一种特异性识别非小细胞肺癌a549细胞的小分子肽

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1、万方数据。。一一，一。一。i。。一～一一一一一一。一—。。纛，ReSearChPapersPI臼1]裁鬻嘶岫Ⅵw哪．Dibb．蹰．c“一种特异性识别非小细胞肺癌A549细胞的小分子肽4郭琳琅D”郭颖1’DERIcKLAu”许寅超1’(哺方医科大学珠扛医院，广州510282；4‰P雎盼矿c讲扣m缸时踟厶c缸c盯ce，妇^usA)摘要应用～个珠子一个化合物”的组合化学肽库，以期筛选得到特异性识别非小细胞肺癌细胞(A549)的小分子肽．初次筛选共得到29个与A549刚性结台的珠子，经氨基酸序列分析后发现含有．NGxG．肽链结构的序

2、列共有10个．选择dNGQGEQc作进一步的细胞特异性研究，发现cNGQGEQc与非小细胞肺癌A549、calu．1及H178的粘附特异性明显高于其他细胞系，对cNGQGEQc的结构分析显示，-NGx0一及六肽长度对小分子肽与A549细胞的粘附非常重要标记FITc的小分子肚cNGQGEQc能与A549细胞发生特异性结合．用抗整台素的抗体(俚I～6，av和B1～5)阻断小分子肽与A549细胞表面的相应受体结合，结果显示，d3与B亚单位的任何组合均对cNGQGEQc与A549细胞的粘附有明显的阻断作用结果表明，小分子肽cNGQG

3、EQc是通过细胞表面整合素a3与非小细胞肺癌A549发生特异性结合．关键词小分子肽，组合化学，非小细胞肺癌学科分类号Q516，R734．2肺癌目前在我国城市恶性肿瘤的发病中已居于首位，且其发病率仍呈明显上升趋势．肺癌患者的预后差，平均存活时间仅为1年，一方面是因为尚未建市早期、特异性的筛选或诊断方法，患者在明确诊断后病程往往已发展垒中、晚期，部分已发生转移，另一方面，缺乏理想的治疗手段，临床观察仅约20％的非小细胞肺癌患者对抗癌药物有一定疗效，且副作用大，对骨髓造血等重要脏器的功能有严重的抑制作用．建立肺癌早期、特异性的诊断

4、和治疗方法已成为临床肿瘤学亟需解决的重点问题之一．尽管单克隆抗体仍是目前l临床肿瘤诊断和治疗的主要研究课题之一，但近年来，小分子肽与单克隆抗体相比，因其细胞穿透力强，稳定性好而日益受到人们的重视，有望成为肿瘤临床应用研究的一个崭新的重要方向【11．1991年Lam等㈣提出并建立了“一个珠子一条肽链”的组合化学肽库技术，利用该技术可同时对数万种肽链进行筛选，筛选效率很高．目前国外学者已成功筛选得到特异性识别不同瘤细胞的小分子肽M．本研究利用六肽组合化学肽库筛选能与非小细胞肺癌细胞(A549)粘附的小分子肽，通过对其特异性和结构

5、稳定性的分析，从而得到特异性好且稳定性强的小分子肽，有望为非小细胞肺癌的特异性诊断及治疗提供新的方法．1材料与方法1．1组合化学肽库组合化学肽库的设计是利用化学合成的方法把20种氨基酸随即合成在～种树脂胶的珠子上，珠子直径70～90“m，根据实验需要可以合成含有不同长度肽链的肽库，本实验采用6个氨基酸长度的肽库．理论上，6个氨基酸长度的肽库含有20k6．4×l07种不同的小分子肽链．具体实验原理和操作方法参见文献[2，3]．1．2细胞培养本实验所用细胞株包括A549(肺腺癌)，Ca】u—l(肺鳞癌)，H178(肺腺鳞癌)，D

6、Ms53(小细胞肺癌)，皿E(非肿瘤性支气管上皮细胞)，Pc．3(前列腺癌)，hlcap(前列腺癌)，SKoV-3(卵巢·广东省科技计划项目(2002c5050107)和广州市科技攻关项目(200322一E006l，E0063)．¨通讯联系人．1q：020．6l“3495，E—m面l：Iinlan站@yahoo．com收稿日期；2007-02．27，接受日期：2007。04．02万方数据2∞7．34(10)郭琳琅等：一种特异性识另Ⅱ非小细胞肺癌As孵细胞的小分子肽．1081．癌)。HT-29(结肠癌细胞)，Jllrkel(T

7、淋巴瘤细胞)，髓62(白血病细胞)，喇i(伯基特淋巴瘤)均来自11leAmeric∞1Ⅶe(ⅫtureCollecnon(A1℃C)．船E，Jurket，K562，Luc叩细胞使用RPM【培养液，其他细胞系均使用DMEM培养液．细胞置于37℃，5％c0：的培养箱中培养．1．3小分子肽的筛选吸取200m(约15000个)的小分子肽珠子，PBs缓冲液和70％乙醇各洗3次。然后细胞培养液洗2次．转移小分子肽珠子至6孔的细胞培养板(约5000个／孔)．用胰蛋白酶／EDTA消化细胞。离心除去消化液，加入lOml的培养液重新使细胞悬浮，

8、每孔加入O．5ml的细胞悬液．摇动培养板，使细胞和珠子充分混合，然后置培养板于37℃，5％C02的培养箱中培养48h．48h后，在显微镜下挑选与细胞结合的阳性珠子，以珠子上结合细胞的数量来判定细胞与小分子肽结合力的强弱，评定标准设为：珠子全被细胞包裹。结合力为++++；l／2～3／4珠子表