣＤ和ＣＲＴ（Ｄ）的使用，其比例为２７％，较国外使用比例仍然偏低。表４治疗方式比较药物及器械治巧突变组（巧例）末突变组（８６例）戶值受体阻滞剂２４８２．７６％６８７９．０７％０．７９２Ｐ（）（）Ａ〇ＣＥＩ／ＡＲＢ２４８２．７６／〇７０８１．４０％１．０００（）（）利尿剂２５巧６．２１％）８２（９５．３５％）０．１０９〇酵固丽受体措抗剂弘（７９．３１／〇７３８４．８８％０．５６４）（）地高辛１０（３４．４８％）３０（３４．８８％）１．０００－Ｄ５植入ＩＣＤ／ＣＲＴ（１７．２４％）２６（３０．２３％）０．２２９１３ 讨论９、［］特发性扩张型屯ＩＤＣＭ、、肌病（）原因不明，Ｗ屯腔左屯室和（或）双必室扩大、、屯肌收缩功能下降为主要特征。临床表现为进行性加重的私力衰竭、房、、性或室性也律失常力衰竭第Ｈ位的病因，仅次、血栓栓塞甚至巧死。ＩＤＣＭ是屯、、于冠屯病（ＣＨＤ）和高血压（ＨＢＰ），它也是最常见的原发性屯肌疾病的表现形一１〇－［］式。ＩＤＣＭ是世界上最常见疾病之，群体发病年龄为２０５０岁，男女发病比１１２［］ＩＤ率约为；１，新生儿、婴儿、儿童和青少年比较少见。近年来ＣＭ发病，率逐年升高，且预后极差，我国ＩＤＣＭ发病率为１９／１０万，２年病死率为４１．２％、１２５－［］８０，５１ＩＤ年病死率为．０％国外曾报道年病死率约５．０％５０．０％。ＣＭ的病因？心１４２０［］尚不十分明确％的ＤＣＭ患者有家族史，，但有报道表明％５０也有研究＂表明约［］３０％的扩张型也肌病与遗传因素有关，提示遗传因素在其发病中的重要地位。随着分子遗传学研究手段，包括连锁分析和最近发展迅速的二代测序技、术的进展，研究ＤＣＭ的遗传学致病基因成为屯血管研究的热点。分子遗传学研究表明，约２０个基因的数１０种突变可导致家族性ＤＣＭ［气Ａｂｅｌｍａｎｎ［＂］４（ＦＤＣＭ）或阻ＣＭ等认为ＩＤＣＭ的遗传方式可能有Ｗ下种：（１）常染色体显性遗传；其特点是外显率将近５０％，即患者的父母亲往往是患者，家族成员中患者例数可达半数左右，男女患病概率相似；（２）ｘ染色体连锁遗传；其特点是女性携带ＤＣＭ的致病基因，但不发病，患者均为男性；（３）常染色体隐性遗传：即患者的双亲均是致病基因的携带者，但都不是ＤＣＭ患者；（４）线粒体遗传一。上述遗传方式中线粒体遗传及常染色体隐性遗传只占小部分，Ｘ１３［］染色体连锁遗传占５％，常染色体显性遗传占２３％，是主要的遗传方式。口］ＤＣＭ１杨春等总结了不同遗传方式的Ｉ致病基因：、常染色体显性遗传的瓜ＣＭ致病基因：（ｌ）ＡＣＴＣ基因，编码肌动蛋白，是最常见的ＩＤＣＭ致病基因，位于染色体５、）１ｑｌ４，该基因突变影响屯肌收缩力；（２ＤＥＳ基因，编码桥粒蛋白，位于染色体２ｑ３５，该基因的突变使收缩力和信号传导不正常（３）ＭＹＨ７基因，；编码肌球蛋白ｎ８］３重链，位于染色体１４ｌｌ．