中国科技大学-遗传学实验

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1、遗传学实验张文锐黄丽华高永翔编中国科学技术大学生命科学学院实验教学中心75目录实验一有丝分裂（Feulgen染色）制片技术　3实验二减数分裂制片技术　　　　　　　　　　　　　　　　　7附：临时制片与永久制片技术实验三果蝇的形态、生活周期及饲养11实验四果蝇的伴性遗传16实验五果蝇的唾腺染色体制片技术20实验六粗糙链孢霉的杂交23实验七　染色体数目变异27实验八染色体结构变异29实验九诱变物质的微核测定33实验十基因分离的验证34实验十一自由组合规律的验证37实验十二人类ABO血型检查40实验十三人类X染色质的观察42实验十四小白鼠骨髓细胞染色体制片技术45实验十五小白鼠骨髓细胞染

2、色体显带（Ｃ带）技术48实验十六人体外周血淋巴细胞培养及染色体制片51实验十七人类染色体核型分析54实验十八植物染色体组型分析57实验十九植物染色体显带技术和带型分析61实验二十同功酶遗传标记分析65实验二十一荧光原位杂交实验70附录一：X2测验表7575实验一有丝分裂（Feulgen染色）制片技术一、实验目的1、通过本实验的学习，初步掌握植物染色体制片，奠定细胞遗传学研究的基本技术；2、通过对植物根尖细胞的观察，掌握有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化；3、掌握Feulgen染色方法。二、基本原理有丝分裂（mitosis）是植物细胞分裂的主要方式，细胞分裂过程中，核内染色体

3、准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中去，保证了植物细胞的遗传性状的一致。各种生长旺盛的植物组织中，如根尖组织、茎尖组织、居间分生组织、愈伤组织等，每天都有分裂高锋时间，此时经预处理，固定、解离、染色和涂抹压片等方法，在显微镜下可以观察到处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。孚尔根染色法是鉴别细胞中DNA反应的组织化学方法。细胞内的DNA(通常位于核及染色体上)在1NHCl60℃水解时部分地破坏了脱氧核糖与嘌呤碱之间的糖苷键而使嘌呤碱脱掉，从而使脱氧核糖的第一个碳原子上潜在的醛基获得了自由状态。而无色的亚硫酸品红是由偏重亚硫酸钠、盐酸和碱性品红配制成的。偏重亚硫酸钠与盐酸能

4、产生亚硫酸根，当具有醌式结构的碱性品红分子与亚硫酸根结合后，醌式结构的共轭双键被打开，碱性品红变为无色。当用这种无色的亚硫酸品红去染经酸解的细胞时，就会与染色体DNA上游离的醛基结合，又出现了呈现红色的醌式结构，从而使DNA分子着色。这一反应是1924年由Feulgen和Rossonbek所发现和确定的，已广泛用作鉴别DNA的一种特异性检查方法。三、材料和器材1、实验材料：蚕豆（Viciafaba,2n=12）（或其它植物）干种子；洋葱（Alliumcepa,2n=16）根尖。752、实验仪器及用具：水浴锅(60℃水浴)、显微镜、培养箱、电子天平、酒精灯、100℃温度计、具塞试管

5、、吸管、滤纸条等。3、药品和试剂：卡诺氏固定液（冰醋酸:无水酒精=1:3）、秋水仙碱（或8－羟基喹啉）、无水乙醇、1NHCl、45%醋酸、0.2%秋水仙素、碱性品红、偏重亚硫酸钠（钾）Schiff试剂的配制Schiff试剂：即脱色亚硫酸品红。溶解1g碱性品红于200ml煮沸的重蒸馏水中，轻加摇动。继续煮5分钟使之完全溶解，冷却至50-55℃时过滤到棕色试剂瓶中，冷却至25℃时，加入20ml1NHCl和1-3g偏重亚硫酸钾(K2S2O5)或偏亚硫酸钠(Na2S2O3)。摇动使溶解，密闭瓶口置黑暗低温处或冰箱内(4℃左右)18-24h后检查。溶液呈无色透明或淡黄色即可。如有不同程度的

6、红色，可加入0.5-1g活性炭，激烈震荡1分钟，仍在低温下静止1小时或过夜。然后用粗滤纸迅速过滤后使用。密封瓶口，包以黑纸，在0-5℃可以保存5-6个月。偏重亚硫酸钾(K2S2O5)或偏亚硫酸钠(Na2S2O3)与1NHCl反应，放出SO2、SO2与碱性品红反应生成碱性品红——亚硫酸溶液，呈无色。漂染液的配制取10%亚硫酸钠10ml，加200ml蒸馏水，再加10ml1NHCl即可。四、实验方法和步骤1、材料准备（1）、蚕豆根尖：选取新鲜无病斑的蚕豆干种子，经日晒后，放在烧杯内，室温下清水浸泡一昼夜。种子吸水膨胀后，20℃左右保湿培养（双层纱布覆盖），待根长1－2cm时，于上午9:

7、00－10:30或下午14:00－16:00剪下根尖备用。（2）、洋葱根尖：通过休眠的洋葱鳞茎，经日晒后，置于盛有清水的小烧杯上，根部与水接触，20－25℃光照条件下培养2－3天，待根长1－2cm时，于上午9:00－11:00剪下根尖备用。2、预处理为获得较多中期分裂相的细胞，且75使染色体缩短和分散，可对根尖进行预处理，方法如下（取其一即可）：（1）、0.05％－0.2％的秋水仙碱水溶液处理2－4小时；（2）、0.002M的8－羟基喹啉溶液处理3－4小时；(3)、根尖浸在蒸馏水