ATP13A3蛋白在细胞衰老中的作用.pdf

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1、杭州师范大学硕士学位论文致谢致谢时光荏苒，转眼间三年的研究生生活即将结束。回首这三年的求学历程，发现自己对于很多事物都有了新的领悟与感知，对于很多观点也有了进一步的理解和深思。对于科研和学习越发的敬畏与认真。对那些引导我、帮助我、激励我的人，心中更是充满了感激。首先要感谢的是我的导师刘俊平教授，从论文定题到写作定稿，老师都给了我很大的鼓励和帮助。在我攻读硕士研究生期间，深深受益于刘老师的关心、爱护和谆谆教导。他作为老师，点拨迷津，让人如沐春风;作为长辈，关怀备至，让人感念至深。在此谨向刘老师表示我最诚挚的敬意和感谢!同时还要感谢王丽辉老师、鲁燕华老师和李建锋老师

2、。他们在实验过程给了我很多的指导和帮助，让我在迷茫时可以找回实验的方向和重点，教会了我很多必备的实验技术和实验思维，使得我的实验可以顺利地进行下去，在此衷心的感谢他们的耐心和无私。除了老师们，还要感谢和我一级的同学兼朋友-余献华和韩启换。他们虽和我同级，但却比我优秀许多。在学习和生活中她们像师姐一样帮助我鼓励我，给了我很大的帮助。需要特别感谢我的父母。父母的养育之恩无以为报，他们是我十多年求学路上的坚强后盾，在我面临人生选择的迷茫之际，为我排忧解难，他们对我无私的爱与照顾是我不断前进的动力，感谢他们。Ⅱ杭州师范大学硕士学位论文摘要摘要：ATP13A3基因是P-A

3、TPase家族P5亚家族P5-ATPase五个基因中的一个。研究发现在衰老的小鼠肾脏薄壁细胞内有一种表达上调的蛋白与P5-ATPase家族蛋白同源，被称为AFURS1(ATPasefamilyhomologup-regulatedinsenescencecells，也就是ATP13A3。但是关于ATP13A3基因与生物衰老的关系及在生物体内的机制尚没有相关的研究报道。本实验利用人宫颈癌细胞（HELA）和人成纤维（BJ）细胞作为细胞模型，对ATP13A3基因在衰老过程的作用机制进行初步的探索与研究。我们的实验显示，敲低ATP13A3基因的表达后，衰老相关蛋白P16

4、,P21,P53等表达也随之下降，而过表达ATP13A3基因后，这些蛋白的表达也随之升高。过表达ATP13A3蛋白后，ki67与PCNA蛋白表达明显下降，说明细胞增殖速率受到抑制。随后我们检测了SA-β-gal的活性，发现在衰老的BJ细胞中敲低ATP13A3的表达后，SA-β-gal的活性有所下降，说明衰老现象有所缓解。用流式分析技术检测ATP13A3对细胞内Ceramide的摄取状况。发现增加ATP13A3基因的表达后Ceramide的荧光强度较对照有所下降，但敲低ATP13A3基因后Ceramide的荧光强度却并未有增加的现象。这些现象说明ATP13A3的确

5、参与了细胞衰老的调节。关键词：ATP13A3P5-ATPase细胞衰老Ⅱ杭州师范大学硕士学位论文AbstractAbstract：ATP13A3isoneoftheP5-ATPasegeneswhichisoneoftheP-ATPasefamilies’subfamily.Researchersfoundthatthereisaproteinoverexpressioninthesenescencekidneyparenchymalcells.namedAFURS1(ATPasefamilyhomologup-regulatedinsenescencecell

6、s).But,weknowpooraboutthemechanismofATP13A3intheprocessofcellsenescence.OurexperimentuseHelaandBJcelltostudythemechanismofATP13A3intheprocessofcellsenescence.WeidentifiedwhenknockdowntheATP13A3protein,p16,p21,andp53expressionisdecreased,andincreasedastheoverexpressionofATP13A3protein

7、.WhenATP13A3isoverexpressed,theproteinlevelofki67andPCNAisdecreased,meansthecell’sreplicationisinhibited.InthesenescenceBJcell,weknockdowntheexpressionofATP13A3protein,findtheβ-galisdecreased.WeuseflowcytometrytodetecttheuptakeofceramideinthecellwhenwechangetheexpressionofATP13A3.Iti

8、ndictedthatw