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《杀虫剂杀螟丹遗传毒性的检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、--------------------------------------------精品文档Word可编辑值得收藏------------------------------------------------杀虫剂杀螟丹遗传毒性的检测/h1农药污染是环境污染的主要构成之一,农药的大量生产和使用不仅造成了环境污染,而且给人类健康带来了较大的危害。因此,研究农药的遗传毒性具有重要意义。杀螟丹作为第一个人工合成沙蚕毒类杀虫剂,具有较高的代表性。它具有内吸胃毒、触杀等多种作用,效果迅速,持效期较长,杀虫谱广。对
2、鞘翅目、半翅目、直翅目等多种害虫和线虫均有很好的防治效果。本文通过彗星试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验对杀螟丹的遗传毒性进行研究,为评价杀螟丹对生态系统的影响及其合理安全使用提供科学依据。1材料与方法1?1主要试剂杀螟丹(兴农股份有限公司),化学名称为1,3?二(氨基甲酰硫)?2?甲基氨基丙烷,纯度96%。二甲基亚砜(DMSO),二氨基芴(2?AF),甲基磺酸甲酯(MMS),TritonX?100,溴化乙锭(EB)(美国Sigma公司);环磷酰胺(CP),丝裂霉素C(上海华联制药有限公司);小
3、牛血清(上海普飞生物有限公司)。1?2实验菌株和培养基6----------------------------------------------------精品文档值得收藏-------------------------------------------------------------------------------------------------------精品文档Word可编辑值得收藏------------------------------------------------实验菌
4、株为组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门菌TA97、TA98、TA100和TA102菌株(沈阳国家新药安全评价中心遗传毒理实验室),经鉴定各项遗传特性均符合实验要求;菌株增菌、基因型鉴定及各种试验用培养基均按标准操作〔1〕。1?3实验动物雄性1CR小鼠,体重(25±2)?g(中国科学院上海实验动物中心),常规喂养,观察1周后使用。1?4实验方法1?4?1Ames试验采用标准平皿掺入法〔1〕。分别进行代谢活化和非活化2种处理,平行设置阴、阳性对照。阴性对照为二甲基亚砜(DMSO)?0?1ml/皿,阳性对照代谢活化时均为2
5、?氨基芴(2?AF)20?μg/皿;非代谢活化菌株TA97、TA98和TA102阳性对照为敌克松(Dexon)50?μg/皿,菌株TA100阳性对照为叠氮钠(NaN3)1?5μg/皿。剂量设计为5?000,1?667,556和185μg/皿4个剂量,重复3次。试验结果以试验样品的回变菌落数超过自发回变菌落数的2倍以上,并呈剂量?效应关系为阳性来判定。1?4?2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验取健康成年小鼠,随机分组,每组10只,雌、雄各半。试验设100,50,25?mg/kg3个受试农药剂量组,1个阳性对照组(环
6、磷酰胺,剂量为50?mg/kg),1个阴性对照组(双蒸水)。经口途径给药,给药2次,间隔24?h。第2次灌胃后6?h颈椎脱臼处死小鼠,取胸骨骨髓,涂片,观察,每只动物计数1?000个嗜多染红细胞(PCE),记录含有微核的细胞数,计算微核细胞率(以‰表示),并计数200个PCE及同时见到的正染红细胞(NCE)数,求出PCE/NCE值。1?4?3彗星试验1?4?3?1动物分组及染毒6----------------------------------------------------精品文档值得收藏------
7、-------------------------------------------------------------------------------------------------精品文档Word可编辑值得收藏------------------------------------------------取健康成年小鼠,随机分组,每组10只。试验设100,50,25?mg/kg3个受试农药剂量组,1个阳性对照组(环磷酰胺,剂量为50?mg/kg),1个阴性对照组(双蒸水)。经口途径给药,给药2次
8、,间隔24?h。1?4?3?2取材于第2次给药后6?h颈椎脱臼处死小鼠,取出股骨,剪断两端膨大处,用注射器吸取少许D?Hanks液从股骨一端注入,将骨髓冲洗入玻璃离心管中,直至股骨发白,离心后用D?Hanks液调整细胞浓度为106~107?/ml,4℃冷却待用,并以台盼兰染色观察细胞存活率。1?4?3?3彗星试验依照按/h1文献〔2〕方法并略加改进〔3〕。荧光显微镜下用515~560?nm的激发光观
