肠外致病性大肠杆菌ⅵ型分泌系统的功能研究

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1、分类号：华中农业大学硕士学位论文密级：肠外致病性大肠杆菌Ⅵ型分泌系统的功能研究AFunctionalstudyoftypeⅥsecretionsysteminExtraintestinalpathogenicEscherichia、Coli研究生：寿瓒学号2010302110175指导教师：吴斌教授指导小组：吴斌教授陈焕春院士何启盖教授周锐教授贝为成教授。谭臣副教授专业：预防兽医学获得学位名称：农学硕士研究方向：动物传染病获得学位时间：2013年6月华中农业大学动物医学院二。一三年六月国家自然科学基金重点项目：肠外致病性大肠杆菌基因组学与分子致病机制的研究(No．31030065)项目

2、资助华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文刁是否保密龟如需保密，解密时间年月日IIIIIIPIrllPrlIIIIllI独创性声明Y2394078本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究"1-作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。■．研究生签名：兹镏L时间：细l；年石月f。日学位论文使用授权书本人完全了解华中农业大学关于

3、保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播_y-位论文的全部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。注：保密学位论文(印涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论文)在解密后适用于本授权书．学位论文作者张尝缱锄橼采知吣签名日期：加哆年占月lo日签名日期：≯I；年6月／o日肠外致病性大肠杆菌Ⅵ型分泌系统

4、的功能研究目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．iAbstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯iii缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯vi1文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1革兰氏阴性菌蛋白质分泌系统的概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2Ⅵ型分泌系统的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21．2．1Ⅵ型分泌系统的概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．21．2．2Ⅵ型分泌系统分子结

5、构的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31．2．3Ⅵ型分泌系统功能的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一61．2．4大肠杆菌Ⅵ型分泌系统的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一91．3肠外致病性大肠杆菌的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．102研究目的与意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯143．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯143．1．1菌株、质粒、细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯143．1．2酶及

6、其它试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯163．1．3主要培养基及试剂配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯173．1．4试验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯173．1．5PCR引物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯173．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯183．2．1细菌培养与分子生物学基本操作⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯183．2．2肠外致病性大肠杆菌Hcpl多克隆抗体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯183．2．3肠外致病性大肠杆菌分泌蛋白的提取及Hcpl蛋白的鉴定

7、⋯⋯⋯⋯193．2．4肠外致病性大肠杆菌缺失突变株PCN033Ahcp3的构建⋯⋯⋯⋯⋯193．2．5肠外致病性大肠杆菌缺失突变株PCN033Ahcp3生长曲线的绘制⋯．213．2．6肠外致病性大肠杆菌缺失突变株PCN033Ahep3肺泡巨噬细胞吞噬存活试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．213．2．7肠外致病性大肠杆菌缺失突变株PCN033Ahcp3对PKl5细胞粘附与入侵试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