公猪精液规化采集与稀释

公猪精液规化采集与稀释

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1、公猪采精公猪采精与稀释操作规程-----四川安佑技术服务部(2012-09-14)1、采精与精液处理流程(讲究卫生,控制温度)(1)采精过程流程1、 进入实验室后清洁双手2、 准备稀释液,并将稀释液放入35℃水浴锅中升温3、 打开显微镜上的加热板控制开关,设定温度到38℃4、 安装集精杯(预热到37℃),准备其它采精用品,放入壁厨5、 将公猪赶入采精室,关上栅栏,清洁其体表6、排出包皮液用0.1%KMnO4溶液清洗其腹部及包皮,再用清水洗净,抹干。7、 戴上双层手套,诱导公猪爬跨假母猪8、 锁定并拉出阴茎9、 待排出

2、部分清亮液体后,开始收集精液10、将集精杯放入壁厨11、将公猪赶回圈内(2)精液处理操作流程1.将一预温后的烧杯或塑料杯放在电子秤上,打开电子秤,当显示为零时,将装精液的食品袋从集精杯中取出放入杯中,显示读数为精液的重量。2.将放精液的烧杯轻轻摇匀精液后,放入35℃的水浴锅中与稀释液等温。3.立即用取样器取精液10~25微升左右,滴在载物台上预热的载玻片上,盖上盖玻片,估测活力。精子活力大于0.6,则可用于下一步的处理。4.另取1毫升精液放入加有10毫升生理盐水的精子密度杯中,读出读数后,在查对表上查到精子密度值。5

3、.计算精液可分装的份数和最终的精液体积或重量。6.将大烧杯放在电子秤上,除皮,然后再将精液袋放入其中,并将精液袋上口翻在杯沿外,将装稀释液的三角瓶从水浴锅中取出,擦去底部水分,将稀释液加入大烧杯中,直到达到计算的最终重量,轻轻摇动或用玻璃棒搅拌精液使其混合。7、精液稀释后,检查精液活力,若无明显下降,开始分装。23公猪采精8.将精液按规定重量分装于各个精液瓶(袋)中,排出空气后封口,进行精液标记,置22℃-25℃的室温1小时后(或用几层毛巾包被好后),降温到20℃左右时直接放置17℃冰箱中。9.清洗各种容器并放于消毒

4、柜中干燥消毒。2、稀释液的配制过程 2.1配制过程以1000毫升BTS稀释液为例,可用任一方法:①经过清洗干燥消毒的三角瓶,将一袋BTS稀释粉(50克)全部加入瓶中,用量筒量取双蒸馏水1000毫升,加入三角瓶中。盖上盖子或用稀释粉袋套在三角瓶口上,封紧摇动,使稀释粉完全溶解。或放在磁力搅拌器上,搅拌加速溶解。取下盖子,放入35℃的水浴锅中预温。稀释液用过后,三角瓶应用蒸馏水冲洗,空干水分,然后将三角瓶、量筒用牛皮纸封口,放入80~120℃的消毒柜或干燥箱中烘干。②将两个食品袋相套放入大烧杯中或塑料杯中,放在电子秤上,

5、打开电子秤开关,当电子秤上读数为零时,将连接蒸馏水容器的硅胶管放出少量水后,将管口对准杯口注水,并注意读数变化,当接近1000克时,应放慢流速,改为滴注,直到1000克。之后,应将蒸馏水管的龙头套好,防止污染。在大烧杯中加入一袋稀释粉(50克)。从盛磁珠的小烧杯中取镊子并夹取磁珠,在废液缸上用洗瓶冲洗磁珠2-3次,待磁珠上水分滴净后,放入烧杯中,然后将烧杯放在磁力搅拌器上,打开电源开关和加热开关,调整磁珠转速旋扭,使磁珠以适当速度旋转(水体形成涡流),使稀释粉全部溶解后,降低磁珠转速,关闭加热和电源开关。将杯子放入3

6、5℃的水浴中预温。23公猪采精注:不能控温的加热磁力搅拌器使用时间不可超过10分钟,或及早关闭加热电源;平时磁珠放在一个清洗干燥过的小烧杯中,注入新鲜蒸馏水半杯,镊子为不锈钢材料,也经清洗干燥放入杯中,盖上干净的培养皿,每3周应换掉陈水,冲净换上新的蒸馏水。稀释液加入精液中后,应用小烧杯中的镊子将磁珠从大烧杯中夹出,并在废液缸上冲洗磁珠和镊子前端3-4遍,待磁珠上水分滴净后,连同镊子放入小烧杯中,盖上培养皿。这种方法由于稀释液是在一次性食品袋中配制的,因此,不需要对配制稀释液的容器进行清洗和消毒,实现了稀释液配制的免

7、消毒。冬季稀释粉溶解较慢,可将稀释粉与水混合后,放入水浴锅中预温10分钟,再摇匀,可加速稀释粉溶解。使用加热磁力搅拌器者不必在水浴锅中预温。注:除大规模人工授精站外,一般不主张自己配制稀释粉,推荐使用商业化稀释粉,这些产品质量稳定可靠。另外,稀释粉与蒸馏水按什么比例混合是十分严格的,应按照说明书上的配比进行稀释粉的溶解,不可改变配比。2.2PH值与渗透压用1N稀盐酸或1N氢氧化钠调整BTS稀释液的PH值为7.2(6.8-7.4)左右,渗透压为330mOsm2.3稀释液的保存液态状稀释液冰箱4℃保存,不超过24小时,超

8、过有效贮存期的变质稀释液应废弃。3、采精前的准备1.集精杯的准备应在实验室中进行。用保温杯作集精杯时,不能直接将精液采入杯中。将两层食品袋装入保温杯内,并用洁净的玻璃棒使其贴靠在保温杯壁上,袋口翻向保温杯外,上盖一层专用过滤网,用橡皮筋固定,并使过滤网中部下陷3厘米,以避免公猪射精过快或精液过滤慢时,精液外溢。安装好后,将其放恒温箱在37℃温度

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