检疫性害虫——枣实蝇分子生物学快速鉴定技术研究

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：程戚倒时间：加垆年石月13日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描

2、等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：径疏翎时间：加中年f月13日导师签名：用黝·涉雠时间：矽缈年∥月／3日万方数据lmIIllllllkilllllllllllllllllllllllllllllllllllY2697489本文是新疆维吾尔自治区林业科技专项资金项目“枣树重大检疫性生物灾害应急检疫监控技术研究’’和新疆维吾尔自治区科技计划项目“特色林果重大病虫持续高效

3、绿色防控技术研究’’(项目编号：201130102-3)的部分研究成果(新疆农业大学)万方数据检疫性害虫一枣实蝇分子生物学快速鉴定技术研究摘要枣实蝇(CarpomyavesuvianaCosta)是2007年首次在新疆吐鲁番地区发现的重大检疫性害虫，系在新疆乃至全国枣产业上有着重要经济意义的害虫。枣实蝇的鉴定是国内外枣贸易中最突出的技术问题之一，建立检疫性枣实蝇特别是未成熟虫态快速可靠的鉴定方法在植物检疫上有重要意义。本研究以国内普遍关注的检疫性害虫枣实蝇为研究对象，测定了枣实蝇的mtDNAC01和Cytb基因部分序列，将获得的基因片段与已公

4、开报道的其它同源序列进行比较分析，设计了枣实蝇15对引物基础上，应用种特异引物PCR(SS．PCR)和SYBRGreen实时荧光PCR技术，筛选出了枣实蝇的特异性引物，在此基础上研发了检疫性枣实蝇的分子生物学快速鉴定技术。主要研究结果如下：1．首次提取了枣实蝇基因组DNA，分别测定枣实蝇mtDNACOI两段不同的基因序列和cytb部分基因序列；首次将吐鲁番枣实蝇序列录入GenBank数据库，序列号分为HQ6S诌■10。JX515609和JXl01439。2．首次以目标枣实蝇线粒体DNA(mtDNA)qbCOI基因序列(GeIlBank序列号：

5、HQ687210)为目标序列，借助Mega4软件-0)NASTAR公司，美国)中CLUSTAL方法，与己知其它种类的实蝇的C01基因序列(包括本研究和其它公开报道的序列)进行比较分析，通过筛选获得能特异鉴定枣实蝇的引物l对，从而建立了枣实蝇特异引物PCR鉴定技术。3．本研究应用PCR--RFLP技术，将新入侵的检疫性害虫枣实蝇比对我国口岸截获频率较高的5种检疫性实蝇进行快速鉴定，其目的在于寻找出适用于新入侵检疫性害虫枣实蝇快速而又准确的鉴定技术。4．利用自行设计的特异引物，应用SYBRGreen实时荧光PCR技术，建立了SYBRGreen实时

6、荧光PCR(SG．PCR)快速鉴定枣实蝇的方法，SYBRGreen实时荧光PCR_『a：物特异性通过溶解曲线分析来确认。5．首次克隆了检疫性害虫枣实不同地理种群mtDNACOl基因从M7至COOH之间的片段，从而初步建立了枣实蝇的基因片段库，为枣实蝇的分子生物学鉴定和分子系统发育等相关研究提供数据。关键词：枣实蝇；检疫性实蝇：PCR-RFLP；SS．PCR；实时荧光PCR万方数据万方数据目录第1章绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1研究意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯．．11．2枣实蝇国内外研究现状及发展动态⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．3实蝇类害虫入侵及扩散研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。31．4本文研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．5技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15第2章枣实蝇的PCR法快速检疫鉴定技术研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．1材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯162．2结果分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1

8、82．3结果与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20第3章枣实蝇不同地理种群的线粒体Cytb基因序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯223．1材料与