哮宁口服液对哮喘模型小鼠肠道菌群构成特征的影响研究

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1、（临床医学院）二0一八届硕士研究生学位论文哮宁口服液对哮喘模型小鼠肠道菌群构成特征的影响研究StudyontheStructureofIntestinalFloraofmicewithasthmatreatedwithXiaoningoralliquid研究生姓名：罗雅婷指导教师：赵琼教授学科专业：中医儿科学二○一八年五月学位论文哮宁口服液对哮喘模型小鼠肠道菌群构成特征的影响研究罗雅婷指导教师姓名：赵琼教授申请学位级别：硕士专业名称：中医儿科学论文提交时间：2018年4月论文答辩时间：2018年5月课题来源：国家自然

2、科学基金青年科学基金项目（No.81403435）二○一八年五月成都中医药大学2018届硕士学位论文中文摘要目的：基于“肺与大肠相表里”理论，采用细菌16srDNA序列分析研究哮宁口服液对哮喘小鼠肠道菌群构成特征的影响。为更深层次揭示该理论，进一步探讨哮宁口服液治疗小儿哮喘的作用机制，促进临床疗效的提高提供理论参考和实验依据。方法：60只BALB/C雌性小鼠随机分为空白组15只、造模组45只，采用卵清白蛋白与氢氧化铝致敏后随机分为模型组、阳性组、中药组，每组15只，每次雾化激发前1h，空白组与模型组予生理盐水灌胃，阳

3、性组予普米克令舒雾化，中药组予哮宁口服液灌胃。观察小鼠一般症状及体征。给药7d后，（1）取各组小鼠右肺组织，制作病理切片，光镜下观察各组小鼠肺组织病理改变情况。（2）对小鼠结肠内容物的16SrDNA基因V3-V4可变区片段进行PCR扩增、荧光定量，在IlluminaMiseq测序平台进行文库构建、测序及分类学分析。结果：（1）模型组、阳性组、中药组小鼠均不同程度地出现搔抓皮肤，呼吸加深加快，缩头弓背，毛发竖立等表现。给药治疗7d后，阳性组、中药组小鼠上述症状、体征基本消失。病理形态学显示:模型组气管壁增厚、分泌物、肺

4、泡破坏减少及炎性浸润最严重，中药组、阳性组炎性细胞浸润、分泌物均有所减轻。（2）Alpha多样性指数分析显示，模型组Chao值高于空白组（P＜0.05），造模的三个组的Shannon值均高于空白组（P＜0.05），阳性组、中药组Simpson值与空白组相比有所减少（P＜0.01）。PCA、PCoA、NMDS分析均显示空白组与余下三组有一定分开趋势。层次聚类分析及Unifrac聚类分析显示部分中药组与空白组距离较近。中药组的变形菌门较其他三组明显减少（P＜0.01），葡萄球菌与空白组相比明显减少（P＜0.01），瘤胃球

5、菌的几个菌属与空白组相比有增加（P＜0.05）。阳性组、中药组的肠杆菌科埃希氏杆菌属较空白组减少（P＜0.01）。中药组的Mucispirillum菌属较其他三组明显减少（P＜0.01）。哮喘小鼠肠道中出现了较多致病菌，以模型组最显著，其次为阳性组、中药组，两组中虽有少许致病菌但仍以正常菌群为主。结论：（1）哮宁口服液能改善哮喘模型小鼠的症状及气道炎症；（2）哮宁口服液对肠道菌群平衡具有良性调控作用，该方药可能通过纠正菌群紊乱，影响肠道1成都中医药大学2018届硕士学位论文菌群结构，进而影响体内免疫平衡达到治疗哮喘的

6、作用。关键词：哮喘；哮宁口服液；肠道菌群；16srDNA；IlluminaMiseq测序2成都中医药大学2018届硕士学位论文AbstractObjective:Basedonthetheoryof"lungandintestine",bacterial16srDNAsequenceanalysiswasusedtostudytheeffectoftheXiaoningoralliquidontheintestinalfloraofasthmaticmice.Inordertofurtherrevealthetheo

7、ry,wefurtherexplorethemechanismofthetreatmentofasthmabytheXiaoningoralliquid,andprovidetheoreticalreferenceandexperimentalbasisfortheimprovementofclinicalefficacy.Methods:The60BALB/Cfemalemicewererandomlydividedintoblankgroup15,andthemodelgroupwas45,whichwasran

8、domlydividedintomodelgroup,positivegroupandtraditionalChinesemedicinegroupbyusingeggwhiteproteinandaluminumhydroxide.1hbeforeeveryatomizationexcitation,blankgroupandmodelgro