２，Ｋａｍｉｓａ〇等发现ＭＹＨ７基因突变（ｑｇ一半的患者在一可导致ＦＤＣＭ，该家系约２５岁前发病，并且同基因不同位点的突变其发病机制不同（４）ＳＧＣＤ基因，编码肌细胞増强蛋白，位于染色体；－５３３３４、Ｄ，其编码产物ＳＧ可稳定细胞膜肌中均有ＳＧＣ基因ｑ，由于骨骼肌和屯１４ ，故存在该突变的患者可能会发生ＤＣＭ（５）ＴＮＮＴ２及其突变产物的高度表达；基因，编码肌巧蛋白Ｔ；（６）ＬＭＮＡ基因，编巧核纤蛋白，家系调查表明ＴＮＮＴ２基因突变患者首先表现为房室电活动进行性延迟，进而出现传导系统疾病、也腔、扩大力衰竭或巧死，少数患者Ｗ巧死为首发症状（７）ＴＩＮ基因，位、充血性屯；于染色体２ｑｌ３，它编码的肌联蛋白是将也肌收缩和舒张的生物信号转换为机械力的传感器（８）ＶＣＬ基因，编码纽带蛋白（ｍｅｔａｖｉｎｃｕｌｉｎ），纽带蛋白将影响也；、ｔｔ脏细胞骨架蛋白ｖｉｎｃｕｌｉｎ、ｄｙｓｒｏｐｈｙｉｎ及ａｃｉｎ的正常表达，削弱屯肌细胞同必脏收缩之间的联系９ＭＹＢＰＣ屯、：（）３基因，编码脏肌球蛋白结合Ｃ，近期研究一Ａ发现ＦＤＣＭ患者有ＭＹＢＰＣ３错义突变ｓｎ９４８Ｔｈｒ；（１０）ＴＰＭ１基因，编码（）ｔ原肌球蛋白（Ｘ，原肌球蛋白的主要作用是加强和稳固肌动蛋白丝ａｃｉｎ，阻止与肌９球蛋白结合［］。张玉辉等在杨春基础上补充了几个常染色体显性遗传瓜ＣＭ致病基因，包括：ＭＬＰ／ＣＳＲＰ３基因，编码肌肉ＬＩＭ蛋白，ＭＬＰ基因突变使屯肌Ｚ带不能正常工作，无法感受身体运动激烈程度的变化，不能相应增加降低扩张收，编码受憐蛋白缩强度，ＰＬＮ基因突变使也肌细胞间的巧无法返回；ＰＬＮ基因屯、、肌会发生持续性收缩肌细胞，这部分也肌细胞将无法正常舒张，局部屯，进一，方法是移植必脏而异常扩大并受到破坏治疗这种遗传性疾病的唯；此外还有－ＭＹＨ６基因ＡＣＴＮ２基因、ＺＡＳＰ／ＬＢＤ３基因、ａ、ＡＢＣＣ基因。２、Ｘ连锁遗传的ＤＣＭ致病基因、：（ｌ）ＤＹＳ基因，编码抗肌萎缩蛋白，ＤＹＳ基因突变可使屯ｔａ．５基因ｆｚｚｉｎｓ肌细胞骨架与细胞外基质连接减弱或丧失；（２）ＴＡＺ／Ｇ４，编码蛋白、，病理学研究发现该基因突变导致屯肌肥大、也肌纤维弹性组织增生、必室腔扩张，临床特征表现为嗜中性白细胞减少、线粒体异常、婴儿期死亡；３、线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）遗传的ＤＣＭ；ｍｔＤＮＡ突变导致线粒体ｔＲＮＡ的结构异常或种类不全，进，最终导致、ｍＲＮＡ不全而使蛋白质合成受阻或功能异常呼吸链中多种酶的活性降低，４、，ＡＴＰ生成显著减少最终发生也肌死亡。常染色体一隐性遗传的ＤＣＭ：ＴＮＮＩ３基因，编码肌巧蛋白Ｉ，该基因是第个被证实的扩张型屯、肌病常染色体隐性遗传的致病基因３基因突变使肌巧蛋白相互作，ＴＮＮＩ、肌收缩活动减弱用减弱从而使屯。阻ＣＭ患者表型和基因型的关联分析在一些研究中得到报道中研究的最，其为清楚的是基因突变。研究显示，携带突变的ＤＣＭ患者外思率１５ １９［］高５０－ＤＣＭ表型变携带者，几乎所有患者在６０岁时都会外显全部或部分；突口Ｗ一、较不携带者的预后更差，表现为室性屯律失常和ＳＣＤ的发生率高。最近项，３个对２６９例ＺＭ？似突变携带的ＤＣＭ患者的队列研究显示平均随访４月之后，、（ＭＶＡ）１８％的患者发生恶性室性屯律失常；携带非错义突变（包括插入／缺失突变、剪切位点的突变）是这些ＤＣＭ患者发生ＭＶＡ的独立预测因子（危＝＝－．Ｈ个独立预测因子（非持续险比［Ｈ民２．５９５％置信１．４４５，与其他］，区间［巧）口Ｇ］、ＮＳＴＴＶＥ巧＜４５％、男性）形成累加作用。性室性屯动过速［、左室射血分数［Ｌ］Ｋａ、ｒｉｎ等发现突变携带者发生ＭＶＡ和终末期屯力衰竭的风险更高同样，Ｐｉ］ＤＣＭ患户ＺｉＶ。