直肠癌组织中Wnt3的表达及其临床意义

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1、单位代码10475学号10475201605100分类号R6硕士学位论文直肠癌组织中Wnt3的表达及其临床意义学科、专业：临床医学、外科学研究方向：直肠恶性肿瘤申请学位类别：医学硕士申请人：郑志聪指导教师：任学群教授二〇一七年六月ExpressionandsignificanceofWnt3inrectalcancerADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByHeanPanh

2、aSupervisor:ProfessorRenXuequnJune,2017摘要背景直肠癌（Rectalcancer,RC）是全世界范围内最常见和对人类健康威胁最大的消化道恶性肿瘤之一。目前认为，RC如能通过各种检测方法早期发现并进行适当治疗，治愈率、5年生存率相当高。最新研究证明Wnt信号通路被发现在肠腺体的底部激活，所以它的主要功能是参与干细胞的维持以及调节组织细胞的生理平衡。Wnt信号通路的异常激活常发现于癌症患者，尤其是RC患者。RC的发生发展被认为与Wnt信号通路介导β-catenin有关。Wnt3蛋白是Wnt信号通路家族的一个成员，它能够识别配体并与其结合从而激活该信号

3、通道。到目前为止，Wnt3在RC中的表达水平和及可能促进RC发生发病机制尚未明确。进一步研究Wnt3基因及蛋白在RC中的变化情况并探索其与RC发生发展的关系，将为RC的诊疗和预后提供新的方向。目的以直肠癌术后患者的新鲜组织为样本，探讨Wnt3在RC组织的表达情况，分析Wnt3蛋白及基因表达水平与临床病例资料特征的相关性，初步研究Wnt3在RC细胞增值和迁移过程中的功能和机制。方法1.鉴定Wnt3表达水平与RC发生发展的关系a)收集2015年11月～2016年9月在河南大学淮河医院普通外科直肠癌术后患者的新鲜标本共47例，包含癌组织及癌旁正常组织，详细记录其相关病历资料。b)Trizo

4、l法被应用来提取预存冰冻组织的总RNA，然后应用逆转录反应把总RNA得到cDNA。应用荧光定量PCR鉴定Wnt3在RC组织及癌旁正常组织表达水平的差异。2.鉴定结直肠癌细胞中干扰Wnt3对细胞增值和迁移的影响a)siRNA被设计以及合成针对Wnt3，然后转染至结直肠癌CaCO2细胞，应用蛋白质免疫印迹法检测转染siRNA的结直肠癌CaCO2细胞中Wnt3的蛋白表达状况。b)应用MTT实验及划痕实验分别检测Wnt3对结直肠癌CaCO2细胞增殖和迁移能力的影响。I3.统计学分析GraphpadPrism软件被利用来分析数据，计量数据应用直线相关法检测，应用非参数t检验法和单因素方差分析法

5、来检验计数数据。结果1.荧光定量PCR（RTPCR）被使用来检测Wnt3基因的表达情况，RTPCR结果显示，Wnt3基因在直肠癌组织中的表达水平相对于癌旁正常组织明显升高（P<0.0001），定量分析高达3倍。2.Wnt3在癌组织中的表达水平特征是II期肿瘤组织中低于III期肿瘤组织但高于IV期肿瘤组织（P<0.05）；III期肿瘤组织中的表达也高于IV期肿瘤组织（P<0.05）；Wnt3的表达在有远处转移组织中明显低于无远处转移组织（P<0.05）。但与肿瘤侵犯程度、淋巴转移无明显相关性（P>0.05）。3.Wnt3的表达在不同年龄、性别、BMI、饮酒史、吸烟史、大便OB的直肠癌组

6、织中无明显差异（P>0.05）。且Wnt3的表达水平与CA125、CA199、AFP、CEA等肿瘤标志物的水平，与肝功能（AST、ALT、ALB）及肾功能（CREA、UREA）水平无明显相关性。4.Westernblot的检测发现与阴性对照转染组（NC-siRNA）细胞相比，Wnt3-siRNA转染CaCO2细胞后Wnt3条带亮度比明显降低，而转染后的actin蛋白条带亮一致。5.MTT实验结果表明，转染Wnt3-siRNA后72hCaCO2细胞的生长出现抑制。6.细胞划痕实验显示，转染Wnt3-siRNA后72hCaCO2细胞的愈合能力下降。结论Wnt3表达水平与直肠癌的病理分期明

7、显有相关性，分析其表达水平可能用于直肠癌的早期诊断及肿瘤分期的初步判定。将Wnt3作为靶基因用于癌症治疗，具有广阔的应用前景，Wnt3可能会是直肠癌基因治疗的新靶点。关键字：Wnt3，直肠癌，荧光定量聚合酶链反应，免疫印迹法，细胞划痕实验IIABSTRACTBackgroundRectalcancer(RC)isoneofthemostcommontumorandmosttheatenedhumanhealthofdigestivetumorinthewo