布病实验室技术培训.安

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1、陕西省CDC鼠布生防科·安翠红•布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属（Brucella）的细菌侵入机体，引起传染－变态反应性的人畜共患传染病。•布鲁氏菌病简称布病。•布鲁氏菌简称为布氏菌。布病1布氏菌的生物学特性病原学2布氏菌的抗原及毒力及实验室检验3布病实验室检验1布鲁氏13.1发现和分类位置菌特菌性1.2形态和培养特征的生物13.3抵抗力学1.1布氏菌的发现1887年英国军医Bruce首先从死于“马耳他热”的英国士兵的脾脏中分离出羊种布氏菌。1.1布鲁氏菌的分类学位置微生物分类学家将布氏菌归为布鲁氏菌属（

2、Brucella），下分6个种19个生物型。•羊种布氏菌（Bvr.melitensis）1，2，3型；•牛种布氏菌（Br.abortus）1，2，3，4，5，6，7，9型；•猪种布氏菌（Br.suis）1，2，3，4，5型；•沙漠森林鼠种布氏菌（Br.neotemae）；•绵羊附睾种布氏菌（Br.ovis）；•犬种布氏菌（Br.canis）。•自1952年起，在人畜间共分离出3个种233株布鲁氏菌，其中羊种菌227株，占总数的97.4%。牛种3株、犬种3株。1991年以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后则为羊1、3型

3、。•陕西省是以羊型菌为主、牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫区。流行优势种随时间推移发生了变化。•布氏菌属的细菌是一组微小的球杆状的革兰氏染色阴性菌。柯氏染色，布氏菌染成红色，其他菌染成绿色或蓝色。•宽0.3～0.6µm，长0.6～1.5µm。无芽孢、无鞭毛、无质粒、不形成荚膜。•一般说来，羊种菌最小，牛种菌次之，猪种菌最大。Ø营养条件高，生长缓慢，生长所需温度为20-40℃，最适温度为37℃.通常要经过4-6天，有的甚至要经过20-30天（双相培养基）才能长出菌落。Ø对物理因子的抵抗力Ø对化学因子的抵抗力Ø不同环境中的抵抗能力Ø

4、对抗生素的敏感性对物理因子的抵抗力对化学因子的抵抗力现已证明，布鲁氏菌对四环素最敏感，其次是链霉素，而对枯草杆菌肽、多黏菌素B、多黏菌素M素等有很强的抵抗力。2布氏菌23.1布氏菌的抗原、内毒素的抗原2.2布氏菌的毒力、毒力2.31.1布氏菌的抗原及内毒素•布氏菌的抗原成分十分复杂，存在A、M、G成分。A对牛种布氏菌有特异性，M对羊种布氏菌有特异性，G为两种菌共有。还与多种细菌存在共同抗原，因而有血清交叉反应。布氏菌不产生外毒素，只产生内毒素，有致热、致炎作用，可导致休克。2.31.2布氏菌的毒力•从种上来说，羊种毒力最强

5、，猪种和牛种次之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。•由于菌种毒力等因素的不同，患病后的临床表现也不完全一样。•羊种布鲁氏菌的毒力最强,患者中毒症状严重，多有典型的发烧、多汗、头痛、虚弱、关节痛、肝脾及睾丸肿大等急性症状。•猪种、牛种次之。•犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。3布氏33.1细菌学检验菌实验室3.2血清学检验检验33.1细菌学检验•诊断布病的金标准。•3.1.1实验室要求•布氏菌的分离培养要在生物安全二级以上实验室中进行。•布氏菌是高致病性病原微生物，从危害程度来说为第二类病原微生物。33.1细菌学检验•3.

6、1.2方法•采样（采血）•双相培养基•菌株鉴定（菌落形态观察、涂片、染色、镜检布氏菌诊断血清玻片凝集试验）•种型鉴定（CO2需要与否、H2S的产生的测定、染料抑菌试验、单项因子血清凝集试验、噬菌体裂解试验等等）3.1.3布氏菌培养特性•布氏菌是需氧或微需氧菌•生长缓慢，尤其初代分离•牛种部分型别、绵羊附睾种布氏菌需在5-10%CO2环境中培养•新长出的菌落无色透明，光滑圆形，突起，均质，直径1-2mm•液体培养均匀混浊，无菌膜•粗糙型菌落较大，生长快3.1.4布氏菌培养检查材料人或动物的全血、动物流产胎儿（胎儿的肝脏、肺、

7、胃内容物）动物脏器、动物胎盘、关节液、阴道分泌物等新鲜乳汁3.1.5样品的采集•血培养：急性期、体温反应明显和血清滴度高的病人，血培养阳性率高•血培养阳性率与病期、体温反应、临床表现以及血清滴度等有关系•骨髓培养：慢性期病人骨髓培养的阳性率比血液高•从胸腔积液、脓肿和关节液、痰、乳、阴道分泌物•流产胎盘中分离到布氏菌•新鲜乳汁•布氏菌革兰染色•分离培养•纯分离传代•玻片凝集初步鉴定，阳性血清、因子血清凝集•H2S产生试验，CO2培养依赖试验•噬菌体裂解试验•染料抑菌试验•PCR检测•其他方法检测生化测定脂肪酸分析PFGE等

8、•我国1981年起从国外引进布氏菌分型噬菌体，对鉴定布氏菌有良好使用价值，可以将布氏菌鉴定到种•目前使用的噬菌体有TbFiBK2WbRR/OR/C•商用培养基布氏琼脂布氏肉汤•制备培养基肝浸液琼脂血琼脂培养基胰蛋白眎琼脂培养基半固体培养基•选择性培养基添加剂（多种抗生素）商品添加剂多粘菌素B杆菌肽放线菌