酶联免疫法测定狂犬病疫苗抗原方法研究

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1、中图分类号：UDC分类号：酶联免疫法测定狂犬病疫苗抗原方法研究于红艳2015年12月酶联免疫法测定狂犬病疫苗抗原方法研究作者姓名于红艳学院名称生命学院指导教师吕雪飞答辩委员会主席戴荣继申请学位工学硕士学科专业生物工程学位授予单位北京理工大学论文答辩日期2015年12月IStudyonthePotencyTestbytheELISAforRabiesVaccineCandidateName：HongYanYuSchoolorDepartment:SchoolofLifeScienceFacultyMentor:Prof.XueFeiLvChair,ThesisCom

2、mittee：Prof.RongJiDaiDegreeApplied:MasterofEngineeringMajor：BiotechnologyDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence：December，2015II研究成果声明本人郑重声明：所提交的学位论文是我本人在指导教师的指导下进行的研究工作获得的研究成果。尽我所知，文中除特别标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京理工大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的合作者对此研究工

3、作所做的任何贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。特此申明。签名：日期：IV北京理工大学硕士学位论文摘要人用狂犬病疫苗在产品批放行前需要对成品的各项指标进行测定。其中的有效性指标--效价的测定，目前采用的是NIH动物体内法。该方法存在许多缺陷：不易操作、可重复性差、试验周期长、使用大量实验动物不符合动物伦理3R原则等。一些国际组织例如世界卫生组织（WHO）、欧洲替代方法论证中心（ECVAM）等，也一直提倡研究体外相对效力实验代替动物体内法，说明动物体内法逐渐被替代的趋势。本文研究用体外相对效力实验，代替人用狂犬病疫苗批放行阶段效价测定动物体内法的可行性。

4、通过对两种方法实验原理和检测数据的对比分析，说明两种检测方法呈良好的正相关趋势良；用ELISA体外相对效力实验检测疫苗的抗原含量，可以反映疫苗的保护效果，而且该检测方法更简便快捷、易操作，受影响因素少，重复性更好，检测结果更准确，检测周期大大缩短，不采用实验动物，符合3R原则。但要在产品批放行阶段代替动物体内法，还需要做很多工作，同时需要政府监管部门的大力支持，需要国际权威机构之间相互协作，共同努力，才能统一标准，实现替代。实施GMP管理后，保证了产品批间一致性和稳定性，在中间产品及批放行阶段用ELISA方法测定每批产品的抗原含量，证明批间稳定性，积累更多的数据，

5、为以后方法的替代提供数据支持。关键词：体外相对效力实验；人用狂犬病疫苗；3R原则；ELISA方法；NIH动物体内法V北京理工大学硕士学位论文AbstractTherabiesvaccinedevelopmentandmanufactureforhumanhasbeenreliedonNIHinvivoanimalmethodtoensurerabiesvaccine’sbiologicalefficacyandbatchconsistencyfordecades.EventhoughtNIHinvivomethodiswellknownforresultvaria

6、tion,lowrepeatability,challengingprocedure,longassayturnaroundtime,highcostandsignificantconsiderationofanimalcrudityfromhumanepointofview,NIHanimalmethodisstillrequiredasfinalbatchreleasequalitycontrolbiologicalactivitytestforrabiesvaccineforhuman.Asageneralprinciple,potencyassayforr

7、abiesvaccinedevelopmentisdesignedtomeasuretheabilityofthevaccinetoprotecttheanimal(human)againstsubsequentchallengewiththeactivecomponentresponsibleforthepathogenicity(ATLA26,1998).Thevaccineimmunogenicity(bioactivityofstimulation)couldbecriticallydeterminedbythekeyantigencomponentint

8、hevir