t-2毒素zen对kisspeptinsgpr54信号途径介导的gt1-7细胞分泌gnrh的毒性效应风险评估

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1、■＾＾■１戀－Ｔ－２毒素ＺＥＮ旺ｓｓｅｔｉｎｓ／ＧＰＲ５４信号途径介导的ＧＴｌ７／对ｐｐ细胞分泌ＧｎＲＨ的毒性效应风险评估－化ＴｏｘｉｏｆｉｃｅｆｅｃｔｓｏｆＴ２ｔｏｘｉｎ／ＺＥＮｏｎｅｓｅｃｒｅｔｎｏＧｎＲＨｍｅｄｉａｔｅｄｂＫｉｓｓｅｔｉｎｓ／ＧＰＲ５４ｓｉｎａｌｉｎａｔｈｗａｉｎｙｐｐｇｇｐｙＧＴ－１７ｃｅｌｌｌｉｎｅａｎｄｉｔｓｒｉｓｋａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ作者姓名：刘羽欣专业名称：营养与食品卫生学指导教师：刘經教授学位类别：医学博：ｔ

2、论文答辩日期：２０１５年１１月２８日授予学位日期：年月日：论文评阅人：答辩委员会组成姓名职称Ｘ作单位姓名职称工作单位盲审专家正高级复旦大学主席：王丽教授东北师范大学盲审专家正高级中国疾病预防控制中必委员：層荣良研究员军事睦学科学院军事兽医研究所盲审专家正高级武汉火学李娟教授吉林大学育审专家正高级华中科技大学刘姐教授吉林大学盲审专家正高级中山火学谢林教授吉林火学未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和

3、个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出＾但纯用业性使用学术性使租者著作权的商、改编等有碍作。不。否则，应承担侵权的法律责任在此限）±学位论文原创性声明吉林大学博重，是本人在指导教师的指导声明：所呈交学位论文本人郑经立进成果。除文中己注明引用的内容下，独行研究工作所取得的过的作品成或集体已经发表或撰写夕ｂ本论文不包含任何其他个人，均己在文中Ｗ明确贡献的个人和集体。对本文的研究做出重要果承。的法律结果由本人担。本人完全意识到本声明方式标明签名；学位论文作

4、者王王年／之ｆ日日期；知月中文摘要T-2毒素/ZEN对Kisspeptins/GPR54信号途径介导的GT1-7细胞分泌GnRH的毒性效应风险评估目的：下丘脑-垂体-性腺轴（Hypothalamic-Pituitary-Gonadalaxis，HPGA）是生殖内分泌信息传递的重要神经网络，在调控青春期启动中处于核心地位，而促进HPGA激活和性成熟的关键是促性腺激素释放激素（Gonadotropin-releasingHormone，GnRH）的脉冲式释放，并且Kisspeptins及其受体GPR54是调节HPGA活化和G

5、nRH释放的重要组件。目前，有少量流行病学调查资料提示，某些镰刀菌毒素污染可能促使HPGA激活提前，导致GnRH脉冲释放的时间提前或释放量增加，进而破坏机体正常的青春期启动和性发育过程，引发中枢性性早熟（CentralPrecociousPuberty，CPP）。然而，对于镰刀菌毒素引起CPP的证据和是否通过Kisspeptins/GPR54信号通路发挥作用尚不十分清楚。另外，由于下丘脑中GnRH神经元分布比较分散，很难精准定位，不利于具体信号通路的阐明，因此，选用合适的体外模型和合理的镰刀菌毒素污染模式阐述中枢性性早熟的发

6、生及可能机制十分必要，同时，构建诱发CPP发生的AOP工作框架，也将为霉菌毒素的生殖毒性风险及食品安全评价提供数据支持，并开拓霉菌毒素风险评估新思路。方法：本研究针对HPGA启动的中枢环节，即GnRH的释放，利用永生化的下丘脑神经元GT1-7细胞模型，选择粮食污染中常见共存污染的霉菌毒素——T-2毒素和玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN），采用MTT法评价T-2毒素和ZEN单独或联合暴露对GT1-7细胞的毒性作用后，选择相应的非致死剂量（T-2毒素剂量为0，0.01，0.05，0.1，0.5，1ng/ml；ZEN剂

7、量为0，2.5，5，7.5，10μg/ml）分别单独或联合（正交组合）染毒GT1-7细胞，经过3h和6h的培养后，用放射免疫法检测细胞培养液中的GnRH浓度，同时，通过westernblot检测Kisspeptins/GPR54信号通路上相关蛋白的表达情况，用SPSS17.0软件统计分析所得数据。制定检索策略，分析已有的文献证据，构建诱发CPP发生的AOP框I架并对其进行评价。结果：通过拟合细胞的相对存活率曲线得出，IC50T-2为12.73ng/ml，IC50ZEN为30.67μg/ml，且T-2毒素的浓度在1ng/ml以

8、下、ZEN的浓度在10μg/ml以下时，GT1-7细胞的相对存活率在80%以上，同时，采用BenchmarkDose法计算得出BMDLT-2为0.57ng/ml，BMDLZEN为7.72μg/ml，因此，选用T-2毒素0，0.01，0.05，0.1，0.5，1ng/ml六个剂量和ZEN0，