辽宁省仔猪病毒性腹泻病的病原调查及pedv的遗传变异分析

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1、分类号：S855.3单位代码：10193密级：公开编号：2012625硕士学位论文辽宁省仔猪病毒性腹泻病的病原调查及PEDV的遗传变异分析PathogenicInvestigationofViralDiarrheaofPigletofLiaoningProvinceandGeneticVariationofPEDV作者姓名：王娜学位类别：农学硕士专业名称：预防兽医学研究方向：动物疫病发病机制与防治指导教师：周铁忠教授所在学院：动物科学技术学院2015年5月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得

2、的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版

3、权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要引起仔猪传染性腹泻病的病原主要有猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪

4、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(RV)，这三种病原的传染途径和发病过程相类似，具有发病急、传播速度快，哺乳仔猪感染率和死亡率都较高的特点，临床诊断和控制难度较大。近年来辽宁省哺乳仔猪传染性病毒性腹泻病发生较为严重，给养猪业造成了巨大的经济损失。为查明辽宁省仔猪病毒性腹泻病主要病原的种类，明确主要流行病原的分布情况，从而制定有针对性的防控措施，开展了辽宁省仔猪病毒性腹泻的病原调查及PEDV的遗传变异分析。1.仔猪病毒性腹泻的病原调查采用RT-PCR方法对2013年4月份至次年3月份辽宁省9个市采集的335份腹泻病料进行PED

5、V、TGEV、RV的检测，根据采集病料的时间和地点进行统计分析。结果显示阳性的病毒主要为PEDV和TGEV，其阳性率分别为38.2%和15.2%，二者在9个市均有分布。说明辽宁省仔猪病毒性腹泻的主要病原是PEDV，在辽宁省感染分布广泛，污染程度较高，并且全年持续存在。2.猪流行性腹泻LN-J毒株的分离鉴定临床调查发现已注射PEDV疫苗的猪场仍有本病发生，为查明辽宁地区PEDV流行毒株的来源及变异情况。采集辽宁某地区疑似PED腹泻仔猪的肠内容物，应用Vero细胞进行传代培养，分离到一株毒株，TCID-4.3050为10/0.1ml,通

6、过电镜观察该病毒为130nm左右的球形颗粒；通过RT-PCR鉴定，该病毒为RNA病毒，而且核酸片段大小与所设计的PEDV引物相同，经过核酸序列分析证明为PEDV，暂命名为PEDVLN-J毒株。3.猪流行性腹泻LN-J毒株S基因的遗传变异分析由于PEDVS基因编码的表面纤突糖蛋白具有抗原表位，S基因的变异可能引起该病毒抗原性和毒力的变化，因此，选择S基因进行遗传变异分析。设计了2对扩增S全基因的引物S1和S2，进行RT-PCR扩增，成功获得了和目的片段大小相符的条带，并构建了pUM-S1和pUM-S2重组质粒，测序后通过生物软件进行分

7、析、拼接，得到4161bp的全基因，利用DNAStar分析发现，PEDVLN-J毒株的S基因和其他许多地方毒株均有较高的同源性，构建系统进化树，发现该毒株与HB-2011-1、BJ-2001-2和CHGD-01亲缘关系较近。说明辽宁地区流行的PEDV属于输入性传播，但存在变异趋势。关键词:仔猪，病毒性腹泻，PEDV，S基因，变异分析IAbstractPigshavebeenfoundtocauseinfectiousdiarrheavirusweremainlyporcineepidemicdiarrheavirus(PEDV),p

8、orcinetransmissiblegastroenteritisvirus(TGEV)andporcinerotavirus(RV),thesethreepathogeninfectionandpathogenesispathwa