资源描述：
《生物工程技术讲座_十_核酸标记_生物探针法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、∀。#∀年已月!第卷第期!微生物学杂志∃∃∃∃%∃∃,%甲%%一%∃吧,,尸尸,&∋(,)%,,%%尸∃&乍,%,,∃%户)%,,,∃,%一%,,,一呼%叫,)%,)一%∃一,,卜一气,一一”%)一一,、%,%一,,州,欲,∃叮,,∃∃,∃∃勺∃∃∃∃%一一—一一一一一生物工程技术讲座十!核酸标记一生物探针法汤明久中国,医科大学沈阳!,在核酸的研究中不用放射性同位素,+∋&3(∋/01多聚酶/0145675!而用生物素∗呈+,−.!标记/01或201,以对应的一条单链为模板在利用反应系分,子做为探针来检测核酸
2、分子的方法是统中的四种脱氧位奇三磷酸其中任何一。最近几年内开展起来的实验新技术按一“““,种用8或9标记!修补缺口使由缺口般常规在进行核酸的分析、鉴定以及分子处平移不断延长而新合成的核酸分子带上,杂交等实验之前首先“/01缺。以所谓放射性同位素标冠用被同位素标记的核”口翻译的方法制备用同位素标记的,虽然具备能保持核酸原酸分子做为探针。/01探针!即把待标记的已知/01性质,敏感,易被检测等特点,但由于同∋,分子用核酸酶/03(!切成缺口加,位素价格昂贵有的不能长时间保存以及入能识别并附着在缺口上的大肠杆菌对,环境的污
3、染等原因在使用上受到一定,‘‘夕叭廿:‘,人决、气<分子杂交=生物,个,>,∃八森耘抗生物素扮打咨,生物素阿朴;石&但门的/01山粉交玲移周定在硝酸纤维膜卜∃?之物Α垃下≅5于允生左勺亏告反成,&9·通讨矫钊翻译户轰巍ΒΧ丁9、Β1个9生物带称韧魂Δ+。二3、。〔!下Δ/0八956介夕‘,?刊备寸疑月卜物军嘟衬和浅川底物图Δ生物素探针法图示∀生期杨明久物工程技术讲座十!、。,一生物索探针法原理的限制在很多情况下不能更广泛使用包括不适用于从病人标本中检出特定的先把用生物素标记的核普酸掺组入已。。知/01分子中制成探针再用这
4、个探针/01等,和目的/01进行分子杂交最后用抗生为了把有关核酸分析和基因工程技术,物素3Ε−Β−.!和生物素酶标系统来检的应用范围加以扩大和推广先用生物素。。标记核普酸∃再经缺,测现将全部过程概括如图5口翻圣法把它掺组到待标记的,生物素标记脱氧尿嚓喧核普ΒΦΓ9!/01分子中做为探针用以代∀替同位素标记的探针来进行核酸的分子杂的化学构造如下。交实验Η‘>>ΒΦΓ9∃⋯∃、间Η隔5Ι=<Ηϑ8008Η?ΛΛ。∀。?一Κ8一Κ8Κ808一Κ一Κ8!一08一Κ一Κ8!一<=%呼呼一)冲Μ烯丙胺氨基乙酸。一<=生物素02
5、Ν一3.∀抗生物素训Β−!是一种分子量为下∃、Δ、∃5、ΝΟ,,。∃=Ν5ΝΔΝΝΠΘ#ΡΡ的蛋白质呈四聚体构造每个亚5+Σ缺口翻译缓冲液ΝΝΝΝΝ;林ΔΟ单位和一个分子的生物素有很强的结合力。,用于制备探针的/01溶液因为易于发生非特异吸附一般不用∃,5件Τ等电点为ΔΡ;的卵白抗生物素而用等电含!,。4,。)三种脱氧核普三磷酸点接近性的链霉抗生物素(,&∋∃∃。3Ε−Β−.!或抗生物素/、Ε−Β−./!由于Β1Γ9ΒΚΓ9ΒΧΓ9!抗生物素为四聚体,与探针各;Ρ卜Υ/01上的生物;Ρ卜5,它的分子上能和生物素结
6、合的生物素标记的ΒΦΓ9素结合后。所;Ρ卜Υ部位还剩下三处以当再加入由酶标记的生物索3(∋生物素酶标!时就能特异地把酶牛胰/05。,结合上去在反应系统中最后加入的酶作ΔΡ.Τ用底物,。1多聚酶ς当受酶作用后出现呈色反应如上大肠杆菌/0述通过探针特异的检测来发现目的/01;%ΔΡ单位。Σ缺∀分子基因!滚ΔΡ口翻译缓冲液组成、Γ&(一∃;+∃二制备标记生物案的探针−8Κς48!ΜΥ,ΤΚς∀在制备/01探针时是把生物素标Υ;Ρ7ΥΡ∃(7记的一种脱核普三磷酸如ΒΦΓ9!用缺口牛血清白蛋白ΩΜ1!Τ=75。翻译法掺组
7、入核酸/01!分子中去疏基乙醇ΔΡ爪Υ,具体制备时在;Ρ件Δ中的反应混合液组成如除常使用生物素标记ΒΦΓ9外也可微生物学杂志卷、,以用Β1Γ9ΒΚΓ9所用的生物素一,也可以用沉淀法分离回收/01但不能ΒΦΓ9在核普酸和生物素分子间有一个长。用苯酚处理上述制备的生物素标记。间隔时检出效果好反应混合液在Δ;℃下。/01在一沁℃下最少可保存数个月。ςΗ7Υ:/Γ1、反应小时停止反应时加三/01分子杂交Μ+ϑ,Ψ∋&.法!∃。48ΜΡ!和5ΞΜ/Μ反应停止后通过用生物素标记探针进行/01分子杂用Μ∋4Ψ3Β∋ΣΧ;Ρ凝胶层
8、析法分离精制出交的基本原理和用同位素标记的探针是一。/01探针!即把凝胶先放入有;Ρ7Υ致的。当把被检目的!/01用限制性’、&(一∃、Γ−8Κς48;!5&.ΥΖ/01内切酶消化成多数大小不等的片段后,再∃Δ,。575ΡΞΜ/Μ液内膨化并高压灭菌用用琼脂糖凝胶电泳使不同大小的/01片,注射器外
