断奶前后健康仔猪与腹泻仔猪粪便菌群的比较研究

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1、中国农业大学硕士学位论文断奶前后健康仔猪与腹泻仔猪粪便菌群的比较研究姓名：王凯申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：王九峰20070601中国农业大学硕士学位论文·摘要目的利用PCR-DGGE技术分析断奶前后仔猪粪样细菌区系变化，并比较腹泻仔猪与健康仔猪粪样菌群的结构差异．方法选取各日龄(出生到断奶(301日龄)后两周)腹泻仔猪的粪便，同时取同窝、同性别，体重相近健康仔猪的新鲜粪便．提取粪便样品中细菌的混合mqA，再对其16srDNA的Ⅵ可变区进行PcR扩增，扩增产物经DC-6E电泳后进行相似性分析．同时，比较同

2、日龄腹泻仔猪与健康仔猪粪样DGGE谱带的异同，找出特征性带，回收测序后确定菌属．结果断奶前，仔猪粪样DGGE条带较少，f司窝仔猪谱带相似，有一些位置相同的条带．断奶后，随着时间的推移，图谱条带逐渐增多，仔猪个体间条带差异也逐渐增大．仔猪是否同窝对DGGE条带没有明显影响；同日龄腹泻仔猪与健康仔猪间DGGE条带有明显差异，多出现一到两条较明显的优势条带，特征条带经回收测序确定属于肠杆菌．结果表明，仔猪从出生到断奶前后，肠道优势菌群结构从单一到复杂。随着日龄的增长，优势菌群结构发生了明显改变；由于致病菌的优势定殖，导致腹泻

3、仔猪肠道菌群紊乱，较健康仔猪粪样细菌DGGE条带减少，但致病菌形成特征条带．本研究结果不仅可为仔猪腹泻的临床治疗提供参考依据，也可为今后研究仔猪腹泻时肠道通透性改变的机理，起到一定的借鉴作用．关键词交性梯度凝胶电泳(DGGE)；16SrDNA；断奶仔猪；粪样菌群AbstractPCRandde∞tI

4、l面ggradi∞tgdelecu'ophor∞is卿E)we∞usedtomonitorthedevelopmentofbacterialcemmunityinfh∞％ofweaning#gle乜．DGGE蛐岫isals

5、odevelopedforthe蚰蛐offecalfloraindiarrheaandhealthypiglets．ThereginusVjofthe16SrDNAoffaecalbac妇妇慨amplified．DGGEprofilesofthePCRmnplicousw粥comparedbysimilarityanalysis．ThecharacteristicprofilesofDGGEw帆CUtandrecycledbyPCR,aRcr∞quencetest,thebactmumtypewasdetermined

6、．Theresults缸dic弧edtim,DGGEofftx：alt6SrDNAam#iconsfrom30individualsshoweddifferentprofiles,pigletsfromthe$anaeSowbeforeweaningshowedsimilarDGGEprofiles,withs0111ebandsincolnmon．Afterweaning,asthepiglctsgrew,DGGEprofilesb

7、蜘Imccomplicatedanddivcrse．n”individualpigI

8、dhaditsuniqueDGGEbands’withlowsimilaritybetweenpiglets．11”SOUl'CcofsowshowednoapparenteffectontheDGGEprofiles．Comparedwithhealthypiglets，diarrheapigletsshowedmorethan∞edifferentDGGEban正ItbelongstoEacherichiacoliusing∞口u∞∞test．Thecmrentstudyshowedthatthediversity

9、ofthepredominantbacteriainweaningpiglets'gastrointestinaltracthasobviouschangeduringtheweaningpefiodBecausethebacteriacausingthediarrheadiseaseW雒predominantlyproliferated,itshowedtypicalband011theD(粥Egd。andthediarrheapiglcFintestinalbacterialcommunityweredisorde

10、red．hconclusion,thepresentresultsnotonlyprovidetheadvisoryopinionstOtheclinicaltreatmentofdiarrheapiglets．butalsogivesomcguidestotheresearchofthemechanismsoftheintest