电喷雾串联质谱分析附子炮制中的化学成分变化

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1、第35卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第7期2007年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry959-963电喷雾串联质谱分析附子炮制中的化学成分变化越皓，,2皮子凤‘赵宇峰，,2宋凤瑞‘刘志强，刘淑莹”，(中国科学院长春应用化学研究所，长春质谱中心，长春130022)2(中国科学院研究生院，北京100039)摘要利用电喷雾质谱方法(ESI-MS)分析了附子加辅料(甘草)炮制前后水煎液中二菇类生物碱在种类和含量方面的变化，通过加人内标化合物，建立了电喷雾质谱的半定量分析方法。此方法具有快速、准确、灵敏的特点，能够更加全面地反映中药配伍炮制过程中

2、多种化学成分的含量变化，并能根据电喷雾串联质谱的分析结果鉴定配伍后产生的新的化学成分，在共煎液中的次乌头碱、中乌头碱和乌头碱的相对含量分别是单煎液中的5.67%,4.05%和4.88%。通过研究附子与甘草的单煎液、共煎液以及药渣中化学成分的变化，揭示了甘草作为辅料，在炮制过程中对附子减毒作用机理。关键词附子，炮制机理，电喷雾串联质谱，-菇类生物碱1引言附子(Radixaconitilateralispreparata,RALP)是乌头属植物，具有镇痛、消炎、强心和抗癌等药理作用〔1-41。二菇类生物碱是附子的主要活性成分(表1)，包括双醋型、单醋型和脂类生物碱，其中双醋型生物碱毒性很大，乌

3、头碱、中乌头碱、次乌头碱的小鼠LD，分别为1.8mg/kg,1.9mg/kg和5.8mg/时’]。因此，附子需要通过炮制以达到减毒增效的目的，如淡附片是生附子与辅料甘草(RadixglycyrrhizaePreparata,RGP)和黑豆采用共煮加工炮制方法得到的药典用饮片，其中甘草是公认解附子毒性的药材，并被广泛应用于附子的炮制和配伍中。近年来，对于甘草解附子毒性的化学研究主要集中在共煎前后个别成分的定量分析〔6,71，对于多种化学成分的全面研究尚未见报道。目前，比较普遍的研究方法为薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)[6,8,91，选择性和灵敏度不高，且只能定性定量考察少数

4、化合物。电喷雾串联质谱(ESI-MS)具有软电离、高灵敏度和特异性强等优点，已经应用于附子成分的定性鉴定[’“〕及中药复方的成分变化等方面[”一’31。-菇类生物碱在电喷雾质谱条件下可形成质子化分子，每个离子峰代表分子量相同的一种或数种生物碱，其归属可通过文献数据和串联质谱结果确定。由于结构相似，该类化合物分子的电离能力相似，离子峰的相对丰度可以近似地反映同类生物碱的相对含量，所得数据具有很好的可重复性〔141。本研究利用电喷雾串联质谱对附子与甘草的单煎液、共煎液以及药渣的化学成分进行了分析，阐释了甘草在附子炮制过程中的减毒机理，通过添加内标化合物，建立了电喷雾串联质谱半定量检测附子加甘草

5、炮制前后化学成分含量变化的方法。表1乌头中乌头类生物碱的结构Table1StructureofaconitumalkaloidsinRadixaconitilateralispreparata分子结构Structure生物碱Alkaloids双酷型生物碱、乙酞基AceticacidDiester-diterpenoidalkaloids(DDAs)护单醋型生物碱经基OHMonoester-diterpenoidalkaloids(MDAs)脂型生物碱Lipo-alkaloids月旨肪酞基AfattyacidR1:甲基或7-基(methylorethyl);R3:是9基或氢(hydroxyl

6、orhydrogenous);R4:V基或氢(hydroxylorhydrogenous),2006-10-2s收稿;2007-03-30接受本文系国家自然科学基金(No.30472134)和中国科学院知识创新工程重要方向项目(No.KGCX2-SW-213-06)*E-mail;mslab@ciac.jl.en分析化学第35卷2实验部分2.1仪器、试剂与药材LCQ电喷雾质谱仪(美国Thermo-Finnigan公司)。甘草(长春市吉林大药房);生附子(四川江油饮片厂)，经过长春中医药大学王淑敏教授鉴定;乌头碱(批号110720-200410)、中乌头碱(批号0799-9403)、次乌头碱

7、(批号0798-9403),氢澳酸高乌甲素(批号10289-0001)对照品(中国药品生物制品检定所)。甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。2.2样品制备将生附子10g和甘草10g粉碎，粗粉加10倍量水浸泡20min，微沸提取2次，提取时间分别为40min,20min，过滤，药渣烘干备用(50cc)，合并滤液;加95%乙醇使醇浓度达到50%,24h后过滤，滤液减压浓缩至10mL;用10%氨试液调节pH9.5，用等量氯仿萃取