芦笋抗茎枯病突变体的离体筛选及抗性生理研究

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1、AGRICULTURALUNIVERSITYOFHEBEI硕士学位（毕业）论文芦笋抗茎枯病突变体的离体筛选及抗性生理研究学位申请人：李俊萍指导老师：乜兰春教授学科专业：蔬菜学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一五年六月六日独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得河jt:农业大牵或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作

2、的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：卞签字日期：年/月^曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解河北农业大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘-允许论文被查阅和借阅。本人授权河jt:农业大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）Y学位论文作者签名：导师签名：入签字曰期：十。年/月左曰签字曰期

3、：年6月f曰学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址:邮编:分类号：S644.6单位代码:10086密级：公开学号：2012239芦笋抗茎枯病突变体的离体筛选及抗性生理研究InvitroselectionofmutantstostemblightresistantandstudiesontheirresistancemechanisminasparagusofficinalisL.学位申请人：李俊萍指导老师：乜兰春教授学科专业：蔬菜学学位类别：农学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一

4、五年六月六日摘要芦笋（AsparagusofficinalisL.）又名石刁柏，是国际上公认的营养保健型高档蔬菜，具有很高的食用和药用价值，也是世界十大名菜之一，有“蔬菜之王”的美称。近年来，我国已成为芦笋第一出口大国，但是在我国芦笋种植区，由于茎枯病的不断发生，常导致芦笋成片绝收，已严重影响了我国芦笋的产量和质量。芦笋茎枯病是由天门冬拟茎点霉菌（Phmopsisasparagi(Sass.)Bubak）引起的一种真菌性病害。植物病原真菌在对寄主的侵染过程中代谢产生的毒素是与病程相关的一类重要的致

5、病因子，可以使寄主产生与病菌相同的毒害症状，目前利用毒素作为选择压力对植物离体组织进行筛选得到相应的抗性材料，已成为抗病性离体筛选中发展比较成熟且最成功的一个体系。本试验研究了芦笋茎段诱导愈伤组织的适宜条件，芦笋茎枯病病原菌适宜的产毒培养基和培养条件，以及毒素对芦笋愈伤组织抗性的诱导和毒素处理对芦笋愈伤组织内防御酶活性的影响，并将抗性愈伤组织诱导成苗后，对其进行抗病性鉴定，建立了芦笋抗茎枯病突变体的离体筛选体系。主要研究结果如下：1.‘阿波罗’、‘冠军’和‘NJ987’3个芦笋品种茎段诱导愈伤组织

6、的最适条件为MS+1.5mg/L6-BA+1.5~2.0mg/LNAA。2.通过病菌的常规分离法和梯度稀释法相结合，从田间病株上分离出具有芦笋茎枯病菌典型特征的病菌，经分子生物学鉴定，为芦笋茎枯病菌Phmopsisasparagi；并筛选出其最适的产毒培养条件：在pH为7的Fries培养基中27℃黑暗条件下120rpm连续振荡培养12d，此条件下产生的毒素对胚根的抑制率可达97.69%；通过针刺接种法，将病菌产生的毒素提取液接种到田间的芦笋幼茎上，使幼茎呈现出芦笋茎枯病田间发病的典型症状，证明了芦

7、笋茎枯病菌毒素具有致病力。3.3个品种愈伤组织抗性诱导的适宜毒素浓度为毒素液的30%~40%；经过毒素处理后存活的愈伤组织对茎枯病菌毒素的抗性增强。4.毒素处理后3个品种愈伤组织的SOD、POD、CAT、PAL和PPO5种酶的活性呈现先上升后下降的趋势，只是上升的程度和达到峰值的时间不同，且均始终高于相应的对照，说明毒素处理可以诱导芦笋愈伤组织的抗病性，5种防御酶相互协调合作，共同提高了芦笋愈伤组织材料对茎枯病菌毒素的抗性。5.经抗病性鉴定，3个品种的变异系苗在接种茎枯病菌悬浮液以后发病时间均的晚

8、于对照，发病程度也显著低于对照，表现出对Phomopsisasparagi的抗性。关键词：芦笋茎枯病；病菌毒素；愈伤组织；抗性诱导；抗性生理.InvitroselectionofmutantstostemblightresistantandstudiesontheirresistancemechanisminasparagusofficinalisL.Author:LiJun-pingMajor:OlericultureSupervisor:NieLan-chunAbstractA