检验方法目录

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1、附件3消毒产品中氯霉素（chloromycetin）测定-液相色谱-串联质谱法Methodfordeterminationofchloromycetinindisinfestionproduct-LC-MS-MSmethod1范围本方法规定了膏霜类消毒产品中氯霉素残留量液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于膏霜类消毒产品中氯霉素残留量的测定。取样量为0.2g时，本方法氯霉素的检出限0.03mg/kg。2规范性引用文件3原理试样中氯霉素用甲醇提取，提取液经0.45μm滤膜过滤，用C8柱分离后，用液相色谱-串

2、联质谱仪测定，负离子扫描，离子对定性，峰面积定量。4试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为不含有机物的纯水，纯水中干扰物的浓度需低于方法中待测物的检出限。4.1甲醇：农药残留级。4.2标准品：氯霉素标准品购自北京利科生化科贸有限公司，纯度≥99%。4.3标准溶液：准确称取适量的氯霉素标准品，用甲醇（4.1）配制成10.0mg/mL标准贮备溶液。准确量取上述标准贮备溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度为500µg/mL的标准中间溶液，将标准中间溶液转移到安瓿瓶中于4°C保存。临用前，再根据需要用甲醇配制成

3、不同浓度的标准使用溶液。4.30.45μm滤膜。-26-5仪器5.1液相色谱一串联质谱联用仪：HP1100高效液相色谱仪(Agilent)-API4000质谱仪(AppliedBiosystems)，电喷雾离子化源(ESIMS，NI/PI模式)。5.2分析天平：感量0.1mg和0.001g。5.3实验室纯水机：Barnstead纯水机。5.4涡旋振荡器：ScientificIndustries涡流振荡器。5.5具塞试管：10mL。6试样的制备与保存6.1试样的制备取有代表性样品5g，搅拌均匀，制成实验室样品

4、。6.2试样保存制备好的试样置于室温保存。7测定步骤7.1样品前处理称取0.1~0.2g样品(精确到0.001g)，置于10mL试管中，加入3.00mL甲醇溶液，涡旋振摇使样品分散后，超声振荡10min。静置，吸取上清液经滤膜（4.3）过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。7.4测定7.4.1液相色谱条件a）色谱柱：ZORBAXEclipseXDB-C8，5μm，150×4.2mm；b）柱温：25℃；c）流动相：甲醇+水（60+40），等度淋洗10min；d）流速：300μL/min；e）进样量：10µL。7.

5、4.2质谱条件-26-a）离子化方式：热喷雾电离(TSI)；b）扫描方式：负离子扫描；G）检测方式：多反应监测（MRM）；d）碰撞气(CAD)：11.0psi；e）气帘气(CUR)：14.0psi；f）雾化气(GS1)：35.0psi；g）加热气(GS2)：25.0psi；h）喷雾电压(IS)：-4500V；i）去溶剂温度(TEM)：350°C；j）碰撞室射出电压（CXP）：-16V;k）定性离子对、定量离子对、扫描时间、碰撞气能量和去簇电压，见表1。表1氯霉素的定性离子对、定量离子对、扫描时间、碰撞气能量

6、和去簇电压化合物定性离子对（m/z）定量离子对（m/z）扫描时间Dwelltime（ms）碰撞气能量CE（eV）去簇电压DP（V）氯霉素321.0/151.0321.0/151.0100-18-40321.0/255.2100-18-407.4.3液相色谱-串联质谱测定7.4.3.1定性测定用氯霉素的定性离子对（m/z321.0/151.0和321.0/255.2）进行定性。7.4.3.2定量测定将标准中间溶液用甲醇稀释配制成0-500ng/mL的标准使用溶液，在仪器最佳工作条件下，标准使用溶液分别进样，以

7、标准使用溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。采用外标法进行定量测定。样品溶液中氯霉素的响应值应在标准曲线线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，氯霉素标准物质液相色谱-串联质谱的多反应监测（MRM）色谱图参见图A.1。7.5平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定，平行测定相对偏差应小于10%。-26-7.6空白试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8结果计算样品中氯霉素的质量分数可按式（1-1）计算：式中，j-¾消毒产品中氯霉素的质量分数，mg/kg；r1-¾从回归方程中

8、查出测试溶液中氯霉素的质量浓度，ng/mL；V1-¾提取溶液体积，mL；ｍ-¾称样量，g。9精密度和准确度同一实验室对实际样品和加标样品重复测定，相对标准偏差为4.0%(数据参见附录B)。低浓度平均回收率为77.2%，相对标准偏差为8.4%；高浓度平均回收率为109%，相对标准偏差为9.5%(本方法的添加回收率数据参见附录C)。-26-附录A(资料性附录)氯霉素标准物质多反应监测(MRM)色谱图氯霉素标准物质多反