苹果炭疽叶枯病菌的遗传多样性

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1、分类号密级UDC单位代码硕士学位论文苹果炭疽叶枯病菌的遗传多样性ThegeneticdiversityofglomerellaleafspotpathogenGlomerellacingulata研究生姓名：刘照涛指导教师：李保华教授学科专业：植物病理学研究方向：植物病害流行学中国.青岛二0一八年六月ThegeneticdiversityofglomerellaleafspotpathogenGlomerellacingulataThesissubmittedtoQingdaoAgricultu

2、ralUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyLiuZhaotao（CollegeofPlantHealthandMedicine）Supervisor:LiBaohuaQingdao.ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得

3、青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：

4、时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要苹果炭疽叶枯菌的遗传多样性分析摘要炭疽叶枯病（Glomerellaleafspot，GLS）是近年来我国苹果上新发现的一种叶部病害，导致苹果早期大量落叶和果实严重病斑，给苹果生产造成重大威胁。尽管炭疽叶枯是新发现的一种病害，目前已蔓延至各苹果产区。炭疽叶枯菌遗传多样性研究可以了解病原菌的群体结构、遗传多样性、病原菌适应机制、病害的发展趋势，为炭疽叶枯病的综合治理提供理论依据。利用10条ISSR引物对山东、陕西、江苏、河南的135株菌株炭疽叶枯菌株进行遗传多

5、样性分析，10条引物共扩增出95个位点的多态性条带，多态率是95.96%。STRUCTURE分析结果表明，采自五个不同地区的炭疽叶枯菌在遗传上划分为五个不同的组群。通过对五个地理组群的遗传结构分析发现，山东寺口组群（H=0.2534，I=0.3752）和江苏丰县组群（H=0.2072，I=0.3135）遗传多样性最高，河南商丘组群（H=0.1304，I=0.1998遗传多样性最低），五个组群的遗传分化系数（Gst）是0.3251。AMOVA分析结果表明，地区间的变异仅占总变异度的6.41%，组群

6、间的变异度占36.07%，组群内变异度占57.52%，表明病菌的变异主要来自组群内。五个组群群体间的基因流是1.0379，表明炭疽叶枯菌在组群间存在一定的交流。同一地区内，自嘎啦品种采集菌株的多样性比金帅品种采集菌株的多样性高。对采自山东牟平嘎啦果园的炭疽叶枯菌株030206进行了全基因组测序。结果表明，该菌株全基因组大小是59.59Mb，10505个基因，982个SSR位点。用Primer3软件设计838条引物，从中筛选出了25条SSR引物，并用FAM，HEX，ROX和TAMRA进行荧光标记。

7、用25条SSR引物分析了栖霞、牟平、沂水、茌平、沾化等地96个炭疽叶枯病菌的遗传多样性。结果表明，96个菌株Nei's基因多样性指数(H)为0.343，Shannon指数(I)为0.593。STRUCTURE分析结果表明，96个菌株可以被划分3个不同的组群，组群一(GC1)主要分布在山东西部，组群二(GC2)和组群三(GC3)主要分布于山东东部。AMOVA分析表明，群体间的变异度占总变异度的15%，群体内变异度占85%，炭疽叶枯菌组群内和组群间的都存在变异，其中组群内的变异大于组群间的变异。从三

8、个组群中分别选取四个菌株YS01(GC1)、LC020101(GC1)、MP010202(GC2)和HY060202(GC3)评估其寄生适合度。结果表明，在嘎啦和金冠品种上，菌株YS01侵染形成的病斑个数最多，潜育期最短，产孢量最大，寄生适合度最强；菌株MP010202侵染形成的病斑数最少，潜育期最长，产孢量最少，寄生适合度最低。将四个菌株的分生孢子等量混合后，接种到离体和活体的苹果叶片上后，经连续5代的继代培养后，取病斑上产生青岛农业大学硕士学位论文摘要的分生孢子用SSR检测，发现接种到离体嘎