：基者其他基因的基因型与表型关系的研究，也有部分结果如１因突变携带者发生终末期屯、衰的比例较高口］基因突变携带者更易发生；２２［］也律失常性疾病、、Ｃ７？扮公基因突变，如传导系统疾病、屯房颤动、屯室颤动；与患者ＬＶＥＦ值有关，Ｍ巧斯和公３基因突变的患者诊断ＤＣＭ的年龄更早，２３化扣做０基因突变的患者接受［］ＩＣＤ治疗的比例更高。正是因为遗传学技术的发展，才使得基因型作为ＤＣＭ表型的预测因子成为可能，并且是很必要的。目前，一、、ＶＥＦ和纽约屯屯力衰竭患者，尤其是ＩＤＣＭ患者：Ｌ，危险分层的预测因子单２４ｔ］、。功能分级是评估屯衰患者风险的主要因子，也是ＩＣＤ指征的衡量指标然而，ＬＶＥＦ既达不到很高的敏感性，特异性也不高，导致遗漏许多发生必源性巧死的ＬＶ邸＞３５％的患者，同时，接收ＩＣＤ植入的ＬＶＥＦ＜％％的患者发生恶性必律失常的比例亦很低脚。那么是否合并基因突变是影响扩张型屯、肌病的独立危险因素？检测患者的基因Ｗ寻找致病突变对于治疗扩张型屯、肌病患者有什么样的临床价值，这些都是亟待回答的问题。本文选取了我院收治的确诊为ＩＤＣＭ的患者１１５例，其中男性８７例，女性５２８例ＤＣＭ发病率为．：比率（２：１）。１１，男女３１１１，超过了前文所述的发病例ＩＤＣＭ患者经基因突变检测发现，其中２９例发生基因突变，突变率为２５．２２％。将突变组与未突变组的临床资料进行统计学分析发现：１、在两姐患者药物及器＞〇ＤＣＭ患者因屯、４例械治疗无差异（ｐ．〇５）的基础上，突变组衰多次入院者１（占４８．２８％），未突变组３９例（占４５．３５％），两者比较无统计学差异。而从两组生存曲线可见，中位随访３年后突变组患者有较差预后的趋势，但两组之间差异未达到统计学意义，这可能与我们的统计方法和样本量较小有关，因为把所有１６ 一。与我们研究突变类型结合在起分析，可能会中和或稀释部分突变的预后价值口ｇＷ好５Ｍｍ７ｅｒｌｏＭ对肌小节蛋白编码基因（，，结果相似，，Ｍ等研究发现ＭＫ公ＰＧ，ＪＡＷ了２和ｍｏ突变分析发现，突变携带者和未携带者长期预后无突变组预后较未突变组差。不５０，显著性差券，但是在岁Ｗ上的亚组之间对比Ｐ＾、＇、－、心、恶性Ｌ律ａｅｎｄｏｎｃｋＺｗａｒｔｓＫ，全因死亡脏移植．Ｙ等研究表明同的是，Ｓｐ，失常等终点事件的发生率在基因突变组略高，差异有统计学差异在他们的研究中收集了４１８例ＤＣＭ患者，其中８２例携带突变基因，突变基因的种类主要是、ＤＭＤ、５Ａ、ＰＬＮ７、ＤＥＳ、ＴＮＮＴ２、ＴＰＭ１ＤＭＰＫ、ＳＣＮ、ＬＭＮＡ，此外还有ＭＹＨＳＧＣＢ、及ＴＮＮＩ３。大样本的数据、根据具体基因类型的分类方法，可能是更适还需要后续研巧。２、两沮合的研究基因型和表型之间的方法，在国人中的关系－，与未发生患者邸、ＬＶＤＤ、ＩＶＳＴＤ及Ｑ艮ＳＴ夹角等参数无统计学差异，表明一３步扩大、基因突变的ＤＣＭ患者相比；两姐，基因突变并未使患者的也腔进ＤＣＭ患者相比，，患者症状首发年龄无统计学差择，表明与未发生基因突变的２８［Ａ］巧例ＤＣＭ患者中基因突变并未使也衰症状提前出现。Ｐｅｒｒ〇ｔ等研巧：发现，、２患者有屯衰的临床表现，表化有１例发生基因突变，其中口例发生基因突变的也腔逐渐増大的患者早期可能不会出现也衰症状，随着年龄的增长、也脏收缩功能的下降，会逐步出现＇。