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《电化学发光免疫检测技术研究进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)评述与进展第8期2010年8月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1219~1226DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.01219电化学发光免疫检测技术研究进展1,2*12张军瑞陈健刘仲明12(华南理工大学轻工与食品学院,广州510640)(广州军区广州总医院医学实验科,广州510010)摘要本文介绍了电化学发光的发展状况和最新研究方向,综述了近年来电化学发光免疫检测技术的应用和研究进展,并展望了电化学发光免疫检测技术的发展前景。关键词电化
2、学发光免疫检测;抗原;抗体;综述1引言免疫检测法具有快速、灵敏、选择性好等特点,被广泛应用于临床诊断、法医学、药物学和环境科学等[1~6]领域。近年来,随着对免疫传感器的深入研究,发展了多种检测技术,包括电化学、光学、压电检测、放[7~12]射免疫分析法和电化学发光检测法等。其中较常用的放射免疫分析法涉及环境污染问题,酶免疫分析法受到酶保存和检测灵敏度的限制;时间分辨荧光免疫法有光的散射和杂光的干扰等问题,限制了其在免疫方面的应用。电化学发光是一种由于电化学反应引起的化学发光现象。1960年,研究者初次详细报[13~15][16~25]道了红荧烯和类缘化合物电化学发光,近年来也发表了多篇
3、关于电化学发光的综述。电化学[26~30]发光因检测范围宽、灵敏度高、信号干扰低、操作简单等优点已在免疫检测领域得到广泛应用。2电化学发光免疫检测的研究2.1鲁米诺及其衍生物做标记2.1.1鲁米诺及其衍生物电化学发光的研究鲁米诺在一定条件下可被一些氧化剂氧化,发生化学发光反应,辐射出最大发射波长为425nm的化学发光。鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、4氨基已基N乙基异鲁米诺、N(4氨基已基)N乙基异鲁米诺(AHEI)和N(4氨基丁基)N乙基异鲁米诺(ABEI)等。虽然目前对于鲁米诺电化学发光反应机理尚未形成统一的认识,但鲁米诺及其衍生物是电化学发[31][32]光
4、最常用的发光标记物质之一,已得到广泛研究。Yang等研究了ABEI在+1.0V(Ag/AgCl)氧化电位的碱性溶液中可以发光,加入H2O2可以显著增强其化学发光的强度,溶液的pH值、H2O2的浓-6度和工作电位都对电化学发光的响应度产生影响。在最佳条件下,ABEI的检测范围为1.310~-12-12[33]6.510mol/L,在信噪比(S/N)为3时,ABEI的检出限为2.210mol/L。最近,Chu等研究了中性溶液中反应氧对鲁米诺电化学发光强度的影响,结果显示,反应氧无论是溶解于溶液中还是固定在常规的电极表面,都可以显著增强鲁米诺的化学发光信号。[34,35]近年来,人们通过各种
5、方法提高电化学发光的检测灵敏度,包括使用新的或多种标记物、探索[36~39][38]新的电极材料。Dong等的研究结果表明,在中性溶液中,鲁米诺在纳米金修饰的电极上可以产生强烈的化学发光。发光强度不仅和纳米金有关,还受电极的影响,金电极和玻璃碳电极是比较好的电极,而且纳米金修饰的金电极和玻璃碳电极还具有良好的稳定性和重复性,并且不需要对电极做预处理。电化学发光强度还受纳米金颗粒大小的影响,用直径为16nm的纳米金修饰电极可以产生较强烈[39]的电化学发光。Wang等用银纳米修饰金电极,将其作为工作电极,研究了鲁米诺在中性和碱性溶液中的电化学发光,结果表明,无论在中性还是碱性溶液中,鲁米诺在银
6、纳米修饰的金电极上都可以产生很强烈的发光,并且重复性良好。[40]2.1.2鲁米诺及其衍生物做标记的电化学发光免疫检测早期,Tanaka等依据结合的抗原可以抑20091217收稿;20100312接受本文系国家科技支撑计划(No.2006BAD27B04)资助*Emai:lfejchen@scut.edu.cn1220分析化学第38卷制鲁米诺电化学发光的原理建立了一种电化学发光免疫分析方法检测人免疫球蛋白(hIgG)。首先将鲁米诺标记在抗体上,当加入抗原时,抗原与抗体结合,抑制其化学发光,加入的抗原的浓度和电化学发-12-8光强度减弱的程度相一致,据此可以得知加入抗原的量
7、。此方法的检测范围是10~10g/mL。但该方法的免疫反应达到平衡的时间较长(数小时)。此后他们又改进了方法,即优化免疫反应的条件,[41]-8利用同样的原理检测了血清中的肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP),检出限为10g/L,抗原抗体的结合时间缩短到5min。由于标记后的鲁米诺其发光效率明显降低,研究者对适用于作标记的鲁米诺衍生物[42]进行了研究。庄惠生等用自制的异硫氰酸异鲁米诺(ITCI)标记AFP抗体,包
