侵袭性牙周炎患者牙龈组织中胶原酶及timp-1的表达研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文侵袭性牙周炎患者牙龈组织中胶原酶及TIMP．1的表达研究ThestudyofcollagenasesandTIMP一1ingingivaltissueofpatientswithaggressiveperiodontitis一■一课题来源：基金项目：广东省科技计划项目(00204390134483040)学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层欣柱聿岳新新赵红宇口腔临床医学全日制专业型次硕士研究生院研究生学院2013年3月20日广州硕士学位论文mIIIIIIIIIIMIMIII

2、IIHl

3、wlw,=Y2405916侵袭性牙周炎患者牙龈组织中胶原酶及TIMP一1的表达研究硕士研究生：岳新新指导教师：赵红宇摘要牙周疾病作为人类口腔发生率较高的疾病之一，与龋病统称为人类两大口腔疾病。侵袭性牙周炎(aggressiveperiodontitis，AgP)是一类发病年龄早、病程进展快、破坏程度大、有家族聚集性的牙周疾病。AgP的发病因素多样，发病机制复杂。越来越多的证据表明，人类牙周疾病牙周支持组织的破坏过程中，结缔组织的降解和牙槽骨的破坏主要是通过诱导活化宿主细胞酶来实现的。基质金属蛋白酶(m

4、atrixmetalloproteinases，MMPs)和基质金属蛋白酶抑制因子一l(tissueinhibitorsofmetalloroteinases。1，TIMP—1)在牙周疾病中的作用近年来引起众多学者的关注。该组蛋白水解酶主要通过对细胞外基质中大分子降解作用的调节，参与人体众多正常的生理过程和病理过程。MMPs与TIMP一1在正常的牙周组织中保持平衡，参与牙周组织的改建。而当在某些刺激因子或炎症的作用下，会引起MMPs发生过度分泌或其活性被激活，导致MMPs与TIMP．1的比例超出正常所在范围。研

5、究表明MMPs及TIMPs的失衡可能是激活细胞外基质、基底膜细胞过度降解的重要原因，从而导致牙周软组织和牙槽骨组织胶原的破坏与丧失，进一步导致牙周疾病的发生。间质胶原酶(collagenases)是MMPs的第一大类，主要成员包括MMP一1、MMP．8和MMP一13。其中MMP．1又被称为成纤维细胞型胶原酶(fibroblastcollagenase，FIB-CL)，主要来源于成纤维细胞、吞噬细胞和上皮细胞等，优先降解III型胶原。有研究认为MMP一1是局限型侵袭性牙周炎中参与牙周组织破坏的胶原酶，尤其是对胶原

6、降解的始动作用。MMP一8又被称为中性粒细胞型胶原中文摘要酶(neutrophilcollagenase，PMN．CL)，是目前有关炎性牙周组织和龈沟液中MMPs表达研究中最多的一种，主要由多形核中性粒细胞产生和分泌，MMP．8主要参与工型胶原纤维的破坏，而I型纤维胶原又是牙周膜和牙槽骨组织的主要胶原组成成份。MMP．13是上皮组织中首要表达的胶原酶，且在多种牙周组织和细胞中表达，与组织中胶原纤维的快速转变密切相关，MMP．13对II型胶原酶的活性较其他胶原酶更具影响力。TIMP．1是MMPs的内源性抑制因子，

7、可以和大多数MMP结合，被认为是MMPs的重要内源性抑制因子之一。近年来，大量研究表明胶原酶及TIMP．1水平及活性与慢性牙周炎关系密切，但有关胶原酶及TIMP—l水平在亚洲人群AgP患者中的研究尚未见报道。目的：本实验通过检测MMP．1、MMP．8、MMP．13及TIMP．1在侵袭性牙周炎牙龈组织中的表达，与牙周临床指标相结合，了解MMPs及TIMP．1与AgP牙周炎症程度的相关关系，并将MMPs及TIMP．1比值作为新的指标进行分析，进一步分析MMPs及TIMP．1的平衡在AgP发展中的作用。方法：1．病例

8、选择。实验组：选择来自广东省口腔医院牙周科和番禺分院牙周科就诊的30例侵袭性牙周炎患者(平均年龄29．37岁)。诊断标准依据1999年国际研讨会牙周病分类法提出的标准。对照组：选择来自广东省口腔医院外科就诊的因阻生齿、错位牙、埋伏牙而需要拔牙的20例牙周健康者(平均年龄26．35岁)，所有患者无全身性疾病，6个月内未服用抗生素，未经任何牙周治疗等，并签署知情同意书。2．样本采集。对纳入患者在其治疗前采用Florida探针进行全1：3牙齿的探查和记录。记录指标包括菌斑指数、探诊深度、出血指数、附着丧失，松动度以及

9、根分叉病变，牙周炎患者拍摄全口根尖片。在符合侵袭性牙周炎标准不能保留牙齿拔除过程中获得牙龈标本，对照组在阻生牙等拔除术中采集牙龈标本。蒸馏水冲洗后，置于4％多聚甲醛中固定12-24h。U硕士学位论文3．免疫组织化学检测。对固定样本行脱水，透明，石蜡包埋，制成3unl的连续切片，采用多聚赖氨酸防脱片，60℃烤片2h。行MMP．1、MMP．8、MMP-13及TIMP．1常规免疫组织化学方法