衰的临床表现。拉ｍｕｒａ脚等解释，也衰症状出现的时Ｐｑ间与突变基因的类型及患者的性别、年龄、生活方式均有关，与ＯｓｔｅｒｚｉｅｌＫｊ一ｃＮａ也衰症状出现较ｌｌＥＭ刖等指出，ＰＬＮ基因突变的患者等观点致。正如Ｍｙ早并伴随致死性的也律失常，ｔｉｎ基因突变导致的左室功能下降在男性患者尤甚。１７ 结论一综上所述，携带突变和未携带突变的ＩＤＣＭ患者的首发症状年龄等般资料ＬＶＥＦ－、ＬＶＤＤ、ＱＲＳＴ夹，，角等辅助检查结果药物和器械治疗治疗情况无统计学差异，突变組患者生存率有降低的趋势，但未达到统计学意义，可能与我们样本量较小和混合的统计学方法有关。１８ 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［１５］高磊．．，何国平扩张型也肌病相关基因的研究与进展［Ｊ］中国临床康２００６－复，１０（４４）：１１８１２０，１６．ＢｕｒｋｅｔＥＬＨｅｒｓｈｂｅｒｅｒＲＥｉｃａｌａｎｄｅｎｅｔｉｃｉｓｓｕｅｓｉｎｆａｍｉｌｉａｌ出ｌａｔｅｄ］．Ｃｌｉｎ［，ｇｇｏ—ｃａｒｄｉｏｍｙｐａｔｈｙ机ＪＡｍＣｏｌｌＣａｒｄｉｏｌ，２００５，４５（１：９６９９８１）１７．ＡｂｅｌｍａｎｎＷＨＬｏｒｂｅ＂ＢＨ．ＴｈｅｃｈａｌｌｅｎｅｏｆｃａｒｄｉｏｍｏａｔｈＪ？ＪＡｍＣｏｌｌ［］，ｇｙｐｙ［］ａｒｄｉｏｌ－Ｃ１９８９巧：１２０９１２２３，，（巧［１８．ＳｃｈｍｉｔＪＰＫａｍｉｓａｏＭＡｓａｈｉＭ．Ｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍａｔｈａｎｄｈｅａｒｔｆａｉｌｕｒｅ］，ｇ，ｙｏｐｙｍｕ－ｃａｕｄｂａｔａｔｉｏｎｉｎｈｏｓｈｏｌａｍｂａｎ：ｓｅｙ饥？ＳＣＩＥＮＣＥ２００３２９９５６１１１４１０１４１３ｐｐ，，（）１９．ＰａｒｋｓＳＢＫｕｓｈｎｅｒＪＤＮａｕｍａｎＤｅｔ＾＾／．ＬａｍｉｎＡ／Ｃｍｕｔａｔｉｏｎａｎａｌｓｉｓｉｎａ［］，，，ｙｃｏｈｏｒｔｏｆ３２４ｕｎｒｅｌａｔｅｄａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｉｄｉｏａｔｈｉｃｏｒｆａｍｉｌｉａｌｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｏａｔｈ［Ｊ］．ｐｐｙｐｙ無ａ／ｔＪ２００８１５６１：１６＾１６９，，（）０ｓ－？ｖａｎＲｉｉｎｅｉｉｌＡＮａｎｎｅｎｂｅｒＡＡｒｂｕｓｔｉｎｉＥｅｔａｌＧｅｎｄｅｒｓｅｃｉｆｉｃ口，ｇＥ］ｊｇ，，ｐｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｍａｏｒｃａｒｄｉａｃｅｖｅｎｔｓａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｉｎｌａｍｉｎＡ／Ｃｍｕｔａｔｉｏｎｊｙｃａｒｒｓｔ－ｉｅｒ？疏尸Ｊ無ｗ凡２０１３１５４：３７６３８４阴巧，（）－ｖａｎＲ［２１］．ｖａｎＳｐａｅｎｄｏｎｃｋＺｗａｒｔｓＫＹｉｓｉｎｅｎｌＡＷｖａｎｄｅｎＢｅｒ，ｊｇ，ｇａ／．