猪带绦虫新基因slc10的研究

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1、中国农业科学2008,41(4):1213-1218ScientiaAgriculturaSinica猪带绦虫新基因SLC10的研究1,21111111王颖,骆学农,郑亚东,丁军涛,侯俊琳,张少华,景志忠,才学鹏1(中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室,兰州730046;2新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052)摘要:【目的】克隆和表达猪囊尾蚴SLC10基因,明确其组织分布,为寻找猪囊虫病的新型疫苗或诊断候选基因奠定基础。【方法】以绦虫保守的反式剪接引导序列为基础,通过RT-PCR从猪囊尾蚴中克隆出来

2、的一个未知基因,将其在大肠杆菌中表达,用亲和层析纯化的重组蛋白作为包被抗原进行ELISA检测和免疫组织化学试验。【结果】将新基因命名为SLC10,其ORF为507bp,编码18.2kD的蛋白,基因组全长1107bp,由两个外显子和一个内含子组成。ELISA结果显示70份囊尾蚴阴性血清和75份囊尾蚴阳性血清都不与重组蛋白发生反应,免疫组织化学实验表明SLC10天然蛋白主要分布在除猪囊尾蚴头节以外的囊壁内部。【结论】SLC10蛋白为非分泌型结构蛋白,与诱导宿主产生抵抗囊尾蚴感染的体液免疫应答无关。关键词:猪带绦虫;剪切引导序列;SLC10ResearchofSLC10

3、–aNewGenefromTaeniasolium1,211111WANGYing,LUOXue-nong,ZHENGYa-dong,DINGJun-tao,HOUJun-lin,ZHANGShao-hua,11JINGZhi-zhong,CAIXue-peng1(KeyLaboratoryofVeterinaryParasitologyofGansuProvince,StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology,Lanzhou2VeterinaryResearchInstitute,ChineseAcademy

4、ofAgriculturalSciences,Lanzhou730046;CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi8320052)Abstract:【Objective】Cloning,expressionandimmunohistochemistryofSLC10geneinTaeniasoliumarenotonlyhelpfultoustounderstandthebiologicalcharacteresofTaeniasoliumbutalsohelpfultous

5、tofindthevaccineordiagnosticcandidates.【Method】Theunknowngenewasclonedbysplicedleader-basedPCRfromTaeniasolium.TherecombinantSLC10proteinwasexpressedinE.coliinafusionpatternandpurifiedbyaffinitychromatography.UsingpurifiedrecombinantSLC10protein,ELISAandimmunohistochemistrytestswerema

6、de.【Result】ThenewgenewasnamedSLC10.TheORFofSLC10wasfoundtobe507bp,encodingan18.2kDprotein.ThegenomicDNAofSLC10wasfoundtobe1107bpconsistedoftwoexonsandoneintron.ELISAresultsshowedthatalldetectedsera,including70normaland75cysticercosissera,didnotreactwithpurifiedrecombinantSLC10protein.

7、ImmunohistochemistryshowedthatthenativeSLC10proteindistributedmainlyininnercystwallsbutnotinthescolexinC.cellulosae.【Conclusion】Togetherwithpredictedresults,itissuggestedthattheSLC10proteinisanon-secretorystructuralprotein,notinvolvedininductionofthehost’simmunereactionsagainstinfecti

8、onatl

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