23-羟基白桦酸衍生物b5g9抗肝癌活性及其作用机制研究

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1、暨南大学硕士学位论文23-羟基白桦酸衍生物B5G9抗肝癌活性及其作用机制研究Studiesontheanti-proliferativeeffectsandmolecularmechanismof23-hydroxybetulinicacidderivativeB5G9inhepatocellularcarcinomacells作者姓名：姚楠指导教师姓名叶文才张冬梅及学位、职称：博士教授博士副研究员学科、专业名称：中药学（中药有效成分研究）论文提交日期：2013年4月29日论文答辩日期：2013年5月28日答辩委员会主席：朱孝峰教授论文评阅人：盲审学位授予单

2、位和日期：暨南大学硕士学位论文23-羟基白桦酸衍生物B5G9抗肝癌活性及其作用机制研究独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得暨南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解暨南大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，

3、允许论文被查阅和借阅。本人授权暨南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日学位论文作者毕业后去向：读博工作单位：暨南大学电话：15914377490通讯地址：邮编：暨南大学硕士学位论文23-羟基白桦酸衍生物B5G9抗肝癌活性及其作用机制研究中文摘要目的：研究23-羟基白桦酸衍生物B5G9对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用及其诱导死亡的机制。方法：采用MTT法评价23-羟基白桦酸衍生物对人

4、肝癌细胞系HepG2、HepG2/ADM、Hep3B和Bel-7402的增殖抑制活性，Hochest33258染色检测细胞凋亡时细胞核染色质的变化，透射电子显微镜观察细胞亚显微结构的变化，采用流式细胞仪分析B5G9对细胞周期的影响，AnnexinV-FITC/PI双染检测凋亡细胞比率，JC-1染色观察B5G9对细胞线粒体膜电位的影响，Westernblot检测相关凋亡蛋白caspase-8，caspase-9，caspase-3和PARP的剪切情况、线粒体调控蛋白Bcl-2、Bax的表达水平的变化以及cytochromec的释放。采用荧光探针H2DCFDA、

5、Fluo-3-AM检测胞浆中ROS含量和钙离子浓度。结果：23-羟基白桦酸衍生物B5G9能有效地抑制人肝癌细胞系HepG2、HepG2/ADM、Hep3B和Bel-7402的增殖并呈剂量依赖性抑制HepG2的增殖。细胞周期分析结果显示B5G9诱导HepG2细胞产生DNA含量减少的亚二倍体凋亡峰，并呈剂量依赖性。线粒体膜电位检测发现B5G9呈剂量依赖性下调HepG2细胞的线粒体膜电位。Westernblot结果显示B5G9作用后，caspase-9，caspase-3和PARP被剪切活化，cytochromec释放到胞浆，但caspase-8、Bcl-2和Ba

6、x的表达水平无明显变化。B5G9作用后，细胞内ROS和钙离子水平显著增加，NAC的加入抑制了二者的释放，增加了细胞存活，减少了细胞凋亡和线粒体损伤。PT孔抑制剂MgCl2减少了了B5G9诱导的凋亡和线粒体损伤。结论：B5G9可以抑制人肝癌细胞HepG2增殖并诱导其凋亡，作用机制可能与ROS介导的线粒体凋亡途径相关。I暨南大学硕士学位论文23-羟基白桦酸衍生物B5G9抗肝癌活性及其作用机制研究关键词：23-羟基白桦酸衍生物；HepG2细胞；细胞凋亡；线粒体途径；活性氧；钙离子；PT孔II暨南大学硕士学位论文23-羟基白桦酸衍生物B5G9抗肝癌活性及其作用机制研

7、究AbstractAim:Theaimofthisstudyistoevaluatetheanti-hepatomaactivityofB5G9,aderivativeof23-hydroxybetulinicacid,andelucidatetheunderlyingmolecularmechanisms.Methods:CellviabilitywasassessedusingMTTassayandcellularultrastructurewasobservedbytransmissionelectronmicroscopy.Nuclearmorpho

8、logywasobservedbyfluoresce