基于重链抗体的全氟辛酸免疫检测的研究

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1、申请上海交通大学硕士研究生学位论文基于重链抗体的全氟辛酸免疫检测的研究Developmentofimmunoassayforperfluorooctanoicacidbasedonheavy-chainantibody姓名：张星学号：1127119066导师：王艳教授专业：劳动卫生与环境卫生学学院：公共卫生学院上海交通大学医学院二零一五年四月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论义，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已

2、在文中明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：曰期：节少年曰ｙ学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可臥将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可［＾＾采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适巧本授权书。本学位论文属于／不保密＂＂（请在臥上方框内打Ｖ）学位论文作者签名：指导教师签名：曰期；却ｆ年去月曰曰期

3、；啤Ｊｒ月日上海交通大学硕士研究生学位论文基于重链抗体的全氟辛酸免疫检测的研究摘要全氟辛酸（Perfluorooctanoicacid,PFOA）是一种对人体有潜在健康危害的全氟化合物（PFCs）。PFOA具有疏水疏油的特性，20世纪大量生产使用，对生态系统和人类健康的影响已经引起人们的高度关注。现在，PFOA的检测主要依赖大型仪器，比如液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS），检测准确性高，检测限低，但是，这些方法有很大的局限性，仪器笨重，检测昂贵，通量低，不适于现场的快速高通量检测。本研究应用抗原抗体特异性结合的原理，制备一种针对PFOA的特异性抗体，用于PFOA的高通量

4、快速检测。我们应用碳二亚胺法，将PFOA与牛血清白蛋白BSA偶联，合成完全抗原，经SDS-PAGE电泳和离子色谱仪定性检测，证明完全抗原合成成功。用三硝基苯磺酸法法测定偶联比，计算得到偶联比为9。以此完全抗原作为包被抗原，用重链抗体文库进行筛选，得到7株阳性克隆，并对重链抗体基因进行修饰，利用原核生物蛋白表达系统进行蛋白表达，得到5个抗体蛋白，以间接竞争性ELISA方法对抗体蛋白进行活性鉴定，获得1个有活性的抗体，有望用于建立快速检测不同介质中PFOA的免疫学方法。关键词：PFOA，完全抗原，重链抗体，间接竞争性ELISA1上海交通大学硕士研究生学位论文Developmentofim

5、munoassayforperfluorooctanoicacidbasedonheavy-chainantibodyAbstractPerfluorooctanoicacid(PFOA)isakindofperfluorinatedcompounds(PFCs)whichhasthbeenusedwidelyinthe20centurybecauseofitshydrophobicityandlipophobicity.Recentlyitsimpactonecosystemandhumanhealthhasarousedpeople’sattention.Untilnow,mos

6、tmethodsofPFOAanalysisreliedonthelargeinstrumentswithhighaccuracyandlowdetectionlimit,e.g.,liquidchromatography–massspectrometry(LC-MS/MS).However,thesemethodswerenotsuitableforin-fieldfasttestduetosomelimitations,suchaslargemachine,highcostandlowthroughput.Inthisstudy,wedevelopedanimmunologica

7、lmethodforhigh-throughputdetectionofPFOAbasedonthespecificallybindingoftheantigenandtheantibody.Atfirst,aPFOA-BSAcompleteantigenwassynthesizedusingthecarbodiimidemethod.ThecombiningissucceedconfirmedbySDS-PAGEandionchromatographan