Ｇｅｎｅｔｉｃａｎａｌｙｓｉｓｉｎ４１８ｉｎｄｅｘａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｉｄｉｏｐａｔｈｉｃｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｏａｔｈ：ｐｙｐｙ，ｏｖｅｒｖ－ｉｅｗｏｆ１０ｅａｒｓｅｘｅｒｉｅｎｃｅＪ．風無口仍７７２０１３１５６：於８６３６，ｙｐ［］，（）口２］．ＭｃＮａｉｒＷＰ，ＳｉｎａｇｒａＧ，ＴａｙｌｏｒＭＲ处幻／．ＳＣＮ５Ａｍｕｔａｔｉｏｎｓａｓｓｏｃｉａｔｅｗｉｔｈｊａｒｒｈｍｃｅｄｃａｒｄ－ｙｔｈｉ出ｌａｔｉｏｍｏａｔｈａｎｄｃｏｍｍｏｎｌｌｏｃａｌｉｚｅｔｏｔｈｅｖｏｌｔａｅｓｅｎｓｉｎｙｐｙｙｇｇｍｅｃｈａｎ－ｉｓｍ［Ｊ］．Ｃｏ／／Ｃ幻ｎ／／ｏ／２０１１５７２１：２１６０２化８，，（）口３．ＨａａｓＪＦｒｅｓｅＫＳＰｅｉｌＢｅｔａｌＡｔｌａｓｏｆｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｅｎｅｔｉｃｓｏｆｈｕｍａｎｄｉｌａｔｅｄ］，，，ｇｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ［ＤＢ／ＯＬ］．ＥｕｒＨｅａｒｔＪ２０１４Ａｕ２７，ｇ２４．ＧｏｌｄｂｅｒｅｒＪＪＳｕｂａｃｉｕｓＨＰａｔｅｌＴｅｔａ／．Ｓｕｄｄｅｎｃａｒｄｉａｃｄｅａｔｈｒｉｓｋｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ［］ｇ，，，ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｎｏｎｉｓｃｈｅｍｉｃｄｉｌａｔｅｄｃａｒｄｉｏｍｏｐａｔｈＪ．／ＡｍＣｏｌｌＣａｒｄｉ〇ｌ２０ｌ４ｙｙ［］，－巧６３（１８）：１８７９８９ｐｙ．ＡｄａｂａｇＳ，ＳｍｉｔｈＬＧ，ＡｎａｎｄＩＳ，Ｗ幻／．Ｓｕｄｄｅｎｃａｒｄｉａｃｄｅａｔｈｉｎｈｅａｒｔｆａｉｌｕｒｅｗ－ｐａｔｉｅｎｔｓｉ化ｒｅｓｅｒｖｅｄｅｊｅｃｔｉｏ打ｆｒａｃｔｉｏ打幻ｎ／Ｆ仍７，２０１２１８１０：７４９八４ｐ，（；）［２６］．ＭｅｒｌｏＭ，ＳｉｎａｇｒａＧ，ＣａｍｉｅｌＥ，ｅｔａｌ．ＰｏｏｒＰｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆＲａｒｅＳａｒｃｏｍｅｒｉｃＧｅｎｅＶａｒｉａｎｔｓｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＤｉｌａｔｅｄＣａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ．ＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ阴Ｓｃ＊ｉｅｎｃｅ２０１３６９６：４２４４２８，，（）２０ 