AWRK6对内毒素诱发的小鼠急性肝损伤的修复作用与机制研究

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1、分类号：单位代码：１０１４０密级：公开学号４０３１５３１８６５：ＬＩＡＯＮＩＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕士学位论文ＴＨＥＳＩＳＦＯＲＭＡＳＴＥＲＤＥＧＲＥＥＡＷＲＫ６对内毒素诱发的小鼠急性肝损伤的修复作用与机制研究中文题目：ＴｈｅｒｏｔｅｃｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＡＷＲＫ６ｏｎａｃｕｔｅｐ：ｈｅｐａｔｉｃｉｎｕｒｉｎｄｕｃｅｄｂｅｎｄｏｔｏｘｉｎ英文题目ｊｙｙ论文作者：邰思佳指王秋雨教授导教师：生物化学与分子生物学专业：完成时二○一八年五月

2、间：申请辽宁大学硕士学位论文AWRK6对内毒素诱发的小鼠急性肝损伤的修复作用与机制研究TheprotectioneffectandmechanismofAWRK6onacutehepaticinjuryinducedbyendotoxin作者：邰思佳指导教师：王秋雨教授专业：生物化学与分子生物学答辩日期：2018年5月24日二○一八年五月·中国辽宁摘要摘要肝脏作为清除内毒素的主要脏器，在败血症和休克的发生过程中最易受损[1]。急性肝损伤是一种多种原因导致的肝功能快速丧失为主的临床综合征，在败血症发生的休克过程中常有发生，其具有发病、急病死

3、率高的特点，近几年来呈逐年上升的趋势。目前并无特效疗法治疗急性肝损伤，临床多采用紧急肝移植来进行救治。AWRK6（SWVGKHGKKFGLKKHKKH）是一种新型抗菌肽，是由本实验室根据东北林蛙表皮抗菌肽Dybowskin-2CDYa优化改造得到的。前期研究表明，AWRK6对内毒素导致的急性肝损伤具有一定的保护作用。肝脏组织切片HE染色显示，AWRK6能够保护肝脏免受内毒素导致的免疫损伤，本研究在前期研究的基础上进一步探讨了AWRK6在内毒素诱发的小鼠急性肝损伤中的保护作用，并对其机制进行了初步研究。本研究将昆明小鼠分为四组，分别腹腔注射生

4、理盐水、LPS（50mg/kg）、LPS+AWRK6（50mg/kg+10mg/kg）、LPS+PMB（50mg/kg+2.6mg/kg）。利用化学检测试剂盒检测了AWRK6对内毒素致急性肝损伤的肝脏组织中谷丙转氨酶、诱导型一氧化氮合酶和超氧化物歧化酶合成的影响，评价AWRK6对急性肝损伤的修复作用。采用免疫印迹技术在细胞及组织水平研究了AWRK6对凋亡相关蛋白Bcl-2，Bax，Caspase-9表达的影响，分析了AWRK6对内毒素诱发的小鼠急性肝损伤细胞凋亡的抑制作用。进一步利用蛋白质免疫印迹技术研究AWRK6对增殖相关蛋白b-Raf，

5、MEK1/2，ERK1/2表达的影响，探究了AWRK6对小鼠内毒素致急性肝损伤肝组织增殖作用，并对AWRK6对内毒素致急性肝损伤保护作用的机制进行了分析。结果表明，AWRK6能够极其显著降低肝组织谷丙转氨酶和诱导型一氧化氮合酶的活力（P<0.001），极其显著升高超氧化物歧化酶的活力（P<0.001），从而抑制肝损伤的发生。小鼠经AWRK6处理24小时后，Bcl-2的表达与LPS组相比极显著上调（P<0.01），Bax和Caspase-9的表达极显著下调（P<0.01）；同时，b-Raf和ERK1/2的表达与LPS组相比极显著上调（P<0.

6、01），MEK1/2的表达极其显著上调（P<0.001），且增殖相关蛋白的表达水平与空白对照组没I摘要有差异，结果说明AWRK6具有抑制肝细胞凋亡和促进肝细胞增殖的作用。小鼠处理96小时的结果优于处理24小时的结果。本研究结果初步说明了AWRK6对于内毒素诱发的急性肝损伤具有保护和修复的作用。AWRK6可通过下调凋亡促进蛋白Bax和Caspase-9的表达，上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达抑制细胞凋亡；通过上调增殖相关蛋白b-Raf、MEK1/2和ERK1/2的表达促进细胞增殖。本研究结果为将AWRK6开发成为抗内毒素新型护肝药物奠定了坚实

7、的实验基础和理论依据。关键词：AWRK6，急性肝损伤，细胞凋亡，细胞增殖，机制IIABSTRACTABSTRACTTheliverasthemainorgantoremoveendotoxinismostvulnerabletosepsisand[1].shockAcuteliverinjuryisaclinicalsyndromemainlycausedbyrapidlossofliverfunctioncausedbymultiplecauses.Itoftenoccursintheshockprocessofsepsis.Ithast

8、hecharacteristicsofhighincidenceofmorbidityandacutemortality,andhasbeenincreasingyearbyye