应用蛋白质芯片筛选盐、碱胁迫下红罗非鱼鳃差异表达蛋白

《应用蛋白质芯片筛选盐、碱胁迫下红罗非鱼鳃差异表达蛋白》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150150331上海海洋大学硕士学位论文题目：应用蛋白质芯片筛选盐、碱胁迫下红罗非鱼鳃差异表达蛋白英文题目：Screeningthedifferentialexpressedproteinsbyproteinchipingillofredtilapia(Oreochromismossambicus♀×O.niloticus♂)undersalinityandalkalinitystress专业：渔业研究方向：水产动物遗传育种姓名：指导教师：二O一八年

2、三月二十八日I上海海洋大学硕士学位论文应用蛋白质芯片筛选盐、碱胁迫下红罗非鱼鳃差异表达蛋白摘要广盐性鱼类可在一定范围的盐碱水环境中生存，鳃被认为是主要的调节器官，负责离子转运，维持渗透压平衡和酸碱平衡。本研究以红罗非鱼为实验材料，应用蛋白质芯片技术分析了急性盐、碱胁迫下红罗非鱼鳃组织中蛋白质的差异表达，意在进一步理解鱼类盐碱环境适应的分子应答机制。主要结果如下：（1）采用蛋白抗体芯片结合串联质谱技术初步筛选了盐胁迫下红罗非鱼（Oreochromismossambicus×O.niloticus）鳃组织的差异表

3、达蛋白，并通过免疫组化和免疫印迹技术对候选差异蛋白进行了验证。结果显示，共筛选获得181个表达量有显著差异的蛋白质（变化倍数≥1.5），包含上调蛋白142个，下调蛋白39个。挑选5个蛋白进行质谱鉴定得到3个蛋白质：中间丝蛋白（intermediatefilamentprotein，IF）、转运蛋白63（translocationprotein63，SEC63）、蛋白质二硫键异构酶A3（proteindisulfide-isomeraseA3，PDIA3）。免疫组化结果显示，在淡水、盐度组中，IF和PDIA3在

4、鳃小片基部均有阳性反应，且随盐度升高，阳性反应呈先降低后增强的趋势，SEC63无阳性反II上海海洋大学硕士学位论文应。Westernblot结果显示，在淡水和盐水中，IF和PDIA3两种蛋白均有表达，并且随盐度升高呈现先降低、再升高的变化趋势，SEC63蛋白无明显目的条带；在30g/L盐度组中，胁迫前期IF蛋白表达量降低，在48h达到最低值，72h开始有明显回升，96h趋于稳定，PDIA3蛋白表达量在胁迫后96h显著升高（P＜0.05）。研究结果推测，IF和PDIA3是在盐胁迫环境下红罗非鱼鳃组织的响应蛋白，

5、它们分别在细胞骨架、内质网功能维持中发挥重要调节作用。（2）为探讨鱼类在碱环境胁迫下的蛋白水平应答，将红罗非鱼从淡-1-1-1水直接转入2g∙L、3g∙L和4g∙LNaHCO3碱水中进行急性胁迫试验，利用蛋白抗体芯片结合串联质谱技术初步筛选了碱胁迫下红罗非鱼鳃组织的差异表达蛋白，并结合免疫组学技术对候选差异蛋白进行验证。结果显示：与淡水组相比，碱水组中共筛选得到表达量有显著差异的蛋白质229个，其中，碱度组特异表达位点90个（变化倍数≥1.5），包含上调的位点41个，下调位点的49个。挑选其中5个蛋白位点进行

6、质谱鉴定，得到2个蛋白质：14-3-3蛋白（14-3-3proteinbeta/alpha-A-likeisoformX1）、DnaJhomologsubfamilyβmember11-like（DnaJ同源β亚家族成员11）。免疫组化结果显示，14-3-3和DnaJ蛋白在鳃小片基部均有阳性反应，且阳性反应随碱度升高显著增强。Western-blotting结果显示，在淡水和碱水环境下，鳃中14-3-3和DnaJ两种蛋白均有表达，随碱度增加，14-3-3蛋白呈现先降低、后升高变化趋势，12h表达量最低；Dna

7、J蛋白表达量随碱度变化升高，随胁迫时间持III上海海洋大学硕士学位论文续升高，在72h达到峰值。初步推断，在碳酸盐碱环境中，红罗非鱼能够通过启动鳃组织中的伴侣蛋白—14-3-3、DnaJ蛋白表达水平来维持体内蛋白质的稳定性，以此维持它们在机体的正常功能。关键词：红罗非鱼，蛋白质芯片，盐胁迫，碱胁迫，差异表达蛋白IV上海海洋大学硕士学位论文Screeningthedifferentialexpressedproteinsbyproteinchipingillofredtilapia(Oreochromismos

8、sambicus♀×O.niloticus♂)undersalinityandalkalinitystressABSTRACTEuryhalinefishcansurviveinacertainrangeofsaline-alkaliwaterenvironmentafteracclimation.Gillisconsideredtobethemainregulatoryorgan,maintain