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中英文缩略词对照表英文缩写英文中文ＩＤＣＭＩｄｉｏｐａｔｈｉｃＤｉｌａｔｅｄＣａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ特发性扩张型也肌病ＬＶＥＦＬｅｆｔＶｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｅｃｔｉｏｎＦｒａｃｔｉｏｎ左室射血分巧ＬＶＥＤＤＬｅ托ＶｅｎｔｏｉｃｕｌａｒＤｉａｓｔｏｌｉｃＤｉａｍｅｔｅｒｓ左室舒张末期内径ＤＨＰＬＣＤｅｎａｔｕｒｉｎｇＨｉｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ变性高效液相色谱ｇＬｉｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｒａｈｑｇｐｙＩＶＳＴＤＩｎｔｅｒｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒＳｅｐｔａｌＴｈｉｃｋｎｅｓｓ室间隔厚度ＬＡＤＬｅｆｔＡｔｒｉａｌａｍｅｔｅｒ左也房内径Ｄｉ、ＣＨＤＣｏｒｏｎａｒＨｅａ＇ｙｒｔＤｉｓｅａｓｅ冠巳病ＨＢＰＨｉｇｈＢｌｏｏｄＰｒｅｓｓｕｒｅ高血压病ＮＳＶＴＮｏｎｓｕｓｔａｉｎｅｄＶｅｎｔｒｉｃｕｌａｒＴａｃｈｙｃａｒｄｉａ非持续性室性也动过速２２ 致谢一硕±生活晃而过，也中倍感充实，当我写完，回首走过的岁月一这篇毕业论文时，感慨良多。，有种如释重负的感觉首先诚攀的感谢我的导师徐标教授。徐老师渊博的专业知识，严谨的治学态度，不仅使我树立了，精益求精的工作作风对我影响深远远大的学术目标，还使我明白了许多待人接、掌握了基本的研巧方法物与为人处世的道理、工。Ｈ年里，徐老师在学习作及生活等方面都给予我无微不至的关怀和悉也的指导。在此，谨向导师表示崇高的敬意和衷也的感谢！、本论文的顺利完成，离不开各位老师朋友、同学的关也和帮助，在此要特别感谢张新林师兄，感谢他们给予的大力支持！、谢峻师兄感谢鼓楼医院全体老师在我的临床实践和课题开展期间对我的细也指导和帮助！感谢我的师兄、生活的关也！、师姐、师弟、师妹Ｈ年来对我学习感谢参加论文评审和答辩的各位专家！、教授最后，向我的父亲、母亲、弟弟致谢，感谢他们对我的理解和支持！巧 硕±硏究生期间发表的文章一１、《妊娠合并感染性也内膜炎例》待发表２、《基因突变对特发性扩张型也肌病患者临床发病及预后的影响》待发表２４ 附件二《学位论文出版授权韦》本人完全同意《中国优秀博硕古学位论文全文数据库出版章程》下简称＂＂＇‘＂章程），愿意将本人的学位论文提交中国学术期刊（光盘版）电子杂志社在《中国博±学位论文全文数据库》、《中国优秀硕±学位论文全文数据库》中全文发表。《中国博±学位论文全文数据库》、《中国优秀硕±学俭论文全文数据库》可电子、网络及其他数字媒体形式公开出版，并同意编入《中国知识资源总库》，在《中国博硕±学位论文评价数据库》中使用和在互联网上传播，同意按＂＂章程规定享受相关权益。作者签名；射ｉ聲２０Ｋ年ｔ月）日＞论文题名身风吏４４心括旅避秦考佐鳥ｇ辞碱听产呼琴研究生学号所在院系Ｓ学位年度良每ｊｔ雌巧叫ｊ囚颇±邱颇±专业学位论文级别□博±□博±专业单位（请在方框内画钩）作者电话作者Ｅｍａｉｌ一第导师巧名ＬＶ＾、户嫁论涉密情况：不保密□保密，（口至月）保密期年月年日＾一页注：请将该授权书填写后装订在学位论文最后（南大封面）。