山东烟区烟草赤星病病原菌鉴定及致病机理研究

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1、分类号密级UDC单位代码硕士学位论文山东烟区烟草赤星病病原菌鉴定及致病机理研究IdentificationandpathogenicitymechanismoftobaccobrownspotpathogeninShandong研究生姓名胡晓莉指导教师王元英研究员学科专业作物遗传育种研究方向烟草抗病育种中国.青岛二〇一八年六月IdentificationandpathogenicitymechanismoftobaccobrownspotpathogeninShandongThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfil

2、lmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyHuXiaoli（DepartmentofAgronomy）Supervisor:WangYuanying独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了

3、解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要山东烟区烟草赤星病病原菌鉴定及致病机理研究摘要赤星病是烟草主要叶部病害之一，主要危害成熟期叶片，严重影响烟叶产量和品质。引起烟草赤星病的病原菌为链格孢属真菌，该属真菌不同种存在致病力差异，因此，对赤星病病原菌类型进行鉴定，是开展抗性后续

4、体系鉴定和致病机理研究的基础。本研究选用在山东烟区采集到的烟草赤星病病原菌，鉴定筛选出了高致病力菌株，并以此为试验材料，利用孢子悬浮液接种烟草幼苗叶片的新方法，进行开展病原菌侵染烟草抗感品种后的致病机理研究。具体结果如下：1、本研究收集了在山东诸城、即墨、高密、莒县、沂水五个地区烟草生产上流行的烟草赤星病病叶样品，通过分离纯化得到病原菌15株，通过菌落及分生孢子形态学、真菌rDNA-ITS序列分析,初步确定病原菌A3、A4、A7、A13、A14、A15属于为链格孢属真菌（Alternariasp），A1、A2、A5、A6、A9、A10、A11、A12为链格孢属链格孢种（Alter

5、nariaalternata），A8为链格孢属细极链格孢（Alternariatenuissima），表明引起山东地区烟草赤星病的病原菌至少有两个种，分别为链格孢菌和细极链格孢菌，其中链格孢菌与烟草叶片具有高度亲和性，是引起山东地区烟草赤星病的主要致病菌。通过对不同类型菌株的致病力分析，筛选出以A6（KY788021）为代表的强致病力菌株。2、探索建立了孢子悬浮液接种烟草幼苗的鉴定方法。利用浓度约为1×10^6个/mL孢子悬浮液接种净叶黄、Beinhart1000-1、NC82、C151的幼苗叶片，结果表明四个品种发病表型表现出了极显著差异性(p＜0.001)，病斑直径分别为0.

6、29cm、0.09cm、0.51cm、0.84cm。试验结果与大田成株期接种病情调查统计鉴定结果具有高度一致性，即净叶黄、Beinhart1000-1为高抗性品种，NC82、C151为稳定感病性品种具有一致性，说明利用孢子悬浮液接种烟草幼苗的试验结果可靠，可用于烟草赤星病抗病材料的初步筛选。并利用该方法接种病级为0级和9级的（净叶黄×NC82）的DH群体，观测发病表型及细胞破损程度，结果表明两种病级株系表现出了显著差异性，p值分别为0.01和0.001，充分验证为了孢子悬浮液接种烟草幼苗试验方法的可行性。3、通过对链格孢菌侵染烟草研究，发现病原菌入侵烟草叶片后，分生孢子在抗病品种

7、的萌发时期明显滞后于感病品种。通过对生化指标测定表明，链格孢菌入侵寄主叶片后各时间段内抗病品种细胞内的保护酶系统SOD、POD均高于感病品种，膜脂过氧化程度较轻微，表现出较强抗病性。细胞组织学试验结果表明，链格孢菌入侵后，抗病青岛农业大学硕士学位论文摘要品种膜结构、叶绿体、线粒体等亚细胞结构保持较完整，而感病品种亚细胞结构受损严重，膜结构、叶绿体、线粒体首先出现了紊乱迹象，其中C151在接种三天后，出现了叶绿体解体，线粒体外膜受损并进一步空泡化的现象。由此可见，在抗病品种叶片上分