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1、中国农业科学2009,42(2):588-596ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2009.02.025低温对不同基因型黄瓜叶片蛋白质组的影响11121许培磊，白吉刚，王秀娟，宗成顺，田明12（山东农业大学生命科学学院/作物生物学国家重点实验室，山东泰安271018；山东烟台莱州市农业局，山东烟台261400）摘要：【目的】分离不同基因型黄瓜叶片的低温诱导蛋白，为从蛋白质组角度揭示黄瓜应答低温逆境的调控机制打下基础。【方法】以黄瓜（CucumissativusL.）的日光温室品种‘新泰密刺’和露地栽培品种‘津研4号
2、’为试材，采用分步提取法溶解叶片总蛋白质，运用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、双向电泳、质谱分析与检索技术，-2-1在100μmol·m·s的光照条件下，比较研究低温（15/15℃）和常温（25/18℃）下叶片蛋白质组的差异。【结果】利用提取液Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ分步提取叶片总蛋白质后，提取液Ⅰ溶解的黄瓜蛋白质较少。对提取液Ⅱ和Ⅲ溶解的叶片蛋白质进行双向电泳后发现，相对于常温处理，低温使‘新泰密刺’的7个蛋白质点特异表达、2个蛋白质点上调表达、2个蛋白质点下调表达、5个蛋白质点未表达；使‘津研4号’的7个蛋白质点特异表达、1个蛋白质点上调表达、4个蛋白质点下调表达、9个蛋白质点未表达。低温下，‘新泰密刺
3、’的蛋白质点3和4以及‘津研4号’中蛋白质点2的表达量显著高于常温处理，通过MALDI-TOF质谱分析，这3个蛋白质点被鉴定为1,5-二磷酸-2-1核酮糖羧化酶的大亚基。【结论】黄瓜叶片的高亲水性蛋白质含量低；在相同的光照（100μmol·m·s）条件下低温对不同基因型黄瓜叶片的蛋白质组均有影响；1,5-二磷酸核酮糖羧化酶可能与黄瓜叶片耐低温有关。关键词：黄瓜；蛋白质组；低温；双向电泳；质谱分析；1，5-二磷酸核酮糖羧化酶EffectsofLowTemperatureonLeafProteomefromCucumissativusofDifferentGenotypes11121XUPe
4、i-lei,BAIJi-gang,WANGXiu-juan,ZONGCheng-shun,TIANMing1(StateKeyLaboratoryofCropBiology/CollegeofLifeSciences,ShandongAgriculturalUniversity,Tai’an271018,Shandong;2LaizhouAgriculturalBureau,Yantai261400,Shandong)Abstract:【Objective】Thepurposeofthisprojectwastoseparateproteinspotsinducedbylowtemper
5、atureincucumberleavesoftwogenotypes,andrevealthemechanismofcucumberrespondingtolowtemperature.【Method】Twocucumbergenotypes(CucumissativusL.cvXintaimiciandJinyan4)werebothtreatedwithlowtemperature(15/15℃)andnormaltemperature(25/18℃)-2-1underthelightof100µmol·m·sfor7dtostudythechangesofleafproteome
6、.Thetotalproteinswereextractedbythree-steps,separatedbytwo-dimensionalgelelectrophoresis(2-DE)andanalysedthroughMALDI-TOFmassspectrometry.【Result】SDS-PAGEshowedthatfewproteinswereextractedbyhydrophilicsolutionⅠⅡ.TheextractsofsolutionandⅢwereseparatedthrough2-DE.Comparedwithtreatmentofnormaltemper
7、ature,lowtemperaturemade‘Xintaimici’genotypetoproduce7specialproteinspots,2up-regulatedproteinspots,2down-regulatedproteinspotsand5unexpressedproteinspots,andallowed‘Jinyan4’toproduce7specialproteinspots,1up-regulatedp
