紫外诱变及不同菌株混合培养对瘤胃真菌产纤维素酶活性的影响

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1、万方数据EffectsofWInducedMutationandDifferentCombinatiOIlSofFourStrainsIsolatedfromRumenFungionCellulases1^1■●●●．1一』J●上，rocIUCnonZ托VZ臼锣■ermentanonThesissubmittedt01laeslsSUbmlttetoO@'ngdaoAgricultural．UniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterOfAgronomy1一一

2、ZhouGuangming(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：WangLihuaQingdao．ChinaJurte，20t3万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签

3、名：j-7J罚乞划时间：。叼I弓年∥月龉关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：周易阑导师签名：至荆军时间：Ⅵ八年钿蜘时间："f弓年6月f如万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要紫外诱变及菌株混合培养对瘤胃真菌产纤维素酶活性的影响摘要本研究通过体外发酵试验，利用

4、从崂山奶山羊瘤胃内液中分离纯化的四株真菌为菌种，研究紫外诱变对瘤胃真茵产纤维素酶的影响，并得到酶活最高的诱变菌株。并对四株瘤胃真菌按不同的组合(c：、c：、c：、c：)进行等比例混合，研究不同菌株体外混合培养对其产纤维素降解酶活性的影响，并得到最佳混合培养组合。用最佳混合培养组合进行扩大培养，经硫酸铵盐析法得到粗酶制剂，并对所得粗酶制剂的体外作用条件进行研究，得到体外最佳作用条件和最适添加量，最后在此条件下对瘤胃真菌所产纤维素酶的实际应用效果进行评估。整个试验分为三部分。1．试验1利用20w紫外线灯距离20cm对A、B、C、D四个瘤胃

5、真菌菌株进行30S、60S、90S照射处理，研究紫外诱变最佳诱变剂量及对其产酶活性的影响。试验表明20w紫外灯、距离20cm、照射时间90S即可达到最佳诱变作用。但是，在本试验过程中未出现可稳定遗传的正向突变。2．试验2采用单因素试验设计，研究A、B、C、D四种不同瘤胃真菌单菌株及其混合培养对瘤胃真菌产纤维素降解酶(羧甲基纤维素酶、微晶纤维素酶、B．葡萄糖苷酶、木聚糖酶与果胶酶)活性的影响。结果表明，瘤胃真菌B菌株羧甲基纤维素酶、微晶纤维素酶、p．葡萄糖苷酶和果胶酶的72h酶活分别为2．66U／ml、3．98U／ml、2．33U／ml

6、和1．50U／ml，其中前三种酶的酶活显著高于其他三株瘤胃真菌(P<0．05)，果胶酶的酶活显著高于A、D菌株(PO．05)；瘤胃真菌A菌株的72h木聚糖酶活达8．57U／ml，显著高于其他各组(P<0．05)。混合培养组中，AB组羧甲基纤维素酶、B．葡萄糖苷酶和木聚糖酶活性的最强，较B菌株分别提高7．14％、32．19％和21．82％，效果显著(P0．05)。而AC组果胶酶的72h酶活最高，达到3．06

7、U／ml，显著高于其他各组(P<0．05)。综合各酶活表现，AB组合为产纤维素降解酶最佳组合。3．试验3采用L9(34)正交试验设计，利用体外法研究温度(35℃、40℃、45℃)、初始pH(5．0、6．0、7．0)、时间(1天、2天、3天)和酶的添加量(1‰、2％o、3％。)对玉米消化效果的影响，确定瘤胃真菌酶制剂最适添加量和最适反应条件。结果表明，温度45℃、pH=5．0、纤维素酶添加量3％o，时间为3d时，瘤胃真菌体外处理饲料的效果最好。在此条件下，纤维素酶对豆粕粉、棉粕粉、全麦粉、和小麦麸进行体外处理，万方数据青岛农业大学硕士学

8、位论文摘要结果发现，其DM消失率分别为21．96％、18．99％、21．47％和12．40％，NDF消失率分别为12．42％、15．69％、19．71％和39．78％，ADF消失率分别为49．78％、46．14％、49．